一种LMH细胞的培养方法技术

本发明专利技术提供了一种无血清培养LMH细胞的方法，先通过设置高糖DMEM培养基中血清含量梯度对LMH细胞进行逐代驯化，再使用不含血清的高糖DMEM培养基对LMH细胞进行分散传代培养。利用本发明专利技术所述方法培养的LMH细胞可进行特定病毒的大规模培养，有效地改善了LMH细胞贴壁培养的技术工艺，在极大地降低了生产成本的同时能够保证病毒的效价，在实际生产中具有潜在的优势和巨大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种LMH细胞的培养方法
本专利技术属于生物制品
，具体地涉及一种LMH细胞的培养方法。
技术介绍
随着细胞培养技术的进步及研究和生产的需要，鸡肝癌细胞(LMH细胞)已逐渐成为使用最为频繁的细胞系之一。目前，LMH细胞已可成功用于鸡传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotracheitisvirus,ILTV)、禽类腺病毒(FowlAdenovirus，FADV)等全病毒的培养及多种蛋白的表达。随着高密度细胞培养容器的推广及生物制品质量安全标准的提高，LMH细胞的培养具有广泛的应用前景。然而，由于在细胞培养过程中培养基的造价昂贵，特别是需要加入较高百分比的血清，使得该种培养方式的生产成本一直不下，对LMH细胞培养的放大与推广造成了一定阻碍。
技术实现思路
本专利技术针对LMH细胞培养过程中造价较高的缺陷，提供了一种成本低廉的LMH细胞培养方法。为实现上述目的，本专利技术提供一种LMH细胞的培养方法，先通过设置高糖DMEM培养基中血清含量梯度对LMH细胞进行逐代驯化，再使用不含血清的高糖DMEM培养基对LMH细胞进行分散传代培养。所述血清含量梯度为：10％CS、8％C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种LMH细胞的培养方法，其特征在于，先通过设置高糖DMEM培养基中血清含量梯度对LMH细胞进行逐代驯化，再使用不含血清的高糖DMEM培养基对LMH细胞进行分散传代培养。

【技术特征摘要】
1.一种LMH细胞的培养方法，其特征在于，先通过设置高糖DMEM培养基中血清含量梯度对LMH细胞进行逐代驯化，再使用不含血清的高糖DMEM培养基对LMH细胞进行分散传代培养。2.根据权利要求1所述的LMH细胞的培养方法，其特征在于，所述血清含量梯度为：10％CS、8％CS、5％CS、3％CS、1％CS、0％CS。3.根据权利要求1或2所述的LMH细胞的培养方法，其特征在于，所述逐代驯化的参数为：37℃，CO2含量为3％。4.根据权利要求1-3任一所述的LMH细胞的培养方法，其特征在于，在逐代驯化过程中，每次驯化前使用1‰明胶溶液处理培养容器，处理条件为：37℃处理12h以上。5.根据权利要求1-4任一所述的LMH细胞的培养方法，其特征在于，在逐代驯化过程中，每24h取样须测定培养基中糖含量；当糖含量低于3.0g/L时应进行换液。6.根据权利要求1所述的LMH细胞的培养方法，其特征在于，所述LMH细胞的培养方法包括如下步骤：(1)使用血清含量10％CS的高糖DMEM培养基对LMH细胞进行培养，至细胞生长至80％-90％密度，使用胰酶对细胞进行消化和分散；(2)使用血清含量10％CS的高糖DMEM培养基中和去除胰酶后进行分散传代，其后使用含有血清8％CS的高糖DMEM培养基进行补液培养，至细胞生长至80％-90％密度；(3)将含有血清8％CS...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁野，岳建新，周蕾蕾，陈秋阁，张贺楠，孙灵睿，李爱君，李浩鹏，张秀美，
申请(专利权)人：乾元浩生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11