一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法，首先用分子量较大的缓释材料包封含有IGF‑I的质粒，制备成缓释微球，再将微球与分子量较小的PLGA以及含BMP‑2质粒用超临界CO2与粒子沥滤的方法制成三维多孔组织工程材料。当材料植入体内时，由于BMP‑2质粒无缓释微球包封，其周围分子量较小的本体材料首先降解，BMP‑2质粒首先释放；IGF‑I质粒则由于分子量较大的材料包封而延迟释放，可以获得两种目的基因按一定先后顺序释放的效果。这种材料可以模拟组织修复的生理过程时序表达细胞因子，更有利于组织再生，减少全身副作用，基因产物可以局部持续释放，可最大限度地增加局部治疗效果。

Preparation method of a two gene sequential sustained release tissue engineering scaffold material

The invention discloses a method for preparing a double gene sequence of slow-release scaffold materials in tissue engineering, first with a larger molecular weight sustained-release material encapsulation containing IGF I plasmid, prepared into microspheres, the microspheres with smaller molecular weight PLGA and BMP containing 2 plasmid by supercritical method CO2 and particle leaching into 3D porous scaffolds for tissue engineering. When the materials implanted in the body, because the BMP 2 plasmid without microsphere encapsulation, body material around the smaller molecular weight degraded first, BMP 2 plasmid I plasmid IGF first release; due to high molecular weight material encapsulation and delayed release, can obtain two target gene according to certain sequence released effect. This material can simulate the physiological process of tissue repair, and express cytokines in time. It is more conducive to tissue regeneration, reduce systemic side effects, and gene products can be locally sustained release, which can maximize the effect of local treatment.

【技术实现步骤摘要】
一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法
本专利技术涉及医用材料领域，更具体的说是涉及一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法。
技术介绍
骨组织修复是一个复杂的过程，涉及多能干细胞分化增殖、细胞外基质与信号分子的识别、相关因子的表达及靶向作用和新骨的发育成熟等一系列链式过程。其中各种成骨因子如骨形态发生蛋白家族、成纤维细胞生长因子、转化生长因子β、血小板源性生长因子、血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子等，都在这一过程中起着重要的调控作用，而且它们之间存在一定的时相、位点规律和协同/拮抗关系。将各种成骨因子或负载有成骨因子的控释载体应用于骨缺损区域以刺激成骨，已被证明有显著的效果。可是这些因子造价昂贵、半衰期短、容易变性；将基因复合在支架材料上，通过支架材料调节基因的缓释，这些材料释放的基因进入缺损区周围的修复细胞，表达蛋白质，在蛋白质的作用下靶细胞被刺激分化，通过自分泌或旁分泌的方式达到促进骨愈合的目的，很好地克服了以上缺陷。现在的比较成熟的多孔支架材料的制备方法都常常不可避免地要用到有机溶剂或者需要高温环境，对材料中复合的生物活性物质有不利影响。近年来开始将超临界本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、构建和扩增rhBMP‑2和rhIGF‑Ⅰ质粒；步骤二、制备rhBMP‑2DNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒的制备；步骤三、制备rhIGF‑ⅠDNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒；步骤四、制备含rhIGF‑ⅠDNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒的PLGA缓释微球；步骤五、制备含有rhBMP‑2和rhIGF‑Ⅰ的双DNA/聚乙酰亚胺的PLGA组织工程复合材料。

【技术特征摘要】
1.一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、构建和扩增rhBMP-2和rhIGF-Ⅰ质粒；步骤二、制备rhBMP-2DNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒的制备；步骤三、制备rhIGF-ⅠDNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒；步骤四、制备含rhIGF-ⅠDNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒的PLGA缓释微球；步骤五、制备含有rhBMP-2和rhIGF-Ⅰ的双DNA/聚乙酰亚胺的PLGA组织工程复合材料。2.根据权利要求1所述的一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法，其特征在于：所述步骤二中rhBMP-2DNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒和步骤三rhIGF-ⅠDNA/聚乙酰亚胺纳米颗粒的制备具体步骤如下：a、将0.1grhBMP-2DNA或0.1grhIGF-Ⅰ和30g药用辅料混合均匀得到药物混合物，b、将药物混合物溶解到50mL有机溶剂中得到药物油溶液；c、将药物油溶液加入到90g质量浓度为60％的聚乙酰亚胺溶液中并连续搅拌30-60min；d、再加入40g蔗糖低压冻干备用；所述聚乙烯亚胺的重均分子量为600-25000。3.根据权利要求2所述的一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法，其特征在于：所述药用辅料选自赤鲜糖醇、聚环氧乙烷或聚吡咯烷酮中的一种或几种。4.根据权利要求3所述的一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂选自二氯亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃二氯甲烷或乙酸乙酯的一种或几种。5.根据权利要求1-4任一项所述的一种双基因时序性缓释的组织工程支架材料的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘劲松，徐丽华，邓振南，姚李韬，吴星海，平林超，
申请(专利权)人：温州医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33