The invention discloses a method for constructing composite cells prevascularized large biological bone scaffold for biological manufacturing field, using composite biological 3D printing, electrohydrodynamic direct writing, reduce material manufacturing and assembling technology in large cell internal biological bone scaffold for functional prefabricated vascular network to promote the repair of large bone defects. Can be used as sacrificial materials in biological materials in sodium alginate is the key of this method is explained, and in which the loading of endothelial cells, endothelial cell migration through its adhesion to the vascular network of prefabricated surface, at the same time, the degradation of alginate to preformed vascular network; in addition, the bone scaffold material in bone marrow mesenchymal stem cells differentiation into bone cells and endothelial cell interaction under the synthesis and secretion of bone matrix and mineralization, improve the efficiency of bone tissue repair, to solve the problem of functional bone repair, and has important significance to solve the problem of repairing large bone tissue in clinical medicine.
【技术实现步骤摘要】
一种复合细胞的预血管化大块生物骨支架构建方法
本专利技术涉及一种含细胞的功能性临床大块骨组织修复的构建方法,特别是涉及一种复合细胞的预血管化大块生物骨支架构建方法,应用于生物制造
技术介绍
高能创伤、骨肿瘤等疾病常导致骨缺损,自体骨移植是治疗的最好方法。但自体骨源移植极其有限并增加痛苦,而异体骨移植又存在免疫反应和诸多并发症等。虽然人体骨骼具有一定的再生和自修复能力,但较大块骨缺损修复(内径>5mm)无法单纯依靠骨的自愈能力,因此大块骨损伤作为临床常见病仍是尚未解决的世界难题,大量患有大块骨缺损的病人只能使用假体来修复,致使全球每年有数以万计的患者不能得到治愈而落下终生残疾,人们对大块骨缺损修复的需求日益迫切,渴望得到一种能取代自体同源的大块骨移植,减少患者的痛苦,真正解决大块骨源不足的问题。随着骨组织工程技术的发展,骨组织工程的再生修复有了很大的进展,对于大块生物骨组织来讲,成骨细胞很难深入到生物骨支架的中心,而生物骨植入体内后的早期营养主要来源于组织液的渗透和血液的传输,最多只能进入支架内100-300μm,造成支架内细胞的营养和氧气供给都受到限制,导致内部细胞死亡,形成血栓,不能达到大块骨缺损修复的目的。因此,目前面临的一大难点就是如何保证生物骨支架植入体内后能快速并稳定地实现支架内部的血液运输通道的重建,解决骨组织修复和再生的营养物质和氧气,以及体内新陈代谢产物的运输和排出,即大块骨组织修复和再生的血管化问题。目前,众多研究采用传统模具、牺牲材料等工艺来实现生物骨支架中预制血管网络的构建,但这些方法所获得的预制血管网络结构尺寸较大, ...
【技术保护点】
一种复合细胞的预血管化大块生物骨支架构建方法,其特征在于,包括如下步骤:a.配制载有人骨髓间充质干细胞的水凝胶Ⅰ作为打印骨支架的原料和载有人脐静脉内皮细胞的水凝胶Ⅱ作为牺牲材料:将经高温烘烤并经紫外灯消毒的水凝胶Ⅰ和水凝胶Ⅱ粉末分别倒入细胞培养液,分别配制好浓度符合宏观打印和电流体动力学直写条件的水凝胶Ⅰ溶液和水凝胶Ⅱ溶液;分别将培育中的第三代人骨髓间充质干细胞和第三代人脐静脉内皮细胞从培养箱中取出,经胰蛋白酶消化,离心步骤后,倒掉上清液,分别获得人骨髓间充质干细胞和人脐静脉内皮细胞,各细胞分别倒入1mL新鲜配制的细胞培养液并吹打均匀,并分别倒入水凝胶Ⅰ溶液和水凝胶Ⅱ溶液,搅拌均匀,分别获得含有人骨髓间充质干细胞的水凝胶Ⅰ溶液和含有人脐静脉内皮细胞的水凝胶Ⅱ溶液;b.将步骤a获得的含有人骨髓间充质干细胞的水凝胶Ⅰ溶液倒入一支10mL医用注射器中,供宏观挤出打印骨支架使用,将含有人脐静脉内皮细胞的水凝胶Ⅱ溶液倒入两支10mL医用注射器中,分别供挤出打印宏观尺度牺牲模块和电流体动力学直写微观尺度牺牲模块使用;c.将步骤b获得的三只装有打印材料的医用针管分别装载在打印平台上,开始打印:首先接 ...
【技术特征摘要】
1.一种复合细胞的预血管化大块生物骨支架构建方法,其特征在于,包括如下步骤:a.配制载有人骨髓间充质干细胞的水凝胶Ⅰ作为打印骨支架的原料和载有人脐静脉内皮细胞的水凝胶Ⅱ作为牺牲材料:将经高温烘烤并经紫外灯消毒的水凝胶Ⅰ和水凝胶Ⅱ粉末分别倒入细胞培养液,分别配制好浓度符合宏观打印和电流体动力学直写条件的水凝胶Ⅰ溶液和水凝胶Ⅱ溶液;分别将培育中的第三代人骨髓间充质干细胞和第三代人脐静脉内皮细胞从培养箱中取出,经胰蛋白酶消化,离心步骤后,倒掉上清液,分别获得人骨髓间充质干细胞和人脐静脉内皮细胞,各细胞分别倒入1mL新鲜配制的细胞培养液并吹打均匀,并分别倒入水凝胶Ⅰ溶液和水凝胶Ⅱ溶液,搅拌均匀,分别获得含有人骨髓间充质干细胞的水凝胶Ⅰ溶液和含有人脐静脉内皮细胞的水凝胶Ⅱ溶液;b.将步骤a获得的含有人骨髓间充质干细胞的水凝胶Ⅰ溶液倒入一支10mL医用注射器中,供宏观挤出打印骨支架使用,将含有人脐静脉内皮细胞的水凝胶Ⅱ溶液倒入两支10mL医用注射器中,分别供挤出打印宏观尺度牺牲模块和电流体动力学直写微观尺度牺牲模块使用;c.将步骤b获得的三只装有打印材料的医用针管分别装载在打印平台上,开始打印:首先接收平台移动到宏观挤出工位打印骨支架材料,形成骨支架基底;而后接收平台移动到另一宏观挤出工位打印宏观尺度牺牲材料,形成宏观尺度牺牲结构;最后接收平台移动到电流体动力学直写工位打印微观尺度牺牲材料,形成微观尺度牺牲结构,至此,经过三个工位的转换完成一层同时含有骨支架材料和宏微观尺度牺牲材料的打印;最终,三个工位在运动程序的控制下不断转换并复合打印成形含有宏微观尺度牺牲结构的骨支架;d.将步骤c中制备的含有宏微观尺度牺牲结构的骨支架放置在含有细胞培养液、环境条件为37℃、5%CO2的细胞培养箱中进行培...
【专利技术属性】
技术研发人员:胡庆夕,李帅,刘媛媛,孙程艳,沈显虎,张毅,汪羽,连红军,
申请(专利权)人:上海大学,
类型:发明
国别省市:上海,31
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