肺组织来源的细胞培养上清液制造技术

本发明专利技术的目的是提供安全性高的、而且效果高的用于呼吸器疾病的预防及治疗的医药组合物等。本发明专利技术通过含肺组织来源的细胞的培养上清液，提供可有效修复伤害的肺组织的医药组合物。再者，提供用于使用该培养上清液，向肺表面活性剂蛋白质阳性细胞分化诱导的方法、试剂盒及方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肺组织来源的细胞培养上清液
本专利技术涉及含肺组织来源的细胞的培养上清液、及该培养上清液的，用于治疗及/或预防呼吸器疾病的医药组合物、以及使用该培养上清液的，用于分化诱导为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的组合物及方法。
技术介绍
近年，观察到呼吸器疾病的大幅的增加。呼吸器疾病是所谓的呼吸器(肺、上呼吸道、气管－支气管、胸膜等)中发生的疾病的总称，有伴随胸痛或咳、呼吸困难、喀血、喘鸣等的痛苦的症状，有时都影响生命预后的重要的疾病。呼吸器疾病可由感染、外伤、过敏等的各种的原因发生，治愈、修复呼吸器的组织中的炎症或伤害成为治疗上的重要的目的。但是，存在例如肺中的炎症组织被纤维化的肺纤维症，或肺胞被破坏的肺气肿或慢性闭塞性肺疾病(COPD)等，多种难以组织学地修复病变的疾病。对于这些非可逆地进行的疾病使用类固醇或免疫抑制药、支气管扩张药等进行防止恶化的治疗(专利文献1)，但病态无法根本改善。构成呼吸器的肺主要由呼吸道、血管、及肺胞构成。呼吸道担负向肺胞导入空气中的氧，向外界排出肺胞内的二氧化碳的任务，由上呼吸道(口腔、鼻腔、咽头、喉头)及下呼吸道(气管、支气管、细支气管)构成。其中，在肺侧存在的是下呼吸道。气管重复向末梢分支，成为细支气管。细支气管进一步分支，成为无气体交换功能的终末细支气管、支气管壁上附着有肺胞而进行气体交换的呼吸细支气管。呼吸细支气管数次分支而至肺胞管、肺胞囊、肺胞。肺胞占肺的容积的85％，是成为与血液的气体交换的场所的器官。呼吸道或肺胞的内腔上皮除了作为对于侵入内腔的异物的物理屏障发挥功能之外，还担负分泌粘液而使呼吸道内保持在适合的湿度，分泌肺表面活性剂等的各种的生理活性物质的功能。内腔上皮由适宜于这些功能的各种各样的细胞构成。下呼吸道的内腔上皮(呼吸粘膜上皮)示在更靠近气管的部位，基底板上配置有基底细胞、纤毛细胞(圆柱纤毛上皮细胞)、粘膜分泌细胞(杯细胞或苦参细胞)的称为伪重层圆柱纤毛上皮的厚的结构。但是，随着从气管进一步分支，内腔上皮的结构也变化。在终末细支气管中，内腔上皮示单层立方上皮结构，至呼吸细支气管，则置换为由扁平的I型肺胞上皮细胞构成的上皮。在细支气管区域中的上皮细胞之中，除I型肺胞上皮细胞之外的上皮细胞也称为小呼吸道上皮细胞(SAEC)。肺胞上皮由I型肺胞上皮细胞和II型肺胞上皮细胞构成。其中，II型肺胞上皮细胞除了是作为使肺胞的表面张力减少的物质的肺表面活性剂之外，被知为产生各种的炎症性细胞因子。近年来，在肺纤维化的过程中，II型肺胞上皮细胞作为TGF-β的初期靶发挥功能的可能性，或也提示作为肺来源干/前体细胞(PSPC)发挥功能的可能性，被识别为关于各种肺疾病的重要的肺构成细胞(非专利文献1,2)。上述的肺表面活性剂对于使肺胞的表面张力减少，或防肺胞的虚脱有用(非专利文献3)。在I型肺胞上皮细胞被伤害的病态中，也知II型肺胞上皮细胞及其近亲的细胞增殖后，分化为I型肺胞上皮细胞，实现修复组织的作用(非专利文献4,5)。但是，为了含肺障碍的呼吸器疾病的预防或治疗而直接施用II型肺胞上皮细胞有引起宿主体移植片反应的担忧等，从组织适合性的观点来看有问题。要求用于含肺障碍的呼吸器疾病的预防及治疗的、更有效并且安全的方法。尽管公知，通过构成肺的细胞被伤害，或引起炎症，可发生各种的肺疾病。在肺疾病中，还存在呈细支气管的不可逆的闭塞导致的呼吸不全的闭塞性细支气管炎(BO)、在肺中的炎症组织被纤维化的肺纤维症、肺胞被破坏的慢性闭塞性肺疾病(COPD)等多种难以组织学地修复病变的疾病。对于这些不可逆地进行的疾病使用类固醇或免疫抑制药、支气管扩张药等进行防止恶化的治疗(专利文献2)，但无法根本改善病态。如上所述，作为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的II型肺胞上皮细胞及小呼吸道上皮细胞在肺纤维症、闭塞性细支气管炎、慢性闭塞性肺疾病等的不可逆地进行的肺疾病的发症、进行等中也担负重要的作用。例如，在I型肺胞上皮细胞被伤害的病态中，已知II型肺胞上皮细胞分化为I型肺胞上皮细胞而增殖，实现修复组织的作用。另外，为了支气管哮喘或细支气管炎的改善、治愈，修复受伤害的小呼吸道上皮细胞是重要的。再者，通过解明II型肺胞上皮细胞或如小呼吸道上皮细胞一样的肺表面活性剂蛋白质阳性细胞可如何分化发生，可期待解明这些肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的修复结构，可关联到不可逆地进行的肺疾病的病态解明及治疗法的开发。为此，期望可诱导从未负有分化为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的命运的细胞向肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的分化的技术的开发。至今，作为得到肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的方法，已知回收已经存在于肺组织的细胞的方法。例如，作为得到II型肺胞上皮细胞的方法，已知酶解肺组织的细胞之后，使用II型肺胞上皮细胞特异性的抗体选择性地单离，回收的方法(非专利文献3)。另外，对于小呼吸道上皮细胞，已知从细支气管直接用刷具刷取，单离、回收的方法等(非专利文献6)。但是，不知可从未负有分化为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的命运的细胞分化为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的方法。【现有技术文献】【专利文献】专利文献1：WO2006/043655专利文献2：特表2013-544235【非专利文献】非专利文献1：JournalClinicalInvestigation(2011)121,277-287非专利文献2：JournalClinicalInvestigation(2013)123,3025-3036非专利文献3：LaboratoryInvestigation(2004)84,727-735非专利文献4：LaboratoryInvestigation(2014)94,1247-1259非专利文献5：AmericanJournalRespiratoryCriticalCareMedicine(2007)176,1261-1268非专利文献6：RespiratoryResearch(2009)10：99
技术实现思路
【专利技术要解决的技术课题】本专利技术旨在提供含肺组织来源的细胞的培养上清液的，安全性高、而且效果高的用于呼吸器疾病的预防及/或治疗的医药组合物。再者，本专利技术旨在提供用于使用该培养上清液，诱导从未负有分化为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的命运的细胞向肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的分化的组合物、试剂盒及方法。【解决课题的技术方案】本专利技术人至此发现，通过混合培养从肺组织单离的细胞，作为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞得到了II型肺胞上皮细胞样细胞(非专利文献4)。进而发现，通过将获得II型肺胞上皮细胞样细胞的时期的培养上清经肺施用于肺障碍模型小鼠而抑制肺障碍。再者发现，培养这些细胞而得到的细胞培养上清液有将未负有分化为末梢血单核细胞等的肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的命运的各种细胞诱导为肺表面活性剂蛋白质阳性细胞的能力，从而完成本专利技术。本专利技术提供如下技术方案。[1]肺组织来源的细胞的培养上清液。[2][1]所述的培养上清液，其中上述肺组织来源的细胞是表达选自肺表面活性剂蛋白质或其前体、CD44及CD45的1种以上的蛋白质或编码这些的mRNA的球状细胞。[3][2]所述的培养上清液，其中肺表面活性剂蛋白质是肺表面活性剂蛋白质C(SP-C)。[4][2]所述的医药组合本文档来自技高网...

【技术保护点】
肺组织来源的细胞的培养上清液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.24 JP 2014-259827;2014.12.24 JP 2014-259821.肺组织来源的细胞的培养上清液。2.权利要求1所述的培养上清液，其中上述肺组织来源的细胞是表达选自肺表面活性剂蛋白质或其前体、CD44及CD45的1种以上的蛋白质或编码这些的mRNA的球状细胞。3.权利要求2所述的培养上清液，其中肺表面活性剂蛋白质是肺表面活性剂蛋白质C(SP-C)。4.权利要求2或3所述的培养上清液，其中选自CD34及CD90的1种以上的蛋白质或编码这些的mRNA的表达量是全蛋白质或全mRNA的表达量的5％以下。5.调制肺组织来源的细胞的培养上清液的方法，其包括：(1)将从肺组织单离的细胞悬浮于培养基中而形成细胞悬浮液的工序；(2)培养细胞悬浮液之后，除去非粘接...

【专利技术属性】
技术研发人员：萩原昌彦，粕谷善俊，田中健介，藤田哲雄，
申请(专利权)人：宇部兴产株式会社，国立大学法人千叶大学，
类型：发明
国别省市：日本,JP