抗癌治疗剂制造技术

本文所述的发明专利技术涉及抗癌治疗剂，与对可比较的非恶性细胞的细胞毒性相比，所述抗癌治疗剂对表达增殖细胞核抗原的癌症特异性同种型(caPCNA)的恶性细胞表现出优先细胞毒性；包含所述治疗剂的药物组合物；以及它们在癌症疗法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗癌治疗剂政府权利本专利技术是在以下资助下做出的：由美国国防部国会指导性医疗研究项目乳腺癌研究项目(CongressionallyDirectedMedicalResearchPrograms(CDMRP)BreastCancerResearchProgramoftheDepartmentofDefense)颁发的授权号为W81XWH-07-1-0707的部分政府支持；由美国国家卫生研究所(NationalInstitutesofHealth)/美国国家癌症研究所(NationalCancerInstitute)颁发的授权号为ROlCA121289的部分政府支持；以及来自A.N.N.A.基金会的慷慨赞助。美国政府具有本专利技术的某些权利。
本文所述的专利技术涉及抗癌治疗剂，与对可比较的非恶性细胞的细胞毒性相比，所述抗癌治疗剂对表达增殖细胞核抗原的癌症特异性同种型(caPCNA)的恶性细胞表现出优先细胞毒性；包含所述治疗剂的药物组合物；以及它们在癌症疗法中的用途。
技术介绍
增殖细胞核抗原(PCNA)在DNA复制、修复、染色体重组、细胞周期检查点控制和其它细胞增殖活动的过程中起重要作用。PCNA与接头蛋白复制因子C(RFC)结合形成作为DNA聚合酶δ和ε的对接点的移动卡夹。已经证实了显示出酸性和碱性等电点(pI)两者的增殖细胞核抗原(PCNA)的不同同种型。二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)对来自恶性与非恶性乳腺细胞(称为非恶性PCNA或nmPCNA)和组织的PCNA的分析显示，仅在恶性细胞中存在PCNA的酸性形式(称为癌症特异性PCNA或csPCNA或caPCNA，在本文中称为caPCNA)。PCNA的这两种形式之间的这种等电点差异似乎是由恶性细胞在翻译后修饰PCNA多肽的能力改变所产生的，并且不是由PCNA基因内的遗传变化所引起的。已经显示，仅结合于caPCNA同种型而不结合于nmPCNA同种型的抗体或肽干扰细胞内的蛋白质-蛋白质相互作用，从而使癌症的增殖潜能降低。参见例如WO2006/116631和WO2007098/415。此外，还已知PCNA与其它因子(如FEN-1、DNA连接酶和DNA甲基转移酶)相互作用。此外，还显示，PCNA是多个DNA修复路径中的必要参与者。与蛋白质如错配识别蛋白MSH2和核苷酸切除修复核酸内切酶XPG的相互作用已使PCNA牵涉到与DNA合成不同的过程中。与多种搭配物的相互作用一般依赖于使PCNA能够以有序并且能量有利的方式选择性互相作用的机制。
技术实现思路
本专利技术源自如下小分子治疗剂的发现：与对可比较的非恶性细胞的细胞毒性相比，所述治疗剂对表达增殖细胞核抗原的癌症特异性同种型(caPCNA)的恶性细胞表现出优先细胞毒性，参见例如美国公开第2013/034523号(以全文引用的方式并入本文中)。在不受理论限制的情况下并且如下所述，相信这些小分子治疗剂通过抑制涉及caPCNA的蛋白质-蛋白质相互作用的特异性结合模式来发挥其作用。与caPCNA对接后，这些分子减少或阻止caPCNA与其天然结合性搭配物组相互作用。这种对结合性搭配物相互作用的破坏导致需要caPCNA和其结合性搭配物两者的特定细胞功能(例如DNA复制和DNA修复)的抑制。参见，例如图1。因此，与caPCNA的蛋白质-蛋白质相互作用结构域或其结合性搭配物(包括但不限于DNA聚合酶δ、着色性干皮病G蛋白(XPG)或Flap-核酸内切酶(FEN-1))结合的小分子继而会降低/去除癌细胞正确地复制和/或修复其DNA的能力；导致杀死癌细胞。此外，caPCNA介导的功能的小分子抑制剂可能具有比上述caPCNA衍生的八肽更好的治疗功效，因为相对于肽的稳定性，这些特定小分子在血流和组织内具有固有的稳定特性，并且所述肽存在将足量的肽选择性引入癌细胞中但大部分肽不能被血流或周围组织中的细胞吸收的问题。在本专利技术的一个说明性实施方式中，本文描述了一种减少有需要的患者中表达增殖细胞核抗原的癌症特异性同种型(caPCNA)的恶性细胞的细胞增殖的方法，所述方法包括施用治疗有效量的下式化合物(在下文中称为AOH39)或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方式中，描述了上述化合物或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐用于减少表达增殖细胞核抗原的癌症特异性同种型(caPCNA)的恶性细胞的细胞增殖的用途。在另一个实施方式中，描述了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述化合物或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐，并且还包含一种或多种载体、稀释剂或赋形剂或其组合。在本文中，应了解，本文所述化合物可以单独使用或与可用于治疗癌症的其它化合物组合使用，所述其它化合物包括可以通过相同或不同作用方式在治疗上有效的那些化合物。附图说明图1显示所提出的caPCNA作用方案。图2显示与指示浓度的AOH39或不含药物的磷酸盐缓冲盐水(PBS)/DMSO对照一起温育72小时的乳腺癌和神经母细胞瘤细胞系的活力。图3显示AOH39对MCF7细胞SV40起点依赖性体外DNA复制的抑制。图4显示MCF7细胞中AOH39介导的细胞毒性与由从这些细胞分离的DNA合成体(synthesome)介导的体外DNA复制活性之间的相关性。图5显示AOH39与caPCNA的PIP盒结构域的相互作用的能量最小化的结果。图6显示AOH39对癌细胞系和非癌细胞系的增殖的影响。图7显示AOH39对胰腺癌细胞系的增殖的影响。图8显示AOH39对多种恶性和非恶性乳腺细胞系中的细胞活力的影响。图9显示AOH39对神经母细胞瘤细胞系和外周血单核细胞中的细胞活力的影响。具体实施方式根据本专利技术，小分子治疗剂通过抑制涉及caPCNA的蛋白质-蛋白质相互作用的特异性结合模式来发挥其作用。与caPCNA对接后，这些分子减少或阻止caPCNA与其天然结合性搭配物组相互作用。这种对结合性搭配物相互作用的破坏导致需要caPCNA和其结合性搭配物两者的特定细胞功能(例如DNA复制和DNA修复)的抑制。图1显示根据本专利技术背后的理论提出的caPCNA作用方案。图A表示多柔比星(DOX)诱导的DNA损伤如何在癌细胞中被正常修复。caPCNA会与DNA修复蛋白相互作用，以促进受损DNA的修理。图B表示当小分子治疗剂(SM)存在于具有DOX诱导的DNA损伤的细胞中时的条件。在这种情形下，与caPCNA或其结合性搭配物结合的小分子治疗剂(SM)与结合于DNA修复蛋白搭配物的全长caPCNA蛋白竞争，从而阻止受损DNA的修复。通过以下列举的条款进一步描述本专利技术的实施方式：1.一种减少有需要的患者中表达增殖细胞核抗原的癌症特异性同种型(caPCNA)的恶性细胞的细胞增殖的方法，所述方法包括施用治疗有效量的下式化合物或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐。2.一种如条款1中描述的化合物或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐用于减少表达增殖细胞核抗原的癌症特异性同种型(caPCNA)的恶性细胞的细胞增殖的用途。3.一种药物组合物，所述药物组合物包含如条款1中描述的化合物或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐，并且还包含一种或多种载体、稀释剂或赋形剂或其组合。4.如条款1-3中任一项所述的方法、用途或组合物，或其取代的衍生物，或其药学上可接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种减少有需要的患者中表达增殖细胞核抗原的癌症特异性(相关)同种型(caPCNA)的恶性细胞的细胞增殖的方法，所述方法包括施用治疗有效量的下式化合物

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.10 US 14/684,2591.一种减少有需要的患者中表达增殖细胞核抗原的癌症特异性(相关)同种型(caPCNA)的恶性细胞的细胞增殖的方法，所述方法包括施用治疗有效量的下式化合物或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐。2.一种使用根据权利要求1所述的化合物或其取代的衍生物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法用于减少表达增殖细胞核抗原的癌症特异性(相关)同种型(caPCNA)的恶性细胞的细胞增殖。3.一种药物组合物，所述药物组合物包含根...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·J·基希，琳达·H·马尔卡斯，
申请(专利权)人：雷尔有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US