The invention discloses a method for preparing CD133 immunomagnetic beads, the specific steps are as follows: magnetic bead preparation; magnetic chitosan microspheres preparation: weigh 10 grams of chitosan added to 200ml 2% acetic acid solution soak overnight to dissolve; take 1g Fe3O4 nano magnetic beads to join, room temperature, 300r/min under stirring; adding 200ml liquid paraffin, 40 DEG C, 300r/min under the condition of stirring; temperature to 50 DEG C, adding 40ml formaldehyde, 300r/min, 170r/min 20ml was added to stirring; 50% volume concentration in the mixed solution of glutaraldehyde, the temperature of 60 DEG C, stirring, regulating pH 10, stirring 2 6h; after the reaction to the reaction with 100ml petroleum ether, fully mixing, vacuum filtering using Buchner funnel, obtain the magnetic chitosan microsphere particles, then fully mixing ethanol washing, and then remove the ethanol After washing with distilled water, vacuum drying at 50 degrees; carboxylation of magnetic chitosan microspheres; coupling of carboxylated immunomagnetic beads with antibodies. The invention has the advantages of good stability and high sensitivity.
【技术实现步骤摘要】
一种CD133免疫磁珠的制备方法
本专利技术涉及免疫学领域，具体来说是一种CD133免疫磁珠的制备方法。
技术介绍
近几十年来，世界范围内肿瘤的发病率和病死率越来越高,虽然针对肿瘤的治疗手段有了很多新的进展，但绝大多数肿瘤患者仍然无法获得根治、容易复发和转移，恶性肿瘤患者的生存时间和生活质量始终较低。人肿瘤干细胞首次报道给我们带来新的希望。寻找特异性的表面标志物，通过其分选肿瘤干细胞，是进一步研究肿瘤发生、转移、复发和预后的关键。CD133是一种独特的干细胞和肿瘤干细胞的表面标志，分子量为120kDa，具有5个跨膜区，CD133抗原可被3种CD133抗体识别：克隆AC133、293C3和AC141,AC133直接与CD133/1糖基化抗原表位结合，可用于从外周血、骨髓、脐带血及其它组织中分析和分选CD133+细胞,单克隆抗体293C3和AC141识别抗原表位CD133/2，主要用于MACS分选后CD133+细胞的荧光染色。目前一些细胞分选技术如免疫流式分选、SP分选和免疫磁珠法等都开始应用于肿瘤干细胞的分选。免疫流式分选是利用流式细胞仪,由细胞液流在电信号作用下发...
【技术保护点】
一种CD133免疫磁珠的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：一、磁珠的制备：1.1、在通氮气的条件下，将12.1g FeSO4·7H2O、23.5g FeCl3·6H2O溶解于800ml蒸馏水中，加热回流，加热至90℃时，在机械搅拌下把30ml氨水加入以上溶液中；1.2、1h后反应结束，在外加磁场作用下，弃上清；1.3、加入100ml乙醇，充分搅拌洗涤磁珠，在外加磁场下，收集磁珠，再用100ml蒸馏水洗涤，常温下真空干燥，即得Fe3O4纳米磁珠；二、磁性壳聚糖微球制备：2.1、称取10克壳聚糖加到200ml 2％乙酸溶液中浸泡过夜，使之溶解；2.2、取1g Fe3O4纳米磁...
【技术特征摘要】
1.一种CD133免疫磁珠的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：一、磁珠的制备：1.1、在通氮气的条件下，将12.1gFeSO4·7H2O、23.5gFeCl3·6H2O溶解于800ml蒸馏水中，加热回流，加热至90℃时，在机械搅拌下把30ml氨水加入以上溶液中；1.2、1h后反应结束，在外加磁场作用下，弃上清；1.3、加入100ml乙醇，充分搅拌洗涤磁珠，在外加磁场下，收集磁珠，再用100ml蒸馏水洗涤，常温下真空干燥，即得Fe3O4纳米磁珠；二、磁性壳聚糖微球制备：2.1、称取10克壳聚糖加到200ml2％乙酸溶液中浸泡过夜，使之溶解；2.2、取1gFe3O4纳米磁珠加入其中，室温下，300r/min条件下搅拌15-25min；2.3、加入200ml液体石蜡油，40℃下，300r/min条件下搅拌25-35min；2.4、温度升高至50℃，加入40ml甲醛，300r/min条件下，搅拌25-35min；2.5、向混合溶液中加入20ml50％体积浓度的戊二醛，170r/min，60℃条件下搅拌，调节pH为10，搅拌2-6h；2.6、反应结束后向反应体系中加入100ml石油醚，充分搅拌，用布氏漏斗进行抽滤，获得磁性壳聚糖微球颗粒，然后再用乙醇充分搅拌洗涤，去除乙醇后再用蒸馏水洗涤，重复3-5次乙醇和蒸馏水的洗涤操作，在50℃条件下真空干燥；三、磁性壳聚糖微球的羧基化：3.1、取1g磁性壳聚糖微球，加入50ml异丙醇和50ml30％的NaOH溶液，60℃搅拌25-45min；3.2、滴入含有7g氯乙酸的异丙醇溶液20ml，每5min滴加2ml；3.3、60℃条件下反应7h，用稀盐酸中和；3.4、反应结束后，用乙醇充分搅拌洗涤，去除乙醇后再用蒸馏水洗涤，重复3-5次乙醇和蒸馏水的洗涤操作，真空干燥；四、羧基化的免疫磁珠与抗体的...
【专利技术属性】
技术研发人员：韦玉军，李航，陆宝石，苏军，吴远航，
申请(专利权)人：安徽安龙基因医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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