分子标签、接头及确定含有低频突变核酸序列的方法技术
Molecular tags, connectors and methods for determining nucleic acid sequences containing low frequency mutations
The present invention provides a molecular label and its composition, a connector containing a molecular tag and its composition, and a method for determining a target sequence containing a low frequency mutation nucleic acid sequence in a sample to be tested. Among them, the molecular label contains at most 2 consecutive identical bases. The molecular tags provided by the present invention do not have multiple consecutive identical bases to avoid the poor quality of sequencing due to the occurrence of multiple consecutive bases. And the proportion of various tags within the molecular tag is consistent, avoiding the advantage tag, and can maximize the effectiveness of the molecular tag.
【技术实现步骤摘要】
分子标签、接头及确定含有低频突变核酸序列的方法
本专利技术涉及核酸测序
，具体的，本专利技术涉及分子标签及其组合物、含有分子标签的接头及其组合物、确定待测样本目标区域含有低频突变核酸序列的方法。
技术介绍
高通量测序是目前应用范围最广的测序技术，然而其在测序中仍不可避免的存在一些测序错误，发生率为0.1％～0.2％或者更高，并且PCR过程使用的DNA聚合酶也有错误率，错误率为10-7～10-5，特别是随着PCR循环数的增加错误率也有所增加。为了检测低于0.1％的碱基突变(低频突变)或测序错误，学者专利技术了分子标签的方法，分子标签是在PCR之前给每个测序模板的一端或者两端加入一段特殊的序列。分子标签的每个位置可以是A、T、C、G4种碱基中的1种，分子标签的长度根据实际的实验需要选择，根据分子标签的长度及4种碱基的变化，分子标签可以有4的n次方种类。如果原始模板的分子标签是完全随机分布的，那分子标签的多样性能够保证每个原始模板在原始文库中连上分子标签后是独一无二的，在之后的PCR过程中，每个原始模板会作为初始模板形成一簇“分子簇”，如果没有测序错误和PCR错误...
【技术保护点】
一种分子标签，其特征在于，所述分子标签上最多含有2个连续相同的碱基。
【技术特征摘要】
1.一种分子标签，其特征在于，所述分子标签上最多含有2个连续相同的碱基。2.根据权利要求1所述的分子标签，其特征在于，所述分子标签为单链或反向互补的双链。3.根据权利要求1所述的分子标签，其特征在于，所述分子标签的碱基数目为6～24bp。4.一种分子标签组合物，其特征在于，含有如权利要求1～3任一项所述的分子标签，且每种分子标签的比例为0.95～1.05:1。5.根据权利要求4所述的分子标签组合物，其特征在于，所述比例包括摩尔比、分子质量比、分子数比的至少之一。6.一种接头，其特征在于，所述接头含有如权利要求1～3任一项所述的分子标签，且所述分子标签位于所述接头除突出端“T”和非突出端末端20bp碱基以外的任意位置。7.如权利要求6所述的接头，其特征在于，所述接头还含有文库标签，所述文库标签与所述分子标签的3’端或5’端相连。8.如权利要求6所述的接头，其特征在于，所述接头还含有识别性特征序列，所述识别性特征序列为4个不重复的碱基，所述识别性特征序列与所述分子标签的3’端或5’端相连。9.一种接头组合物，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾晓静，高晓峘，韩颖鑫，张印新，何哲，王佳伟，夏伟成，李胜，
申请(专利权)人：广州精科医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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