骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法技术

本发明专利技术公开一种骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0g/100ml、无机氮源0.2～3.0g/100ml、碳源0.5～3.0g/100ml、无机盐A 0.1～1.0g/100ml、无机盐B 0.1～1.0g/100ml、微量元素0.0002～0.0006g/100ml。所述补料方法和所述发酵方法中包括向发酵液中加入所述补料培养基和水，满足了骨化二醇发酵对营养成分的需求，满足了骨化二醇发酵溶氧需求，降低了动力成本，提高了发酵效率。

Feeding medium for fermentation of calcitriol glycol, feeding method for fermentation and fermentation method thereof

The invention discloses a calcitriol fermentation feeding medium, fermentation method and fermentation method of feeding, the feeding medium includes: 0.2 ~ 3.0g/100ml, organic nitrogen source and inorganic nitrogen source of 0.2 ~ 3.0g/100ml, 0.5 ~ 3.0g/100ml carbon source and inorganic salt A 0.1 ~ 1.0g/100ml, inorganic salt B 0.1 ~ 1.0g/100ml, 0.0002 ~ 0.0006g/100ml of trace elements. The feeding method and the fermentation method includes adding the complement to the fermentation liquid feeding medium and water, to meet the requirements of calcitriol fermentation on nutrients, meet the calcitriol fermentation oxygen demand, reduce power cost, improve the fermentation efficiency.

【技术实现步骤摘要】
骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法
本专利技术生物技术涉及领域，具体涉及一种骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法
技术介绍
维生素D类药物中的骨化二醇(25—羟基维生素D3)是自然存在人体内的维生素D3的活性代谢产物，应用广泛。其主要用于治疗老年人骨质疏松症等各种慢性骨紊乱，以及与慢性肾衰竭有关的代谢性骨疾病，低钙血病。此外，骨化二醇近年还作为饲料添加剂用于饲料行业。骨化二醇的制备有化学合成和生物发酵两种方法；化学合成反应步骤繁多、需要昂贵试剂、反应过程中会产生外消旋体，需要进行复杂的拆分过程，不仅大大影响收率，而且难以拆分完全，而且化学合成生产骨化二醇会对环境产生较大的污染。而微生物发酵的方式能够利用微生物细胞内的酶特异性的解决骨化二醇的手性结构问题，其生产条件温和，收率高，成本低廉，环境友好，成为一种有效替代化学合成的方法。但是微生物发酵的方式实施过程中也存在一些问题，在发酵过程中，发酵时间长，可能会出现营养供应不足的情况，同时，由于发酵的时间长，发酵液蒸发量大，体积减少较多，使得发酵液粘度增加、氧传递受限，菌丝体过早出现断裂、自溶，发酵液的pH值出现升高的情况，这又会影响菌丝体内酶的活性，造成的结果就是底物维生素D3的残留较多，产物骨化二醇的产量增长缓慢，发酵时间长，导致发酵效率不高。
技术实现思路
有鉴于此，本申请提供了一种骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法，所述补料方法和所述发酵方法中包括向发酵液中加入所述补料培养基和水，提供了补料培养基配方、补料时间和补料速率，并且将氨基酸作为补料培养基组分，满足了骨化二醇发酵对营养成分的需求，满足了骨化二醇发酵溶氧需求，降低了动力成本，提高了发酵效率。解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是一种骨化二醇发酵的补料培养基，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0g/l00ml、无机氮源0.2～3.0g/l00ml、碳源0.5～3.0g/l00ml、无机盐A0.1～1.0g/l00ml、无机盐B0.1～1.0g/l00ml、微量元素0.0002～0.0006g/l00ml。优选的，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～1.0g/l00ml、无机氮源0.2～1.0g/l00ml、碳源0.5～1.0g/l00ml、无机盐A0.1～0.3g/l00ml、无机盐B0.1～0.3g/l00ml、微量元素0.0002～0.0004g/l00ml。优选的，所述补料培养基包括：有机氮源0.5g/l00ml、无机氮源0.2g/l00ml、碳源0.5g/l00ml、无机盐A0.2g/l00ml、无机盐B0.2g/l00ml、微量元素0.0003g/l00ml。优选的，所述有机氮源选自蛋白胨、黄豆粉、花生粉、玉米浆和酵母膏中的一种或多种，所述无机氮源选自硫酸铵、硝酸铵、尿素和氨中的一种或多种，所述碳源选自葡萄糖、麦芽糖、淀粉、糊精和蔗糖中的一种或多种，所述无机盐A选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的一种或多种，所述无机盐B选自硫酸镁、硫酸钠和硫酸钾中的一种或多种，所述微量元素选自氯化铁、硫酸铜和氯化锰中的一种或多种。优选的，所述有机氮源为蛋白胨。优选的，所述的无机氮源为硫酸铵。优选的，所述碳源为葡萄糖。优选的，所述无机盐A为磷酸二氢钠。优选的，所述无机盐B为硫酸镁。优选的，所述的微量元素为氯化锰和氯化铁。优选的，所述补料培养基还包括：氨基酸。优选的，所述补料培养基还包括：氨基酸0.1～2.0g/l00ml。优选的，所述补料培养基还包括：氨基酸0.2～1.0g/l00ml。优选的，所述氨基酸为选自缬氨酸、脯氨酸、半胱氨酸和苏氨酸中的一种或多种。优选的，所述氨基酸为缬氨酸。本专利技术还提供了一种骨化二醇发酵的补料方法，所述方法包括：提供发酵液，向所述发酵液中加入补料培养基和水，发酵，得到料液，所述料液中包括所述骨化二醇；以重量份计，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0份、无机氮源0.2～3.0份、碳源0.5～3.0份、无机盐A0.1～1.0份、无机盐B0.1～1.0份、微量元素0.0002～0.0006份。优选的，向所述发酵液中加入补料培养基具体为：向所述发酵液中加入补料培养基，直至料液中菌丝体浓度为15％～35％(v/v)时，停止加入所述补料培养基。优选的，向所述发酵液中加入补料培养基具体为：向所述发酵液中加入补料培养基，直至料液中菌丝体浓度为20％～30％(v/v)时，停止加入所述补料培养基。优选的，向所述发酵液中加入补料培养基具体为：向所述发酵液中加入补料培养基，直至料液中菌丝体浓度为25％(v/v)时，停止加入所述补料培养基。优选的，菌丝体浓度的测定条件为:料液经离心分离后进行测定。优选的，离心分离转速为4000转/分钟。优选的，离心分离时间为10分钟。优选的，以发酵液的体积计，向所述发酵液中加入补料培养基的速率为2％/24h～10％/24h。优选的，以发酵液的体积计，向所述发酵液中加入补料培养基的速率为2％/24h～5％/24h。优选的，向所述发酵液中加入水具体为：当发酵液中的溶氧低于30％(m/v)时，向所述发酵液中加入水。优选的，以发酵液的体积计，向所述发酵液中加入水的速率为1％/h～10％/h。优选的，以发酵液的体积计，向所述发酵液中加入水的速率为2％/h～5％/h。优选的，以发酵液的体积计，向所述发酵液中加入水的速率为3％/h。本专利技术还提供了一种骨化二醇的发酵方法，所述方法包括：1)提供种子液和发酵培养基；2)种子液接入所述发酵培养基，发酵，得到发酵液；3)向步骤2)得到的发酵液中加入补料培养基和水，发酵，得到料液；所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0份、无机氮源0.2～3.0份、碳源0.5～3.0份、无机盐A0.1～1.0份、无机盐B0.1～1.0份、微量元素0.0002～0.0006份；4)所述步骤3)得到的料液经后处理，得到骨化二醇。优选的，提供所述种子液具体为：将保藏编号为CGMCCNo.7935菌株接种到种子培养基，种子培养得到种子液。优选的，提供所述种子液具体为：将保藏编号为CGMCCNo.7935菌株接种到种子培养基，转速280r/min，温度29℃，培养3天，得到一级种子液；所述一级种子液接种到种子培养基，转速260r/min，温度29℃，空气流量0.9立方米/小时，压力0.05Mpa，培养2天，得到二级种子液；所述二级种子液接种到所述种子培养基，转速180r/min，温度29℃，空气流量18立方米/小时，压力0.05MPa，培养1天，得到所述种子液。优选的，所述保藏编号为CGMCCNo.7935菌株由保藏编号为CGMCCNo.7935的菌种接种到斜面培养基培养得到。优选的，所述斜面培养基由葡萄糖1.5g/l00ml，蛋白胨1.0g/l00ml，玉米浆0.3g/l00ml，氯化钠0.4g/l00ml，琼脂1.5g/l00ml和余量的水组成。优选的，所述斜面培养基pH值为7.0。优选的，所述种子培养基由蛋白胨1.5g/l00ml、玉米浆1.5g/l00ml、葡萄糖1.5g/l00ml、黄豆粉0.4g/l00ml、氯化钠0.5g/l00ml、磷酸二氢钾0.2g/l00ml本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种骨化二醇发酵的补料培养基，其特征在于，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0g/l00ml、无机氮源0.2～3.0g/l00ml、碳源0.5～3.0g/l00ml、无机盐A0.1～1.0g/l00ml、无机盐B 0.1～1.0g/l00ml、微量元素0.0002～0.0006g/l00ml。

【技术特征摘要】
1.一种骨化二醇发酵的补料培养基，其特征在于，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0g/l00ml、无机氮源0.2～3.0g/l00ml、碳源0.5～3.0g/l00ml、无机盐A0.1～1.0g/l00ml、无机盐B0.1～1.0g/l00ml、微量元素0.0002～0.0006g/l00ml。2.根据权利要求1所述的补料培养基，其特征在于，所述有机氮源选自蛋白胨、黄豆粉、花生粉、玉米浆和酵母膏中的一种或多种，所述无机氮源选自硫酸铵、硝酸铵、尿素和氨中的一种或多种，所述碳源选自葡萄糖、麦芽糖、淀粉、糊精和蔗糖中的一种或多种，所述无机盐A选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的一种或多种，所述无机盐B选自硫酸镁、硫酸钠和硫酸钾中的一种或多种，所述微量元素选自氯化铁、硫酸铜和氯化锰中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的补料培养基，其特征在于，所述补料培养基还包括：氨基酸。4.一种骨化二醇发酵的补料方法，其特征在于，所述方法包括：提供发酵液，向所述发酵液中加入补料培养基和水，发酵，得到料液，所述料液中包括所述骨化二醇；以重量份计，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0份、无机氮源0.2～3.0份、碳源0.5～3.0份、无机盐A0.1～1.0份、无机盐B0.1～1.0份、微量元素0....

【专利技术属性】
技术研发人员：梁彦明，曾志刚，翟龙飞，许之晖，
申请(专利权)人：太原市威尔潞威科技发展有限公司，中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所，
类型：发明
国别省市：山西,14