LIPUS对三维支架材料上MC3T3‑E1细胞内RNA表达影响的研究方法技术

本发明专利技术提供一种LIPUS对三维支架材料上MC3T3‑E1细胞内RNA表达影响的研究方法，包括：将MC3T3‑E1细胞接种到三维支架材料上；将接种完毕的三维支架材料和超声探头浸入水中，保持超声探头和材料的距离为5cm，从材料底部加载LIPUS，加载过程中每2～3天更换一次MC3T3‑E1细胞的培养基；停止加载LIPUS后，收集材料上的MC3T3‑E1细胞，进行全转录组和miRNA的高通量测序，筛选差异表达的mRNA、lncRNA、miRNA，并结合GO和KEGG进行整合分析。本发明专利技术为后续研究LIPUS促进三维材料内成骨分化的分子生物学机制提供可靠数据和新的研究思路。

Study on the method of LIPUS MC3T3 three-dimensional scaffolds in E1 cells the expression of RNA

The invention provides a LIPUS of three-dimensional scaffolds MC3T3 E1 intracellular RNA expression of MC3T3 method: E1 cells were seeded onto three-dimensional scaffolds; 3D scaffolds after vaccination and probe into the water, keep the ultrasonic probe and the material from the material at the bottom of distance is 5cm. Loading LIPUS, loading process every 2 to 3 days to replace a MC3T3 E1 cell culture medium; stop after loading LIPUS, the collection of materials on the MC3T3 E1 cells, high-throughput sequencing of whole transcriptome and miRNA screening, differential expression of mRNA and lncRNA, miRNA, and the combination of GO and KEGG integration analysis. The invention provides reliable data and new research ideas for further studying the molecular biological mechanism of LIPUS promoting osteogenic differentiation in three-dimensional materials.

【技术实现步骤摘要】
LIPUS对三维支架材料上MC3T3-E1细胞内RNA表达影响的研究方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种LIPUS对三维支架材料上MC3T3-E1细胞内RNA表达影响的研究方法。
技术介绍
低强度脉冲超声波(low-intensitypulsedultrasoundstimulation，LIPUS)是一种使用频率和剂量较低的超声波。有文献报道：LIPUS有利于体外三维材料内骨髓间充质干细胞的成骨向分化、促进兔股骨多孔材料内的血管化和骨形成、可提高兔脊椎与多孔材料间的骨融合率[1-3]。还有文献报道：LIPUS可以明显促进成骨细胞在多孔材料内的长入、增殖和早期分化[4，5]；LIPUS与人工骨材料联合修复Beagle犬节段性骨缺损可提高新骨形成速度及骨组织密度，缩短骨愈合时间[6]。本课题组与中科院金属研究所合作的国家“863”计划项目：2015AA033702高强韧多孔钛人工骨材料研发，对利用电子束逐层熔化技术三维打印制备的多孔钛合金(Ti-6Al-4V，ELI粉，医疗外科植入用)材料的生物学性能进行了全面评价，实验发现LIPUS可以促进钛合金多孔材料内MC3T3-E1细本文档来自技高网...

【技术保护点】
LIPUS对三维支架材料上MC3T3‑E1细胞内RNA表达影响的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将MC3T3‑E1细胞接种到三维支架材料上；(2)将接种完毕的三维支架材料和超声探头浸入水中，保持超声探头和材料的距离为5cm，从材料底部加载LIPUS，加载参数为：超声频率1～3.3MHz，强度10～100mW/cm

【技术特征摘要】
1.LIPUS对三维支架材料上MC3T3-E1细胞内RNA表达影响的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将MC3T3-E1细胞接种到三维支架材料上；(2)将接种完毕的三维支架材料和超声探头浸入水中，保持超声探头和材料的距离为5cm，从材料底部加载LIPUS，加载参数为：超声频率1～3.3MHz，强度10～100mW/cm2，10～30min/次，1次/d，加载周期为1～21d，加载过程中每2～3天更换一次MC3T3-F1细胞的培养基；(3)停止加载LIPUS后，收集材料上的MC3T3-E1细胞，进行全转录组和miRNA的高通量测序，筛选差异表达的mRNA、lncR...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴琳，刘洁，冯丽芳，曹洪娟，刘笑涵，
申请(专利权)人：中国医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21