用于鉴定烤烟秦烟96的引物组合及试剂盒、应用及鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定烤烟秦烟96的引物组合及试剂盒、应用及鉴定方法，属于生物分子鉴别技术领域。本发明专利技术利用烟草420K高密度SNP芯片对近年来我国烟草主栽品种进行全基因组SNP分型，根据品种间多态性SNP位点筛选获得了一套适用于鉴定烤烟秦烟96的特异性SNP标记共12个，其物理位置基于栽培烟草品种红花大金元的全基因组序列比对确定，包含SNP位点的序列如SEQ ID NO:1～12所示。针对烤烟秦烟96的SNP位点侧翼序列，根据检测方法的不同设计相应引物，可用于烤烟秦烟96的品种鉴定。本发明专利技术基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术建立了一套烤烟秦烟96鉴定方法，检测周期短、通量高，结果准确。

Primer combinations, kits, applications and identification methods for identification of flue cured tobacco Qin tobacco 96

The invention discloses a primer combination, reagent kit, application and identification method for identification of flue-cured tobacco Qin tobacco 96, belonging to the field of biological molecular identification technology. The invention uses tobacco 420K high density SNP chip in recent years, China's tobacco cultivars for whole genome SNP type, according to the varieties of SNP polymorphism were screened for a specific SNP markers in identification of flue-cured tobacco Qinyan 96 a total of 12, the physical location of the whole genome alignment of cultivated tobacco varieties Honghuadajinyuan based on the determined sequence containing SNP sites such as SEQ ID NO:1 ~ 12 shows. According to the flanking sequence of SNP locus of flue-cured tobacco 96, the primers were designed according to the different detection methods, which could be used for variety identification of flue-cured tobacco 96. The invention of matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry was established based on the identification of a set of 96 flue-cured tobacco Qinyan, short detection cycle, high flux, accurate results.

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定烤烟秦烟96的引物组合及试剂盒、应用及鉴定方法
本专利技术涉及一种用于鉴定烤烟秦烟96的引物组合，同时还涉及包含该引物组合的试剂盒、应用及鉴定方法，属于生物分子鉴别

技术介绍
烟草是一种重要的经济作物，是卷烟生产的主要原料。烤烟品种秦烟96由陕西省烟草研究所和中国烟草总公司青州烟草研究所以G-28为母本、净叶黄为父本杂交选育而成，于2009年3月10日通过全国烟草品种审定委员会审定。烤烟秦烟96植株呈筒形，打顶株高143.5cm，茎围10.4cm，节距6.6cm，可采叶片数21～23片；叶形椭圆，叶色绿，叶面较平，茎叶角度中，着叶均匀，腰叶长67.3cm、宽35.0cm；田间生长势强，移栽至现蕾60天左右，大田生育期为119天左右。秦烟96是近年来我国烟叶生产中重要的主栽烤烟品种，也是卷烟生产中重要的工业常用品种。品种是优质烟叶原料生产的基础，是影响烟叶品质最主要的因素之一。根据《中华人民共和国种子法》和《烟草专卖法》，为保证烟叶生产的稳定性和可持续发展，必须选用经全国烟草品种审定委员会审(认)定的品种，严禁种植劣杂品种。此外，烟草工业生产和产品开发对特定烟叶品种也本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于鉴定烤烟秦烟96的引物组合，其特征在于：所述引物针对烤烟秦烟96的12个特异性SNP位点侧翼序列设计，包含这12个SNP位点的基因序列如SEQ ID NO:1～12所示。

【技术特征摘要】
1.用于鉴定烤烟秦烟96的引物组合，其特征在于：所述引物针对烤烟秦烟96的12个特异性SNP位点侧翼序列设计，包含这12个SNP位点的基因序列如SEQIDNO:1～12所示。2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于：所述12个特异性SNP位点的引物序列如SEQIDNO:13～48所示。3.包含如权利要求1或2所述引物组合的烤烟秦烟96鉴定试剂盒。4.如权利要求1或2所述引物组合、权利要求3所述试剂盒在烤烟秦烟96品种鉴定方面的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：包括：取烟草样本基因组DNA进行SNP分型检测，若检测样本中12个SNP位点的基因型与烤烟秦烟96的完全一致，则判定该烟草样本为烤烟秦烟96；烤烟秦烟96中12个SNP位点FP01～FP12的基因型依次为AA、TT、CC、GG、TT、CC、AA、TT、TT、TT、TT、AA。6.采用如权利要求2所述引物组合鉴定烤烟秦烟96的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)SNP位点多重PCR扩增反应以烟草样本基因组DNA为模板，利用引物组合中的扩增引物进行多重PCR扩增反应，得PCR产物；2)SAP酶反应用SAP酶去除PCR产物中剩余的dNTP和引物，得反应产物；3)单碱基延伸反应在反应产物中加入延伸引物进行单碱基延伸反应，得延伸产物；4)基因型检测及结果判定对延伸产物进行预处理，利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术进行SNP基因型检测，若检测样本中12个SNP位点的基因型与烤烟秦烟96的完全一致，则判定该烟草样本为烤烟秦烟96；烤烟秦烟96中12个SN...

【专利技术属性】
技术研发人员：张剑锋，魏攀，武明珠，王中，卢鹏，金静静，许亚龙，李泽锋，李锋，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：河南,41