一种饲用粪肠球菌、防治畜禽热应激的微生态制剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于中草药微生态制剂领域，公开一种饲用粪肠球菌、防治畜禽热应激的微生态制剂及其制备方法。本发明专利技术粪肠球菌BD‑1，保藏编号为CCTCC NO：M2017416。本发明专利技术中由粪肠球菌BD‑1发酵制备的微生态制剂产品的底物基质质量百分比组成为：绿茶25~30%、绿茶提取残渣10~20%、太子参须10~15%、陈皮10~15%、山楂10~20%、去核干枣10~15%、大蒜素0.05~0.1%。本发明专利技术粪肠球菌BD‑1具有良好的耐茶多酚和大蒜素的能力，另外，太子参须提取物可显著促进该菌株生长。本发明专利技术微生态制剂不仅利于成品有效成分的保存还能显著降低货损率，延长货架时间。

Microecological preparation for feeding Enterococcus faecalis and preventing heat stress of livestock and poultry and preparation method thereof

The invention belongs to the field of Chinese herbal medicine microecological preparation, discloses a feed probiotics, a microecological preparation for preventing and treating heat stress of livestock and poultry and a preparation method thereof. The invention of Enterococcus faecalis BD 1, the preservation number is CCTCC NO:M2017416. The substrate mass percentage of probiotics products prepared by Enterococcus faecalis BD 1 fermentation system in the invention consists of: 25~30%, Green Tea Green Tea extraction residue 10~20%, Prince 10~15%, Radix tangerine peel 10~15%, hawthorn 10~20%, 10~15%, 0.05~0.1% to nuclear jujube allicin. The invention has the ability of 1 Enterococcus faecalis BD, good resistance to tea polyphenols and Allicin in Radix extract prince can significantly promote the growth of the strain. The invention of probiotics is not only conducive to the effective components of the preservation of products can obviously reduce the damage rate, prolong storage time.

【技术实现步骤摘要】
一种饲用粪肠球菌、防治畜禽热应激的微生态制剂及其制备方法
本专利技术属于中草药微生态制剂领域，具体涉及一种饲用粪肠球菌、防治畜禽热应激的微生态制剂及其制备方法。
技术介绍
热应激是影响畜禽夏季生长性能的主要因素，同时也是爆发畜禽各种传染病的诱因。在集约化养殖的今天，随着饲养密度的增大和全球气候变暖的趋势，热应激已成为影响养殖业发展的重要因素之一。其中在养猪生产中，由高温引起的损失较为突出，产力下降、疾病增多、淘汰率与死亡率上升，生产成本提高，已成为养猪业，尤其是规模化猪场在夏季面临的巨大难题。同样，家禽表羽毛丰厚，代谢旺盛，无汗腺，对高温比较敏感，在热应激过程中胃肠道容易遭受由于缺血损伤肠道，缺血时供血量减少和供氧降低，肠道摄取和利用氧的能力代偿性提高，致使肠黏膜上皮细胞受损水肿，细胞膜及细胞间连接断裂细胞坏死，家禽肠道的健康在较大程度上受到影响，易于导致肠道免疫力降低，肠道微生态内环境遭到紊乱，促进其他关联性疾病的发生，危害家禽生产性能。目前，对于预防畜禽热应激的途径主要集中在饲养管理、还原剂添加（如维生素、茶多酚等）、增强营养、健脾益胃、补充肠道益生菌。其中，南方畜禽养殖业已有将茶末或茶渣应用到预防畜禽热应激的工作中，而研究发现廉价的茶末或茶渣中的茶多酚起到重要还原性抗氧化作用。然而目前市面上还未有高效发酵型茶叶微生态制剂产品的报道，主要原因是缺少能耐受茶多酚的茶叶发酵益生菌菌株，其次是即使一般性制备了该类产品但因茶多酚溶出度小、茶多酚氧化损失严重而不能达到理想的应用效果。另外，目前发酵型微生态制剂（含水量10~40%）多有货架期内受霉菌的污染等现象，如何解决该问题对提高成品货架期意义重大。
技术实现思路
为克服现有技术中缺少能耐受茶多酚的茶叶发酵益生菌菌株而难以制备高效发酵型茶叶微生态制剂、微生态制剂成品货架期短的难题，本专利技术的目的在于提供一种饲用粪肠球菌、防治畜禽热应激的微生态制剂及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种饲用粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）BD-1，申请人已将该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：武汉市武昌珞珈山，保藏日期：2017年7月7日；保藏编号：CCTCCNO：M2017416。利用所述饲用粪肠球菌BD-1制备防治畜禽热应激的微生态制剂的方法，步骤如下：（1）、粪肠球菌BD-1的活化：将粪肠球菌BD-1试管斜面菌种在无菌环境下用无菌生理盐水冲洗，然后接种到含太子参须提取物0.2~0.5%的MRS液体培养基中，35~37℃静止培养42~48h；其中，所述太子参须提取物的百分比以质量体积百分比g/mL计（即100mLMRS液体培养基含太子参须提取物0.2~0.5g）；（2）、制备粪肠球菌BD-1发酵种子液：无菌环境下，将步骤（1）所得菌种活化液按体积百分比3~5%接种到含太子参须提取物0.2~0.5%的MRS液体培养基中，35~37℃下静止发酵42~48h，制得粪肠球菌BD-1发酵种子液；其中，所述太子参须提取物的百分比以质量体积百分比g/mL计（即100mLMRS液体培养基含太子参须提取物0.2~0.5g）；（3）、制备发酵底物基质：首先，按质量百分比准备原料：绿茶25~30%、绿茶提取残渣10~20%、太子参须10~15%、陈皮10~15%、山楂10~20%、去核干枣10~15%、大蒜素0.05~0.1%；然后，先粉碎除大蒜素之外的原料，再将粉碎所得原料粉与大蒜素混合均匀，制得发酵底物基质；（4）、发酵：将步骤（2）所得发酵种子液加入步骤（3）所得发酵底物基质内，搅拌混匀，装入发酵袋并密封，再将发酵袋在避光条件下于30~37℃发酵14~21d，制得微生态制剂；其中，以体积质量百分比L/kg计，发酵种子液占发酵底物基质的百分比为30~40%。较好地，步骤（3）中，粉碎粒度优选为60~80目。利用所述制备方法制备的防治畜禽热应激的微生态制剂。本专利技术中，绿茶提取残渣（指绿茶在经过提取之后所留下的残渣）和太子参须提取物均可按现有技术获得，比如绿茶提取方法可参照但不限于现有水提取方法，太子参须提取物可参照但不限于申请人于2016年8月30日申请的名称为“一种太子参须提取物的制备方法”的专利（申请号201610758305.8）中公开的方法获得。有益效果：1、本专利技术饲用粪肠球菌BD-1分离于柘荣县下村农户（坐标：119。51′59.7〞E，27。13′34.0〞N）自养健康成年猪盲肠黏膜层，所得粪肠球菌BD-1安全无毒，37℃MRS培养基中培养48h菌落表面光滑凸起，周边整齐，菌落颜色灰白色，菌落直径0.5~1.2mm，镜检G+，无芽孢，菌体长度约0.5~1μm。粪肠球菌BD-1在厌氧培养和有氧培养下生长良好，活菌数分别达到2.82×109CFU/mL、2.04×109CFU/mL，该菌株具有良好的耐酸、耐胆盐和耐高温能力，同时该菌株具有良好的耐茶多酚和大蒜素的能力，该菌株可耐受茶多酚和大蒜素的浓度分别为1.0%、0.1%，该浓度下菌体存活率分别为70.26%和70.43%，在茶多酚（2%）和大蒜素（0.1%）联合作用下其存活率可达53.72%，超出50%；另外，太子参须提取物可显著促进该菌株生长；粪肠球菌BD-1可显著抑制致病菌金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和大肠埃希氏菌的生长；2、本专利技术微生态制剂的制备方法可利于茶多酚有效成分的溶出，保护茶多酚和降低茶多酚损失，能够有效提高发酵成品中游离茶多酚含量，还能延长产品的货架期时间，并能达到很好防止霉菌污染的效果；3、本专利技术粪肠球菌BD-1利于肠道紊乱的微生态内环境得到修复和再平衡，利用其制备的微生态制剂产品具有健脾益胃的功效，能够用于防治畜禽夏季集约养殖引起的热应激综合症，提高夏季畜禽养殖生产能力，降低疾病发生，是一种潜在的抗热应激的理想微生态发酵制剂。附图说明图1：粪肠球菌BD-1的系统进化树。具体实施方式以下实施例中，所述绿茶提取残渣是指绿茶在经过现有水提取方法提取之后所留下的残渣；所述太子参须提取物按专利申请号为CN201610758305.8中实施例1公开的方法制备而得；各培养基的配方为：MRS液体培养基(1L)：蛋白胨10g，牛肉粉5g，葡萄糖20g，酵母粉4g，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.2g，柠檬酸三铵2g，硫酸锰0.05g，吐温801mL，纯化水1L，pH值6.2±0.2；MRS琼脂平板或MRS斜面培养基（1L）：蛋白胨10g，牛肉粉5g，葡萄糖20g，酵母粉4g，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.2g，柠檬酸三铵2g，硫酸锰0.05g，吐温801mL，琼脂15g，纯化水1L，pH值6.2±0.2；其中，含太子参提取物、茶多酚或大蒜素的MRS液体培养基均是指在上述MRS液体培养基配方基础上，再另外对应添加太子参提取物、茶多酚或大蒜素；含溴甲酚紫指示剂、茶多酚或大蒜素的MRS琼脂平板内均是指在上述MRS琼脂平板配方基础上，再另外对应添加溴甲酚紫指示剂、茶多酚或大蒜素。实施例1--粪肠球菌BD-1的分离与鉴定1、粪肠球菌BD-1的分离、富集、纯化无菌操作条件下，取福建省宁德市柘荣县下村农户（坐标：119。51′59.7〞E，27。13′34.0〞N）自养健康成年猪本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种饲用粪肠球菌（

【技术特征摘要】
1.一种饲用粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）BD-1，其特征在于：保藏编号为CCTCCNO：M2017416。2.利用如权利要求1所述饲用粪肠球菌BD-1制备防治畜禽热应激的微生态制剂的方法，其特征在于，步骤如下：（1）、粪肠球菌BD-1的活化：将粪肠球菌BD-1试管斜面菌种在无菌环境下用无菌生理盐水冲洗，然后接种到含太子参须提取物0.2~0.5%的MRS液体培养基中，35~37℃静止培养42~48h；其中，所述太子参须提取物的百分比以质量体积百分比g/mL计；（2）、制备粪肠球菌BD-1发酵种子液：无菌环境下，将步骤（1）所得菌种活化液按体积百分比3~5%接种到含太子参须提取物0.2~0.5%的MRS液体培养基中，35~37℃下静止发酵42~48h，制得粪肠球菌BD-1发酵种子液；其中，所述太子参须提取物...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炎达，潘慧青，杨荣平，肖建设，赵齐，林贺桂，
申请(专利权)人：福建贝迪药业有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35