一种肺癌细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种肺癌细胞系及其应用，肺癌细胞系，命名为人肺癌细胞系ZLC‑001，保藏号为：CCTCC NO：C201754。本发明专利技术人肺癌细胞系ZLC‑001来自于一例中国的肺癌患者胸水的肿瘤细胞，STR检测结果证明其是唯一的，且在原代培养过程中未发生和其他细胞的交叉污染，克隆形成与成瘤性强，可以作为肺癌研究及肺癌检测试剂盒开发、药物筛选等方面应用的理想细胞系。

A lung cancer cell line and its application

The invention provides a lung cancer cell line and its application, lung cancer cell line named human lung cancer cell line ZLC 001, the preservation number is: CCTCC NO:C201754. The human lung cancer cell line ZLC 001 from China cases of pleural effusion in patients with lung cancer tumor cells, STR test results prove that it is unique, and in cultured cells and other cross contamination did not occur in the process of cloning, formation and tumorigenicity, as lung cancer research and lung cancer detection ideal cell line development kit and drug screening applications.

【技术实现步骤摘要】
一种肺癌细胞系及其应用
本专利技术涉及生物学和肿瘤学
，特别是涉及一种肺癌细胞系及其应用。
技术介绍
目前，肺癌是世界上发病率和死亡率最高的肿瘤，而非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的约85％。根据中国的癌症数据预测，在2015年将会有73.33万新发肺癌病例，会有61.02万人死于肺癌，因此，肺癌已经成为威胁群众健康的重要因素。肺癌的临床表现比较复杂，症状和体征的有无、轻重以及出现的早晚，取决于肿瘤发生部位、病理类型、有无转移及有无并发症，以及患者的反应程度和耐受性的差异。肺癌早期症状常较轻微，甚至可无任何不适。中央型肺癌症状出现早且重，周围型肺癌症状出现晚且较轻，甚至无症状，常在体检时被发现。早期非小细胞肺癌(I、II期)主要经手术，约25％的手术病例接受化疗和/或放射治疗，大多数III期和IV期的NSCLC患者一般会接受化疗、放射治疗。目前，早期肺癌的5年生存率可达到55％，但晚期肺癌的5年生存率却只有4％。由于早期肺癌并未出现临床症状，大多数肺癌(57％)确诊时已存在远处转移。随着一些关于肺癌分子生物学研究的开展，一些癌基因和抑癌基因在肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用，这些发现从根本上改变了非小细胞肺癌患者的治疗方案。因此，靶向治疗药物，如血管生成抑制剂，表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂和间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂也成为了NSCLC治疗的重要部分。此外，免疫治疗通过靶向程序性细胞死亡作用的药物受体在T细胞上已被批准用于治疗某些类型的NSCLC。为深入了解非小细胞肺癌的发病机理及靶向治疗和化疗的抗癌药物研究，必须建立合适的研究模型。然而，目前已经建立的NSCLC患者细胞系大多都来源于西方国家，但一些流行病学、分子研究和临床表现发现黄种人和白种人在非小细胞肺癌的各个方面存在相当大的差异，包括不吸烟的女性比例，EGFR突变情况与酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物临床反应等。而且，随着肿瘤精准医学的治疗理念的深入临床实践，提供更多的肺癌细胞株有助于靶向药物的研发和应用。建立中国人来源的肺癌细胞株，为肺癌的发病机制及治疗提供新的模型，具有重要的理论和实际应用价值。
技术实现思路
本专利技术针对目前国内缺乏中国人来源的肺癌细胞株，而提供了一种来源于中国人的肺癌细胞系。本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001从一例肺癌患者(患者为44岁中国女性，肿瘤位于右肺中、下叶，胸腔镜胸壁内膜活检病理提示(右侧壁胸膜)腺癌，临床分期4期。)的胸水，离心后取肿瘤细胞，经原代培养并建系成功后，命名为人肺癌细胞系ZLC-001，于2017年5月31日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCCNO：C201754。本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001细胞在倒置光学相差显微镜下观察呈扁平不规则多角形，细胞体积大，核大，胞浆丰富，细胞间连接紧密，贴壁生长，符合腺上皮样细胞的特点。贴壁后生长较快，具有良好的体外培养扩增性。染色体数目大多分布在60～69之间，众数为61，符合恶性肿瘤的特征。本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001的STR测序结果与ATCC、DSMZ等细胞保存库的数据库进行查询对比，未发现相同STR检测结果，证明其是唯一的，且在原代培养过程中未发生和其他细胞的交叉污染。免疫组化实验发现，人肺癌细胞系ZLC-001细胞呈CK7阳性，CK5/6阴性，NSE阴性，p63阴性，TTF1阴性和Vimentin阳性。克隆形成实验发现，人肺癌细胞系ZLC-001细胞的克隆形成率与接种密度有关，接种密度为4500个细胞时的细胞克隆形成能力较强。裸鼠(裸小鼠)成瘤实验结果发现，人肺癌细胞系ZLC-001具有较强的成瘤性。本专利技术又提供了所述的肺癌细胞系的子代细胞。所述子代细胞基本或全部保留了亲代细胞的特性。本专利技术又提供了所述的肺癌细胞系在作为肺癌发生机理研究的细胞模型中的应用。由于本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001是从中国人来源建立的，且建系时间较短，性状稳定，以该肺癌细胞系作为研究模型，对于了解中国人的原发性肺癌发生机理有很大帮助。本专利技术还提供了所述的肺癌细胞系在建立哺乳动物肺癌模型中的应用。所述的哺乳动物为裸小鼠或裸大鼠。通过将一定细胞数量的所述人肺癌细胞系ZLC-001细胞接种于裸小鼠或裸大鼠的皮下、肝脏、腹腔或者尾静脉等部位，获得肺癌的动物模型。本专利技术还提供了所述的肺癌细胞系在提取肺癌特异性肿瘤标志物中的应用。通过与正常的肺细胞及其他种类的癌症细胞进行比较研究，可以发现肺癌的分子标记，针对该分子标记可以进行后续的疾病检测及药物开发等方面的应用。本专利技术还提供了所述的肺癌细胞系在筛选或评估治疗肺癌药物中的应用。首先，通过向所述人肺癌细胞系ZLC-001培养基中添加不同药物，观察细胞状态变化，获得初步有效的候选药物。然后，将候选药物施药于上述肺癌的动物模型，观察与未施药组动物的存活期、肿瘤大小、转移情况等，筛选获得潜在治疗肺癌的药物。本专利技术还提供了所述的肺癌细胞系在开发肺癌检测试剂盒中的应用。发现肺癌特异性的肿瘤标志物后，可根据该肿瘤标志物开发出检测肺癌发生或发展情况的检测试剂盒。本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001来自于一例中国的肺癌患者胸水，STR检测结果证明其是唯一的，且在原代培养过程中未发生和其他细胞的交叉污染，克隆形成与成瘤性强，可以作为肺癌研究及肺癌检测试剂盒开发、药物筛选等方面应用的理想细胞系。附图说明图1为本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001细胞的形态检测图；图2为本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001的细胞生长曲线图；图3为本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001细胞的染色体核型分布图；图4为STR分析结果图，其中，图A～F分别是不同等位基因的结果图；图5为人肺癌细胞系ZLC-001细胞免疫组织化学分析结果图，其中，图A～F分别为CK7、CK5/6、NSE、p63、TTF1、Vimentin；图6为本专利技术人肺癌细胞系ZLC-001细胞克隆形成实验结果图，其中，图A、B和C接种细胞数分别为500、1500和4500个；图7为裸鼠成瘤实验结果图。具体实施方式实施例1从一例肺癌患者(患者为44岁中国女性，肿瘤位于右肺中、下叶，胸腔镜胸壁内膜活检病理提示(右侧壁胸膜)腺癌，临床分期4期。)的胸水。将胸水低速离心，1000rpm，5分钟。弃去上清，加入适量PBS缓冲液，反复轻柔吹打细胞，使其重悬，再次离心，1000rpm，5分钟。弃去上清，加入10mL的含10％FBS(GIBCO公司)，1％双抗，1％非必需氨基酸(GIBCO公司)，DMEM/F12细胞培养基(GIBCO公司)的原代细胞培养基，轻柔吹打混匀，将悬液转移至10cm培养皿中，放入5％CO2，37℃细胞培养箱中，5～7天后更换新鲜培养基。传代过程中，利用成纤维细胞与肿瘤细胞的消化能力存在差异，不断去除成纤维细胞，直至培养皿中已无法到肉眼可见的成纤维细胞，并能持续传代生长。建系成功后，命名为人肺癌细胞系ZLC-001，于2017年5月31日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCCNO：C201754。实施例2取传代培养的人肺癌细胞系ZLC-001细胞，在光学显微镜下(日本OlympusIMT-2倒置显微镜)观察活细胞生长情况。如图1所示，本文档来自技高网...

【技术保护点】
肺癌细胞系，其特征在于，命名为人肺癌细胞系ZLC‑001，保藏号为：CCTCC NO：C201754。

【技术特征摘要】
1.肺癌细胞系，其特征在于，命名为人肺癌细胞系ZLC-001，保藏号为：CCTCCNO：C201754。2.如权利要求1所述的肺癌细胞系的子代细胞。3.如权利要求1所述的肺癌细胞系在作为肺癌发生机理研究的细胞模型中的应用。4.如权利要求1所述的肺癌细胞系在建立哺乳动物肺癌模型...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏丹，范云，毛伟敏，应莉莎，
申请(专利权)人：浙江省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：浙江,33