一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法，其特征在于，随机选取健康家兔作为模型动物，在造模期间G0组皮下注射0.9％氯化钠溶液0.5ml/kg，G1～G3组均以分析纯CCl4背部皮下注射，每周两次，共16周，经病理学检测，均表现明显的肝纤维化特征。本发明专利技术通过家兔皮下注射纯CCl4，可成功建立死亡率低、成模率高、稳定的家兔肝纤维化模型，再通过实验室试验包括动物试验的定性或者定量数据，研究肝纤维化及肝癌的发生机制，筛选和预测防治肝纤维化的有效药物，证明药物在防治肝纤维化上的医药用途、药理作用，评价相关药物对疾病的药效，为临床抗炎、抗纤维化研究提供依据。

Establishment of a rabbit model of hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride

The invention discloses a method for using carbon tetrachloride induced liver fibrosis in rabbit model establishment method, which is characterized in that the randomly selected healthy rabbits as animal model, the rats in the G0 group was injected during the 0.9% Sodium Chloride Solution 0.5ml/kg, G1 ~ G3 groups were analyzed by pure CCl4 dorsal cutaneous injection, two times a week, 16 weeks after histological examination showed obvious characteristics of hepatic fibrosis. The present invention by rabbit subcutaneous injection of pure CCl4, can be successfully established a low mortality, incidence of hepatic fibrosis model, high stability, and animal experiment of qualitative or quantitative data including through laboratory experiments, study on the pathogenesis of hepatic fibrosis and liver cancer, drug screening and prediction of effective prevention and treatment of liver fibrosis, and proof of medical use drugs in the prevention and treatment of liver fibrosis on pharmacology, pharmacodynamic evaluation related drugs against the disease, provide the basis for the study of clinical anti-inflammatory and anti fibrosis.

【技术实现步骤摘要】
一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法
本专利技术涉及动物模型的建立方法，具体是一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法。
技术介绍
肝纤维化指各种病因作用下肝内纤维增生，可伴有纤维隔形成。肝纤维化主要是一种病理概念，系指肝组织内细胞外基质成分过度增生与异常沉积，所导致的肝脏结构和/或功能异常改变的病理变化。其病理机制也多是由于肝实质细胞坏死、导致肝脏网状支架塌陷而形成，是一种被动与不可逆的病理过程。肝纤维化动物模型的建立有多种方法，需同时兼顾造模的重复性、可预测性、可比性和经济性等多因素，CCl4造模法最常使用。不同的给药途径亦可产生不同的造模效果，CCl4造模法常见的给药途径有口服、腹腔注射、皮下注射等，有学者采用皮下注射法成功建立了大鼠肝纤维化模型。周贤等研究显示，CCl4皮下注射法建立动物肝纤维化模型死亡率低，成模时间短。刘满荣等通过不同给药途径建立家兔肝纤维化模型的对比研究认为，腹腔注射吸收快，肝毒性大，易导致急性肝衰竭；喂养法CCl4服入剂量受动物食欲影响较大，有效剂量难以控制，导致CCl4的刺激性和肝毒性较小，造模周期长；皮下注射给药时吸收较缓慢，较为符合肝纤维化形成的缓慢过程，是最佳的给药途径。肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化的必经阶段，有研究表明，肝纤维化向肝硬化的发展是渐进、可逆的过程，因此逆转肝纤维化、防止其进一步发展已经成为慢性肝病防治中的关键问题。建立肝纤维化动物模型对肝纤维化的诊断研究及防治有重要意义，也是临床人体研究的前提。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种死亡率低、成模率高的采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法，随机选取健康家兔作为模型动物，在造模期间G0组皮下注射0.9％氯化钠溶液0.5ml/kg，G1～G3组均以分析纯CCl4背部皮下注射，每周两次，共16周，经病理学检测，均表现明显的肝纤维化特征。作为本专利技术进一步的方案：所述G1、G3组分别以0.2、0.5ml/kg的分析纯CCl4背部皮下注射。作为本专利技术再进一步的方案：所述G2组背部皮下注射分析纯CCl4的起始剂量为0.3ml/kg，3周后增加剂量为0.4ml/kg,5周后增加剂量为0.5ml/kg，此后维持剂量在0.5ml/kg。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过家兔皮下注射纯CCl4，起始剂量为0.3ml/kg并剂量递增，可成功建立死亡率低、成模率高、稳定的家兔肝纤维化模型，构建与人类肝纤维化病因、病程和病理相似的实验动物模型，于此基础，通过实验室试验包括动物试验的定性或者定量数据，研究肝纤维化及肝癌的发生机制，筛选和预测防治肝纤维化的有效药物，证明药物在防治肝纤维化上的医药用途、药理作用，评价相关药物对疾病的药效，为临床抗炎、抗纤维化研究提供依据，该造模方法值得在科研实验中推广使用。附图说明图1为本专利技术造模期间G0～G3组家兔体质量变化的示意图。图2为本专利技术家兔肝纤维化分期病理学检查结果HE染色意图。图3为本专利技术家兔肝纤维化分期病理学检查结果Masson染色示意图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法，随机选取健康家兔作为模型动物，在造模期间G0组皮下注射0.9％氯化钠溶液0.5ml/kg，G1～G3组均以分析纯CCl4背部皮下注射，每周两次，共16周，经病理学检测，均表现明显的肝纤维化特征。具体建立过程如下：1、动物与方法：1.1实验动物：2015年4-9月，选用健康新西兰大白兔46只，不限雌雄，体质量2.0kg～3.5kg，4～6月龄，由石河子大学医学院实验动物中心提供。家兔均饲养在层叠式不锈钢丝笼中，喂食2次/d，100g/次，自由饮用自来水。动物房通风良好，排气扇24h开放，并使用循环风紫外线消毒机消毒至少2次/d。46只家兔分笼适应性饲养1周，编号为01-46，根据其体重是否≧3.0kg将所有家兔分为两组(A、B)，再使用抽签法分别将上述两组随机分为4组(A0-A3，B0-B3)，A0和B0组合为G0组，余类推。其中，G0组为对照(10只),G1～G3组为造模(各12只)。实验过程中对家兔的处置符合动物伦理学标准，并通过石河子大学医学院第一附属医院医学伦理委员会批准。1.2方法：1.2.1实验试剂：分析纯CCl4(含量≥99.5％)购于天津永晟精细化工有限公司；10％中性甲醛组织固定剂购于中山市康乃欣生物医疗科技有限公司；分析纯水合氯醛(含量≥99.5％)购于天津市福晨化学试剂厂。1.2.2模型制作：G0组皮下注射0.9％氯化钠溶液0.5ml/kg，G1～G3组分别以0.2、0.3、0.5ml/kg的分析纯CCl4背部皮下注射，2次/周，共16周,每周称重1次。G2组起始剂量为0.3ml/kg，3周后增加剂量为0.4ml/kg,5周后增加剂量为0.5ml/kg，此后维持剂量在0.5ml/kg。造模后第4、6、8、10、12、14周,分别从G1～G3组随机选取1只家兔，8％水合氯醛盐溶液2ml/kg耳缘静脉缓慢注射，根据实际麻醉情况自行调整麻醉剂量。麻醉成功后，立即处死家兔并取约3.0cm×1.0cm×0.3cm的肝组织标本。第16周处死所有实验组家兔及2只对照组家兔，造模期间死亡的家兔立即取肝组织标本进行病理检查。1.2.3病理学检查：肝组织标本于10％中性甲醛溶液中固定48h后，取10mm×10mm×15mm肝脏标本置于脱水盒中，放入脱水机自动脱水、透明、浸蜡、包埋，连续切片5张，厚度为3～5μm。分别进行HE及Masson染色，染色后的切片由病理科医师独立、盲法阅片。采用Metavir分期法，根据肝脏炎症坏死程度及肝包膜、汇管区、肝窦壁及中央静脉等处的胶原纤维增生情况对肝脏标本进行肝纤维化分期，F0期：无纤维化；F1期：汇管区纤维化扩大，局限窦周及小叶内纤维化；F2期：汇管区周围纤维化，纤维化形成，小叶结构保留；F3期：纤维间隔板小叶结构紊乱，无肝硬化；F4期：早期肝硬化。1.3统计学方法采用SPSS17.0软件进行分析。家兔死亡率及肝纤维化成模率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2、结果：2.1造模期间家兔一般情况造模期间，G0组家兔均表现活泼，毛发有光泽，进食正常，大小便正常，体质量逐渐增加。G1～G3组家兔活动度欠佳，常静卧于笼中，精神萎靡，反应迟钝，肌肉松弛，肌张力差。毛发日渐蓬松、脱落、稀疏，进食减少，大小便次数及量减少，体质量日趋下降，如图1所示。另外，G1～G3组家兔免疫力下降，注射部位皮肤经久不愈，甚至糜烂，其中2只家兔出现结膜炎、耳部感染。2.2造模3周内家兔死亡情况各组造模3周内家兔死亡率比较，差异有统计学意义(χ2＝7.004，P＝0.048)；其中，G3组家兔死亡率高于G0、G1、G2组，差异有统计学意义(P<0.001，如表1所示。造模3周内死亡的7只家兔，均发生在该次造模后24～48h内，造模4周后无家兔死亡。表1各组家兔造模3周内(前6次造模)死亡情况(只)组别只数第1次第2次第3次第4次第本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法，其特征在于，随机选取健康家兔作为模型动物，在造模期间G0组皮下注射0.9％氯化钠溶液0.5ml/kg，G1～G3组均以分析纯CCl4背部皮下注射，每周两次，共16周，经病理学检测，均表现明显的肝纤维化特征。

【技术特征摘要】
1.一种采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法，其特征在于，随机选取健康家兔作为模型动物，在造模期间G0组皮下注射0.9％氯化钠溶液0.5ml/kg，G1～G3组均以分析纯CCl4背部皮下注射，每周两次，共16周，经病理学检测，均表现明显的肝纤维化特征。2.根据权利要求1所述的采用四氯化碳诱导家兔肝纤维化模型的建立方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李军，李述刚，刘闪闪，田凤，崔晓宾，邓玉宏，杜婷婷，王甲嘉，童谨，马婷，康燕飞，葛肖艳，
申请(专利权)人：石河子大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：新疆,65