一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒、其制备方法和检测方法技术

一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒、其制备方法和检测方法，本发明专利技术属于免疫诊断技术领域，本发明专利技术的目的在于针对现有技术中存在的不足，本发明专利技术采用以下技术方案：试纸条上的检测带（T）包被有与待检物相对应的抗AMH抗体，在对照带（C）包被抗亲和素抗体，在偶合物垫上包被有胶体金标记的抗AMH抗体和胶体金标记的亲和素。本发明专利技术的有益效果在于，本发明专利技术检测卡能够快速定量检测人血清、血浆、全血中的AMH浓度，首先操作简单，使用方便，单人份独立包被，克服了小样本量不能即时检测的弊端，20分钟即可报告浓度结果，大大缩短了检测时间。

A test kit, anti Mullerian hormone tube and its preparation method and detection method

A test kit, anti Mullerian hormone tube and its preparation method and detection method, the invention belongs to the technical field of immunological diagnosis, the aim of the invention is to solve the problems existing in the existing technology, the invention adopts the following technical scheme: the test strip on the belt (T) coated with samples relative the anti AMH antibody in the control zone (C) coated anti avidin antibody in the conjugate pad is covered by a biotin affinity colloidal gold labeled anti AMH antibody and colloidal gold labeled. The invention has the advantages that the invention can detect card AMH concentration in whole blood, serum, plasma detection and rapid quantitative, firstly, simple operation, convenient use, single independent package, to overcome the small sample size can not be real-time detection of defects, 20 minutes report concentration results, shorten testing time.

【技术实现步骤摘要】
一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒、其制备方法和检测方法
本专利技术涉及医学
，尤其涉及一种一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
抗穆勒氏管激素（anti-Mullerianhormone，AMH）是转化生长因子β超家族的成员之一，由ProfessorAlfredJost于1974年首先发现。AMH是由两个相同的70KD亚基，通过二硫键连接组成的二聚糖蛋白，相对分子质量为140KD；人类AMH编码基因位于19号染色体短臂，大小2.4～2.8kb，含有5个外显子。抗穆勒氏管激素（AMH）在性腺器官发育过程中起着重要作用，是男女性腺功能的重要标记物之一：在男性AMH主要由睾丸间质细胞产生，始于胚胎形成并贯穿生命始终；在男性胎儿的发育过程中，AMH导致穆勒氏管退化，形成正常发育的男性生殖管道。在女性AMH主要由卵巢颗粒细胞产生，血清AMH保持相对于男性较低的一个水平，从青春期开始，血清AMH水平随时间慢慢降低，并在更年期降低到ELISA法检测不到的水平。目前，国内外用于AMH检测采用的方法原理主要有免酶联免疫法、化学发光法和胶体金法。化学发光需要专用分析仪，且价格昂贵，酶联免疫法大多采用96微孔板检测，步骤繁琐耗时，胶体金法操作简单、使用方便、检测速度快。
技术实现思路
本试剂盒采用的基本原理为免疫胶体金层析法：试纸条上的检测带（T）包被有与待检物相对应的抗AMH抗体，在对照带（C）包被抗亲和素抗体，在偶合物垫上包被有胶体金标记的抗AMH抗体和胶体金标记的亲和素。检测时，当样本中含有待检物时，样本中的待检物与胶体金标记的抗AMH抗体偶合物形成免疫复合物，随后免疫复合物上的待检物被捕获并固定在硝基纤维素膜上形成一条红色的检测带（T），同时，偶合物垫上的亲和素标记物流经对照区（C）并被已固定的抗亲和素抗体所捕获形成一条红色对照带，反应完成后，分析仪对对照带和检测带进行分析，计算出样本中的抗缪勒氏管激素浓度。一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：一、包被硝酸纤维素膜1）配制包被液：将抗AMH抗体和亲合素抗体分别配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；2）包被：将硝酸纤维膜裁成片，将步骤1）中配包被液分别包被在膜片上，制成含AMH抗体包被液的硝酸纤维膜和含亲合素抗体的硝酸纤维膜；3）干燥：将包被好的硝酸纤维膜置于37℃恒温干燥18-20个小时；二、包被金标垫1）标记抗体：制备胶体金标记的鼠单抗AMH抗体和亲合素偶合物，并配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；2）包被：将金标垫切割成片，用封闭液封闭后干燥，将上一步骤配制好的包被液包被在金标垫上；3）干燥：将包被好的金标垫条置于37℃恒温干燥18-22个小时。三、贴膜1、将包被的硝酸纤维素膜、包被金标垫、样品垫和液体吸水垫按次序依次组合后黏贴在PVC板上，制成检测条；四、切割1）将（三）中贴好的检测条切成切割成单人份的4.0±0.05mm的条带；五、组装1）将条带按照次序装于金标外壳上，然后压紧金标上盖。一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：，将试剂盒平放，用加样枪在加样孔中加入待测样本，放入金标免疫分析仪中，得到检测结果。一种用于测定抗缪勒氏管激素的试剂盒。本专利技术的有益效果在于，本专利技术检测卡能够快速定量检测人血清、血浆、全血中的AMH浓度，首先操作简单，使用方便，单人份独立包被，克服了小样本量不能即时检测的弊端，20分钟即可报告浓度结果，大大缩短了检测时间。具体实施方式以下结合为对本专利技术的具体说明：实施例1一、包被硝酸纤维素膜1）配制包被液：将抗AMH抗体以及亲合素抗体配制成1.5mg/mL包被浓度；2）包被：将硝酸纤维膜栽成300mmX25mm的膜片，通过包被机，将1）中配置好的包被液包被在膜片上；3）干燥：将包被好的膜片条置于37℃恒温干燥19个小时。二、包被金标垫1）标记抗体：制备胶体金标记鼠单抗AMH抗体和亲合素偶合物，并配制成1mg/mL的包被浓度；2）包被：将玻璃纤维素膜切割为300X13mm的膜片，用封闭液封闭后干燥，将1）中配制好的溶液包被在垫上；3）干燥：将包被好的金标垫条置于37℃恒温干燥20个小时。三、贴膜1、将干燥好的硝酸纤维素膜膜、金标垫和样品垫、液体吸水垫按照一定顺序组合黏贴在有粘性的PVC板的正面；五、切割2）将（三）中贴好的膜片切成一定宽度的条带；五、组装5.1切条：将层压好的大卡用自动斩切机切成4.0mm（±0.05mm）的试纸条，头尾废料都应有完整荧光微球线条。如缺少应在已切割试纸条内找出不合格的试纸条，去除硝酸纤维素膜上有记号的废条；5.2放条：试纸条有荧光微球端放在底盖有数字一端小心放入卡槽，并确认各组件完好；5.3压上盖：将上盖有加样口的一端对齐有荧光微球端盖紧上盖，并放入压盒机压紧，并确认压合紧密无缝隙；5.4目检：试纸条应当与检测卡平行、硝酸纤维素膜的膜面洁净，无破损，检测卡上盖整洁和图案完整，条形码清晰、位置无偏移，样本垫无偏移无侧漏，确认上盖印刷项目名称和生产指令是否一致，上下盖配合紧密无缝隙；5.5装干燥剂前：确认干燥剂无破损，湿度卡(干燥剂自带)没变色；铝箔袋无破损；5.6装干燥剂：将1个干燥剂竖直放入铝箔袋正面（有标签面为正面）左下角；5.7装检测卡：将合格的检测卡竖直放入已装有1个干燥剂铝箔袋底部的右侧；5.8封口前：封口温度设置正确，确认每个铝箔袋内有1个干燥剂和1个检测卡，且干燥剂和检测卡不能重叠，铝箔袋无破损；5.9封口：铝箔袋正面朝上，封口机封口，封口处应平整无歪扭；检测时，将检测卡平放于实验台上，用加样枪在加样孔中分别加入100μl待测样本，放入金标免疫分析仪，20分钟后仪器自动报告检测结果。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：一、包被硝酸纤维素膜1）配制包被液：将抗AMH抗体和亲合素抗体分别配制成0.5‑2mg/mL的包被浓度；2）包被：将硝酸纤维膜裁成片，将步骤1）中配包被液分别包被在膜片上，制成含AMH抗体包被液的硝酸纤维膜和含亲合素抗体的硝酸纤维膜；3）干燥：将包被好的硝酸纤维膜置于37℃恒温干燥18‑20个小时；二、包被金标垫1）标记抗体：制备胶体金标记的鼠单抗AMH抗体和亲合素偶合物，并配制成0.5‑2mg/mL的包被浓度；2）包被：将金标垫切割成片，用封闭液封闭后干燥，将上一步骤配制好的包被液包被在金标垫上；3）干燥：将包被好的金标垫条置于37℃恒温干燥18‑22个小时;三、贴膜1、将包被的硝酸纤维素膜、包被金标垫、样品垫和液体吸水垫按次序依次组合后黏贴在PVC板上，制成检测条；四、切割1）将（三）中贴好的检测条切成切割成单人份的3.5±0.05mm的条带；五、组装1）将条带按照次序装于金标外壳上，然后压紧金标上盖。

【技术特征摘要】
1.一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：一、包被硝酸纤维素膜1）配制包被液：将抗AMH抗体和亲合素抗体分别配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；2）包被：将硝酸纤维膜裁成片，将步骤1）中配包被液分别包被在膜片上，制成含AMH抗体包被液的硝酸纤维膜和含亲合素抗体的硝酸纤维膜；3）干燥：将包被好的硝酸纤维膜置于37℃恒温干燥18-20个小时；二、包被金标垫1）标记抗体：制备胶体金标记的鼠单抗AMH抗体和亲合素偶合物，并配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；2）包被：将金标垫切割成片，用封闭液封闭后干燥，将上一步骤配...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡鹍辉，夏福臻，钱纯亘，张赛，吴力强，宋永波，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44