用于细胞分离的微流体方法和盒技术

本发明专利技术公开一种根据展示以及优选地分泌所关注蛋白质的水平从异源表达细胞的群体中选择细胞的方法，其包括：(a)将所述细胞与磁珠接触，其中所述磁珠涂覆所述细胞的亲和基团；(b)将所述磁珠与所述细胞混合，从而捕获展示/分泌所关注蛋白质的细胞；(c)实施至少一次洗涤步骤，从而除去未捕获的细胞；以及(d)回收结合有磁珠的细胞。

Microfluidic methods and boxes for cell separation

The invention discloses a display and preferably according to the secretion of protein of interest level method, select cell groups in the expression from a heterologous comprising: (a) the cells with magnetic contact, the affinity group of said magnetic beads coated with said cells; (b) the bead and the cells were mixed, show concern to capture / secreted protein cells; (c) the implementation of at least one washing step to remove Untrapped cells; and (d) combined with magnetic cell recovery.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于细胞分离的微流体方法和盒
本专利技术涉及根据所关注蛋白质的表达(优选为展示，更优选为分泌)水平使用磁珠从异源表达细胞的群体中选择细胞的方法。此外，本专利技术还涉及基于所关注蛋白质的表达(优选为展示，更优选为分泌)水平来进行细胞选择的微流体基(优选为一次性)无菌盒(cartridge)，以及用于处理微流体反应室内的磁珠的方法。
技术介绍
构建用于高效生产治疗性蛋白质的哺乳动物细胞系已经通过构建更高效的DNA载体和改造细胞系而得到极大的改善(Girodetal.,2007,Galbeteetal.,2009,Leyetal.,2013；LeFournetal.,2014)。然而，人工筛选细胞系是耗时且劳动密集的，其通常仍在实施以识别具有最佳性质的那些，例如具有最高生产率的那些。因此，本领域需要设计从大量稳定转染的细胞群体中筛选顶级生产型细胞系(由此是生产最高水平的转基因的细胞系)的自动化过程。具体而言，需要研发用于快速识别选择和/或分选CHO和其他重组细胞的方法，其中所述CHO和其他重组细胞表达(优选为展示，更优选为分泌)高水平的例如治疗性蛋白质。在一些学术试验室中具有一些公开文献，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于识别以及优选地选择在其表面上展示所关注蛋白质的细胞的方法，其包括：(a)提供包含所述细胞的样品；(b)提供包含一个或多个亲和基团的官能化磁珠，以及可任选的载体珠，其中所述亲和基团适用于结合在其表面上展示所述蛋白质的细胞；(c)将所述细胞与所述官能化磁珠和可任选的所述载体珠混合，其中所述珠的所述亲和基团结合在其表面上展示所述蛋白质的细胞，从而生产具有磁性标记的磁性标记细胞(MLC)，(d)例如在至少一个洗涤步骤中，将非磁性标记的细胞与所述MLC分离；以及(e)识别以及优选地选择在其表面上展示所述蛋白质的细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.07 US 62/046,9791.一种用于识别以及优选地选择在其表面上展示所关注蛋白质的细胞的方法，其包括：(a)提供包含所述细胞的样品；(b)提供包含一个或多个亲和基团的官能化磁珠，以及可任选的载体珠，其中所述亲和基团适用于结合在其表面上展示所述蛋白质的细胞；(c)将所述细胞与所述官能化磁珠和可任选的所述载体珠混合，其中所述珠的所述亲和基团结合在其表面上展示所述蛋白质的细胞，从而生产具有磁性标记的磁性标记细胞(MLC)，(d)例如在至少一个洗涤步骤中，将非磁性标记的细胞与所述MLC分离；以及(e)识别以及优选地选择在其表面上展示所述蛋白质的细胞。2.权利要求1所述的方法，其中所述所关注蛋白质为标志物蛋白或转基因表达产物(TEP)。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述细胞为重组细胞，并且所述样品包含使用转基因转染的所述重组细胞，其中所述所关注蛋白质为转基因表达产物(TEP)；并且其中所述MLC在与所述亲和基团结合后在一定的时间间隔内失去其磁性标记，并且其中基于所述时间间隔识别以及优选地选择MLC。4.权利要求3所述的方法，其中基于所述时间间隔，将分泌TEP的重组细胞与展示但不分泌TEP的重组细胞分离。5.根据权利要求2至4的任意一项所述的方法，其中选择结合后在少于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23小时内失去磁性标记的，结合后在少于24、少于36、少于48、少于60、少于72、少于84或少于96小时内失去磁性标记的MLC。6.权利要求1或2所述的方法，其中所述所关注蛋白质为识别干细胞，特别是癌症干细胞或循环肿瘤细胞的标志物蛋白。7.上述权利要求的任意一项所述的方法，其中磁珠的所述亲和基团与蛋白质直接结合。8.根据上述权利要求的任意一项所述的方法，其进一步包括提供至少一个连接分子，其中所述至少一个连接分子与所述亲和基团和所述蛋白质结合，从而连接所述磁珠和所述蛋白质。9.权利要求8所述的方法，其中所述连接分子为抗体或其片段，其可任选地被生物素化。10.根据上述权利要求的任意一项所述的方法，其中所述细胞是在高于20、24、26、28、30、32、34或36度的温度下混合的。11.根据上述权利要求的任意一项所述的方法，其包括将所述官能化磁珠(捕获珠)与载体珠混合，其中所述混合物处于反应室中。12.权利要求11所述的方法，其中所述方法进一步包括：向所述反应室施加具有振幅和极性的外部磁场，其中在所述外部磁场中，通过所述载体珠促进所述捕获珠与展示蛋白质的细胞的混合。13.权利要求12所述的方法，其中所述捕获珠为超顺磁珠，所述载体珠为铁磁珠。14.权利要求12或13所述的方法，其中所述捕获珠与所述载体珠的比例为2:1至50:1、5:1至25:1，优选为8:1至12:1或者大约10:1。15.权利要求12和任意随后的权利要求所述的方法，其进一步包括改变所述振幅和/或所述极性，从而限定连续的操作模式，其中(c)中的所述混合是以混合模式实施的，并且(d)中所述分离是以珠分离模式实施的。16.权利要求15所述的方法，其中所述细胞为重组细胞，并且其中所述在表面上表达的蛋白质为TEP，并且其中(e)中的所述识别是通过从反应室洗脱所述细胞来实施的，其中所述细胞结合后在少于48小时，优选少于36或24小时内失去其磁珠。17.权利要求15或16所述的方法，其中在所述混合和珠分离模式中，所述磁场是在1Hz-1000Hz和0.1至10000mA下，优选在40至500Hz和200-500mA下以循环或交替模式施加的。18.权利要求15、16或17所述的方法，其中所述混合模式和/或珠分离模式均持续不到60秒。19.一种基于蛋白质的展示水平以及可任选的蛋白质的分泌水平从细胞群体中选择细胞的盒，其中所述细胞群体包含展示以及可任选地分泌所述蛋白质的细胞，其中所述盒包含：a.微流体通道；b.用于在悬浮液中混合磁珠的反应室，其中所述反应室具有用于将流体引入所述反应室的至少一个输入通道以及将流体从所述反应室中除去的至少一个输出通道；c.细胞样品容器，其通过所述输入通道与所述反应室形成流体连通；d.至少一个洗涤试剂容器，其通过所述输入通道与所述反应室形...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·梅尔莫，N·哈拉吉，X·德罗兹，A·里达，PA·吉罗德，A·瑞格米，T·科隆贝特，E·兰孔，
申请(专利权)人：思兰克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH