本发明专利技术涉及包含α‑淀粉酶的变体的清洁组合物以及包含此类组合物的清洁方法，所述变体相对于其亲本酶对螯合剂具有改善的稳定性。
A clean composition containing amylase variants with high stability in the presence of chelating agents
The present invention relates to cleaning compositions comprising alpha amylase variants and cleaning method comprising such compositions, the variants with improved stability with respect to its parent enzyme of chelating agent.
【技术实现步骤摘要】
包含在螯合剂的存在下具有高稳定性的淀粉酶的变体的清洁组合物本申请是申请日为2011年2月10日、专利技术名称为“包含在螯合剂的存在下具有高稳定性的淀粉酶的变体的清洁组合物”的中国专利申请No.201180008929.3的分案申请。参考序列表本专利申请包含计算机可读形式的序列表。所述计算机可读形式以引用方式并入本文。专利
本专利技术涉及包含α-淀粉酶的变体的清洁组合物，所述变体相对于其亲本酶对螯合剂具有改善的稳定性。专利技术背景α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)构成一组酶，它们催化淀粉与其它直链和支链1,4-葡糖苷低聚-和多糖的水解。使用的第一细菌α-淀粉酶是来自地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的α-淀粉酶，也称为特妙淀粉酶，其已经被广泛的表征并且已经测定了这种酶的晶体结构。碱性淀粉酶如来源于芽孢杆菌属(Bacillussp.)的α-淀粉酶在WO95/26397中公开，它们构成一组在洗涤剂中使用的特殊α-淀粉酶。多种这些已知的细菌淀粉酶已经经修饰已改善它们在特定应用中的功能。特妙淀粉酶和多种高效α-淀粉酶需要钙以具有活性。发现特妙淀粉酶的晶体结构是四个钙原子结合到α-淀粉酶结构中，所述结构由带负电的氨基酸残基配位。在其它α-淀粉酶中结合到结构中的钙离子的量可能不同。这种对钙的需求在其中存在强螯合化合物的应用中，例如在洗涤剂和清洁组合物中是一个缺点。如上所述，熟知的是许多酶依赖钙或其它金属离子如镁或锌以获得活性和稳定性，因此，开发在包含螯合剂的洗涤剂和清洁组合物中既稳定又显示良好性能的酶是一个挑战。加入螯合剂以降低洗涤期间的水硬度、保护也可能存在的漂白剂，并且螯合剂也具有对移除污渍的直接效应。洗涤剂中依赖钙的酶的稳定性有时能够通过将钙加到洗涤剂中进行改善，但是这常常将随后破坏污渍移除效应。此外，将钙加到液体洗涤剂中可能引起制剂问题，即，洗涤剂的物理稳定性问题。专利技术概述因此，提供α-淀粉酶的组合物和变体将是有益的，它们对螯合剂稳定并且优选具有保留下来的或比亲本α-淀粉酶更高的洗涤性能。因此，本专利技术的第一方面涉及包含亲本α-淀粉酶的变体的清洁组合物，其中所述变体包含在一个或多个选自193、195、197、198、200、203、206、210、212、213和243的位点上的取代，所述位点使用根据SEQIDNO:6的编号；并且还包含清洁助剂以及任选的至少一种螯合剂，其中当在21℃和pH8.0下测量时，所述螯合剂在低于10mM的浓度下能够将游离钙离子的浓度从2.0mM降低至0.10mM。在另一方面，本专利技术涉及包含亲本α-淀粉酶的变体的清洁组合物，其中所述α-淀粉酶的变体包含与SEQIDNO:6至少70％相同的氨基酸序列；并且还包含在一个或多个选自193、195、197、198、200、203、206、210、212、213和243的位点上的取代，所述位点使用根据SEQIDNO:6的编号，并且还包含清洁助剂以及任选地还包含至少一种螯合剂，其中当在21℃和pH8.0下测量时，所述螯合剂在低于10mM的浓度下能够将游离钙离子的浓度从2.0mM降低至0.10mM；和清洁助剂。另一方面涉及包含亲本α-淀粉酶的变体的清洁组合物，其中所述变体包含在一个或多个选自193、195、197、198、200、203、206、210、212、213和243的位点上的取代，所述位点使用根据SEQIDNO:6的编号，并且还包含清洁助剂以及任选的至少一种螯合剂，其中当在21℃和pH8.0下测量时，在下述浓度下，所述螯合剂能够将游离钙离子的浓度从2.0mM降低至0.10mM，所述浓度小于能够将游离钙离子的浓度从2.0mM降低至0.10mM的柠檬酸盐浓度的0.9倍；和清洁助剂。在一个优选的方面，本专利技术涉及包含亲本α-淀粉酶的变体的清洁组合物，其中所述变体包含在一个或多个对应于选自195、197、198、200、203、206、210、212、213、243的位点上的改变，并且还包含在一个或多个对应于选自116、118、129、133、142、146、147、149、151、152、169、174、186、235、244、303、320、339、359、418、431、434、447、458的位点上的改变，其中(a)所述改变独立地为(i)紧接所述位点下游并邻近所述位点的氨基酸的插入，(ii)占据所述位点的氨基酸的缺失，和/或(iii)占据所述位点的氨基酸的取代，(b)所述变体具有α-淀粉酶活性；并且(c)每个位点对应于具有氨基酸序列SEQIDNO:6的酶的氨基酸序列的位点。在另一方面，本专利技术涉及包含亲本α-淀粉酶的变体的清洁组合物，其中所述变体包含在氨基酸区域181、182、183、或184中的至少一个、至少两个、或至少三个缺失，并且还包含在一个或多个选自195、197、198、200、203、206、210、212、213、243的位点上的改变，并且还包含在一个或多个选自116、118、129、133、142、146、147、149、151、152、169、174、186、235、244、303、320、339、359、418、431、434、447、458的位点上的改变，其中(a)所述改变独立地为(i)紧接所述位点下游并邻近所述位点的氨基酸的插入，(ii)占据所述位点的氨基酸的缺失，和/或(iii)占据所述位点的氨基酸的取代，(b)所述变体具有α-淀粉酶活性；并且(c)每个位点对应于具有氨基酸序列SEQIDNO:6的酶的氨基酸序列的位点。专利技术详述定义α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)构成一组酶，它们催化淀粉与其它直链和支链1,4-葡糖苷低聚-和多糖的水解。已知α-淀粉酶来源于广泛选择的生物，包括细菌如来自芽孢杆菌属例如地衣芽孢杆菌的菌种；来自真菌如米曲霉(Aspergillusoryzae)(TAKA-淀粉酶)或黑曲霉(Aspergillusniger)的菌种；来自植物如大麦的物种以及来自哺乳动物的物种。野生型酶：术语“野生型”α-淀粉酶指由天然存在的微生物例如天然存在的细菌、酵母或丝状真菌表达的α-淀粉酶。当亲本酶不是变体酶时，术语“野生型酶”和“亲本酶”可互换使用。变体酶：本文将术语“变体”定义为具有α-淀粉酶活性的多肽，其包含在亲本或野生型α-淀粉酶的特定位点上一个或多个(或一个或若干个)氨基酸残基的改变如取代、插入、和/或缺失。优选小于50个修改形式，更优选小于30个修改形式。经由人工干预，通过修饰亲本α-淀粉酶获得改变的α-淀粉酶。亲本酶：如本文所用，术语“亲本”α-淀粉酶指进行修饰以产生本专利技术的变体α-淀粉酶的α-淀粉酶。这个术语也指与本专利技术的变体进行比较的多肽。亲本可为天然存在的(野生型)多肽，或它甚至可为其通过任何合适方法制备的变体。例如，亲本蛋白可为天然存在的多肽的变体，所述多肽的氨基酸序列已经被修饰或改变。因此，亲本α-淀粉酶可具有一个或多个(或一个或若干个)氨基酸取代、插入、和/或缺失。因此，亲本α-淀粉酶可为亲本α-淀粉酶的变体。亲本也可为等位变体，它是由占据相同染色体座位的基因的两个或更多个供选择的替代形式中的任何一本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种清洁组合物，包含：(a)亲本α‑淀粉酶的变体，其中所述变体包含缺失D183*和G184*以及一组突变N195F+V206Y+Y243F，使用根据SEQ ID NO:6的编号；其中所述亲本α‑淀粉酶由SEQ ID NO:6表示，(b)清洁助剂，其量为0.01至99.9重量％；以及(c)至少一种螯合剂，其中当在21℃和pH 8.0下测量时，所述螯合剂在低于10mM的浓度下能够将游离钙离子的浓度从2.0mM降低至0.10Mm。
【技术特征摘要】
2010.02.10 EP 10153223.21.一种清洁组合物，包含：(a)亲本α-淀粉酶的变体，其中所述变体包含缺失D183*和G184*以及一组突变N195F+V206Y+Y243F，使用根据SEQIDNO:6的编号；其中所述亲本α-淀粉酶由SEQIDNO:6表示，(b)清洁助剂，其量为0.01至99.9重量％；以及(c)至少一种螯合剂，其中当在21℃和pH8.0下测量时，所述螯合剂在低于10mM的浓度下能够将游离钙离子的浓度从2.0mM降低至0.10Mm。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：米歇尔·米克，菲利普·弗兰克·苏特，林塞·苏珊·比伊克，艾伦·斯文森，安妮特·赫勒·约翰森，马斯·埃斯克隆·比约恩沃德，弗兰克·温特·拉斯穆森，迈克尔·绍尔特，埃斯基尔森·西格纳·拉森，延斯·厄布罗，斯文·卡斯加德，拉尔斯·贝耶尔，
申请(专利权)人：宝洁公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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