一种高存活率的Vero细胞的冻存方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种高存活率的Vero细胞的冻存方法
本专利技术属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种高存活率的Vero细胞的冻存方法。
技术介绍
Vero细胞是日本学者1962年从非洲绿猴(cercopithecusaethiopsmonkey)肾建立的猴肾细胞系。其名称的由来是取自世界语中“绿”字的VERDE前两个字母和“肾”字前两个字母合在一起，但世界语中不允许VERE存在，而需以“O”结尾，故命名为“Vero”。其第93代被带到美国NIH的过敏与传染病研究所热带病毒研究室，第113代被提交给ATCC，编号为ATCCNO.CCL-81。除了常规的科研需要之外，经过全面的研究鉴定，Vero细胞具有胞核学稳定，没有外源因子污染和致瘤性的优点，完全符合1987年WHO关于用于生物制品的传代细胞的规程要求，并已被WHO批准可用作疫苗生产的基质。于是，Vero细胞小儿麻痹灭活疫苗、小儿麻痹活疫苗、Vero细胞狂犬病疫苗相继在法国被研制出来并获批准生产。因此，Vero细胞的应用前景以及需求量极大。随着研究过程中越来越多的运用组织细胞培养增殖技术，将Vero细胞采用低温度进行长期保存数年...
【技术保护点】
一种高存活率的Vero细胞的冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：用移液枪将培养基吸尽，加入3‑5ml PBS洗涤Vero细胞2‑3次，向细胞培养皿中加入1‑2ml 0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化3‑5min，加入2‑3ml的新鲜的Vero细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底部40‑50次；将液体移至细胞离心管中，在1000‑1500g/min条件下离心3‑10min，用移液枪去除上清液，加入Vero细胞专用冻存液，使用移液枪上下吹打Vero细胞40‑50次，加入到细胞冻存管中，拧紧冻存管盖，用封口膜封住冻存管；在2‑7℃保存10‑30min，再于‑15 ‑ ...
【技术特征摘要】
1.一种高存活率的Vero细胞的冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：用移液枪将培养基吸尽，加入3-5mlPBS洗涤Vero细胞2-3次，向细胞培养皿中加入1-2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化3-5min，加入2-3ml的新鲜的Vero细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底部40-50次；将液体移至细胞离心管中，在1000-1500g/min条件下离心3-10min，用移液枪去除上清液，加入Vero细胞专用冻存液，使用移液枪上下吹打Vero细胞40-50次，加入到细胞冻存管中，拧紧冻存管盖，用封口膜封住冻存管；在2-7℃保存10-30min，再于-15--20℃保存40-60min，然后移入到≤-80℃环境进行细胞冻存；其中所述Vero细胞专用冻存液以重量组分计，包括以下组分：以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟乙基淀粉3-8份、葡萄糖5-15份、维生素E1-5份、20%甘露醇2-10份、丙二醇1-2份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.8-2份和基础培养基80-90份。2.根据权利要求1所述的高存活率的Vero细胞的冻存方法，其特征在于：冻存的Vero细胞在≤-80℃环境过夜冻存后，第二天放入液氮罐中在液氮浸没于液氮中进行细胞冻存。3.根据权利要求1所述的高存活率的Vero细胞的冻存方法，其特征在于：每支冻存管中Vero细胞冻存密度为105-106个细胞。4.根据权利要求1所述的高存活率的Vero细胞的冻存方法，其特征在于：所述胰蛋白酶中还包含0.5%的EDTA。5.根据权利要求1所述的高存活率的Vero细胞的冻存方法，其特征在于：所述Vero细胞专用培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。6.根据权利要求1或5所述的高存活率的Vero细胞的冻存方法，其特征在于：所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖82-88份...
【专利技术属性】
技术研发人员：马荣华，
申请(专利权)人：苏州北开生化设备有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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