用于扩增cfDNA样品中多个目标的NGS建库引物池及应用制造技术
NGS library primer pool for amplification of multiple targets in cfDNA samples and its application
The invention discloses a method for NGS database and application pool primers to amplify multiple target cfDNA in the sample pool by primer primer primer and specific primer segments, universal primers and specific primers in the connection between the 5 'end, at least one primer primer and specific primer segment connection adjust the primer Tm (N) k sequence, the difference between the primer Tm value does not exceed 10 degrees. The primers in the primer pool of the invention have the close Tm, the non-specific amplification is relatively low, and it is easy to be further amplified, so that the coverage area of the target area can be conveniently detected. The method of the invention can simultaneously carry out thousands of heavy PCR in the same system, breaking the limitation that the conventional multiplex PCR is generally no more than 100 heavy.
【技术实现步骤摘要】
用于扩增cfDNA样品中多个目标的NGS建库引物池及应用
本专利技术涉及一组用于多重PCR的引物池及其应用，特别涉及用于扩增样品中cfDNA多个目标的NGS建库引物池及其应用。
技术介绍
WGS全基因组测序可获得整个基因组的突变、插入、缺失以及拷贝数目等结构变异。然而，由于全基因组数据量巨大，以30X进行测序为例，人类全基因组就会产生超过9OG的测序数据量。而肿瘤等相关的低突变频率，以及插入、缺失、拷贝数等测序，则需要至少5000X层次以上的覆盖度，全基因组测序会产生15T以上的测序数据量。特别是体液标本中肿瘤相关的游离DNA，或者孕妇外周血中源自胎儿的游离DNA含量极低，全基因组的测序量将超过200T。这样大规模的测序数据，显著增加测序的成本，对数据的分析工作造成极大的困难，进而制约测序的应用。因此，在不做任何信号扩增就进行NGS高通量测序，得到的绝大多数信息是正常细胞基因组的信息。在这么强大的背景噪音下，检测的特异性和敏感性就都成问题。不但如此，因为花费大量的人力和财力来做测序得到的99.99％都是无用的信息，相当于高通量地产生垃圾。为解决这个难题，针对高通量...
【技术保护点】
用于扩增cfDNA样品中多个目标的引物池，引物池中的引物由通用引物段和特异性引物段组成，通用引物段连接在特异性引物的5’端，至少一条引物的通用引物段和特异性引物段之间连接有调整引物Tm的
【技术特征摘要】
1.用于扩增cfDNA样品中多个目标的引物池，引物池中的引物由通用引物段和特异性引物段组成，通用引物段连接在特异性引物的5’端，至少一条引物的通用引物段和特异性引物段之间连接有调整引物Tm的(N)k序列，各引物的Tm值之间的差值不超过10℃。2.根据权利要求1所述的引物池，其特征在于：引物池中引物的结构通式为：CAPl：通用引物+(N)k+特异性引物，k为1～15之间的整数；CAP2：通用引物+特异性引物。3.根据权利要求1或2所述的引物池，其特征在于：通用引物段的序列与目的基因不同源。4.根据权利要求1或2所述的引物池，其特征在于：引物池中的引物的通用引物段为：GSPL：CTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGA...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈梦麟，黄凯铃，骆颖筠，
申请(专利权)人：广州万德基因医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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