一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程和生物酶技术领域，旨在提供一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用。该蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明专利技术进一步提供了该蛋白酶的制备方法，以及在制备用于抑制机体衰老和细胞凋亡的药物或保健食品中的应用。本发明专利技术的蛋白酶是一种重要的氧化还原平衡调节蛋白酶，在生物体氧化胁迫与损伤修复过程中发挥重要的作用，因此在抗衰老领域具有潜在的应用价值。可通过对ASK1和NF‑κB等因子的结合与调控，抑制机体的衰老和细胞凋亡，使细胞能够进行损伤修复并增殖，延缓细胞的衰老与凋亡，因此它也是肿瘤与癌症治疗的重要靶点之一。本发明专利技术蛋白酶的物理特征特征为可溶性形式，且保留天然活性，因而具备广泛应用场景。

Preparation and application of a microbial derived antioxidant protease

The invention relates to the field of gene engineering and biological enzyme technology, in order to provide the preparation and application of a microbial derived antioxidant protease. The protease amino acid sequence of SEQ ID NO.1 shows, the invention further provides a preparation method of the protease, and the manufacture of a medicament for inhibiting senescence and apoptosis or health food for the. The invention of the protease is an important redox balance regulation of protease, play an important role in biological oxidative stress and damage repair process, so it has potential application value in the field of anti-aging. By combining with the regulation of ASK1 and NF factor kappa B, inhibition of aging and apoptosis, the cell can repair and proliferation, senescence and apoptosis of cells, so it is also an important target for the treatment of tumors and cancer. The physical characteristics of the protease in this invention are soluble and retain natural activity, so it has a wide range of applications.

【技术实现步骤摘要】
一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用
本专利技术属于基因工程和生物酶
，具体涉及一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用。
技术介绍
微生物源抗氧化蛋白酶是一类广泛存在于自然界微生物体内的一种蛋白质。该蛋白质具有酶学活性，具有维持生物体内氧化还原平衡、调控生物信号传导、DNA及蛋白质损伤修复等多种功能。由于其来源丰富，容易提纯，分子量小，功能简单等特点，使得该蛋白酶在酶学研究中较早发展起来，同时也具有广泛的药物制备的参考及应用价值。目前，在研究抗氧化酶的过程中，微生物源抗氧化蛋白酶具有强大的抗氧化作用，具有维持细胞内的氧化还原稳态、抗衰老以及肠道保护生物学效应等作用。现有的抗氧化蛋白酶多数从植物中提取，产量少。因此，研发人员把研究目标集中在微生物菌种的筛选上，希望获得微生物源的抗氧化蛋白酶。但是微生物种类繁多，到底哪种抗氧化蛋白酶更好，不得而知，而且需要进行大量实验进行证实。本专利技术中的微生物源抗氧化蛋白酶制备技术采用基因工程表达进行实现，克服了植物源抗氧化蛋白酶含量少的缺点，可以批量发酵；同时本专利技术中的抗氧化蛋白酶为可溶性表达形式避免了其他微生物源蛋白酶为包涵体的缺点。本专本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物源抗氧化蛋白酶，其特征在于，该蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种微生物源抗氧化蛋白酶，其特征在于，该蛋白酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述微生物源抗氧化蛋白酶在制备用于抑制机体衰老和细胞凋亡的药物或化妆品中的应用。3.权利要求1所述蛋白酶的制备方法，其特征在于，是以单核细胞增多性李斯特菌野生株的基因组DNA为模版进行PCR扩增反应，获得含有抗氧化蛋白酶目的基因且该基因含有酶切位点的目的片段；将目的基因与载体以限制性内切酶NdeI和XhoI进行双酶切，然后将目的基因连接入表达载体pET30a(+)；连接产物转化到感受态细胞E.coliDH5a感受态细胞中，在Kana/LB固态琼脂培养基上进行培养；将阳性克隆重组菌质粒入感受态细胞E.coliRosetta中，取单克隆菌落进行扩大培养，经超声破碎、咪唑洗脱和镍离子树脂柱亲和层析，分离纯化得到重组蛋白，即所述微生物源抗氧化蛋白酶。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其具体步骤包括：(1)采用特异性引物对李斯特菌野生株的基因组DNA进行扩增，扩增同时在引物上设计NdeI和XhoI的酶切位点，所述引物的序列序列分别为：上游引物：5’-TTTCATATGGTAAAAGAAATTACAGATGCAACATTTG-3’；下游引物：5’-CCGCTCGAGAACGTATTTGTTGATGACTTCATCCAGTTC-3’；所用PCR扩增体系为：KOD-plus-Neo1μL，10×PCRBufferforKOD-plus-Neo5μL，MgSO43μL，dNTPs5μL，上游引物1μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋厚辉，程昌勇，叶美伶，赵碧波，邱旸，汪渤森，王晓杜，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33