CD4阳性TH17T细胞培养方法技术

本发明专利技术提供一种TH17T细胞的培养方法，旨在通过TH17T细胞代替临床现有的CD8T细胞，TH17T细胞相比CD8T细胞而言，在不进行二次刺激的情况下，在体外能够活跃的增值长达21天，产生5000倍数量的T细胞以供使用。从而确保了数量充足。另外，TH17细胞的干细胞特性使其能够具有较强的抗衰老特性，在体外经历两周的增值之后还保留较强的清楚体内肿瘤的能力，极大地提高了临床效果。

Culture method of CD4 positive TH17T cells

The present invention provides method for culturing TH17T cells, to replace the existing clinical CD8T cells by TH17T cells, TH17T cells compared to CD8T cells, in two stimulated, can active value-added for up to 21 days in vitro, 5000 times the number of T cells for use. Thus ensuring adequate quantity. In addition, the characteristics of stem cells of TH17 cells make it able to have strong anti-aging properties. After two weeks of added value in vitro, it retains strong ability to clear tumors in vivo, which greatly improves the clinical effect.

【技术实现步骤摘要】
CD4阳性TH17T细胞培养方法
本专利技术应用于细胞及细胞治疗领域，具体涉及一种细胞的培养方法，尤其涉及一种CD4阳性TH17T细胞培养方法。
技术介绍
免疫治疗为肿瘤治疗提供了一种有吸引力的疗法，其优势是在增强或重建患者的抗肿瘤免疫的同时副作用较小。目前已有两种主要策略被用于刺激抗肿瘤免疫。包括肿瘤治疗性疫苗和过继性细胞治疗（adoptivecelltherapyACT）.其中过继性细胞治疗主要是指向荷瘤宿主体内回输自体或异体免疫细胞，如以肿瘤反应性T细胞为主要成分的CTL（cytotoxicTlymphocyte）细胞,肿瘤浸润性淋巴细胞（tumor-infiltratinglymphocyte,TIL）等。肿瘤反应性CTL细胞回输已被成功应用于黑色素瘤，EB病毒诱导淋巴瘤等肿瘤的临床治疗。现有技术的ACT通常采用CD8T细胞来作为靶细胞转入ACT。然而目前将过继性细胞治疗广泛应用于大多数非病毒相关实体瘤中还存在不少问题亟待解决，包括：1）如何获得充分数量的肿瘤反应性T细胞是决定过继性细胞治疗效果的最关键因素。2）目前回输的免疫细胞尤其是克隆化CD8T细胞在体外培养的过程中会不本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T细胞培养方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：分离、纯化：提供外周血，并从外周血中分离并纯化得到CD4+T细胞；刺激、生成：采用CD3、CD28或ICOS中的任意一种或多种包被的磁珠刺激所述CD4+T细胞产生TH17T细胞；扩增、培养：将TH17T细胞接种到培养基中，加入细胞因子刺激扩增TH17T细胞扩增，并持续添加TGF‑β，所述细胞因子采用rhIL‑1β，rhIL‑6，rhIL23，anti‑hIL‑4，anti‑hIFN‑γ中的任意一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种T细胞培养方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：分离、纯化：提供外周血，并从外周血中分离并纯化得到CD4+T细胞；刺激、生成：采用CD3、CD28或ICOS中的任意一种或多种包被的磁珠刺激所述CD4+T细胞产生TH17T细胞；扩增、培养：将TH17T细胞接种到培养基中，加入细胞因子刺激扩增TH17T细胞扩增，并持续添加TGF-β，所述细胞因子采用rhIL-1β，rhIL-6，rhIL23，anti-hIL-4，anti-hIFN-γ中的任意一种或多种。2.根据权利要求1所述的T细胞培养方法，其特征在于，所述T细胞的分离、纯化过程包括：从外周血中分离得到单个核细胞，将细胞重悬在PBS中，并调整细胞浓度；取一定量细胞至聚苯乙烯中，加入正常的人血白蛋白；加入分离试剂混匀后室温孵育；通过PBS调节总体积，通过反复吹打混匀提取溶液并重复多次进行提纯；离心收集上清液得到CD4+T细胞。3.根据权利要求2所述的T细胞培养方法，其特征在于，加入分离试剂后孵育的过程包括：加入EasySepTMHumanCD4+TCellIsolationCoktail50µl/ml细胞混匀后室温孵育10分钟；震荡混匀EasySepTMStreptavidinRapidSpheresTM5000175µl/ml细胞混匀后室温孵育2.5分钟。4.根据权利要求2所述的T细...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗超，曾明哲，高守泉，
申请(专利权)人：湖南未名三胞转化医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43