一种鉴别大黄鱼遗传性别的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴别大黄鱼遗传性别的分子标记及其应用。所述分子标记表现为SEEID NO:1所示核苷酸序列的插入/缺失长度多态性。该分子标记与大黄鱼的性别紧密相关，能够用于大黄鱼的辅助育种。

Molecular marker for identifying genetic sex of large yellow croaker and its application

The invention discloses a molecular marker for identifying genetic diversity of large yellow croaker and its application. The molecular marker for SEEID NO:1 nucleotide sequence represented by the insertion / deletion polymorphism. The molecular marker is closely related to the sex of large yellow croaker and can be used for assisted breeding of large yellow croaker.

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别大黄鱼遗传性别的分子标记及其应用
本专利技术涉及水产生物
中的鱼类遗传性别鉴定和性别控制技术，具体涉及一种鉴别大黄鱼遗传性别的分子标记及其应用。
技术介绍
在生命科学研究领域，性别研究一直是一个热点命题，吸引着众多研究者的关注。鱼类在动物进化中处于承前启后的地位，且物种数量丰富。同大多数脊椎动物类似，不少鱼类也是雌雄异体，具有性别二态性，即在形态和生理上表现出显著的雌雄两性差异。而且，一些鱼类物种的个体生长等重要经济性状及经济价值与性别密切相关。因此，开发这些鱼类的单性育种与养殖技术在鱼类养殖产业上具有重大的意义。许多鱼类尽管在生长上存在性别二态性，但在外部形态上雌雄鱼却没有显著差异，尤其是在性腺尚未发育成熟时，其性别往往难以从外部形态上区分；甚至有一些鱼类存在天然的性反转现象，在不同的环境或者通过人工诱导可以改变其生理性别，但性别改变前后没有形态上的差异，无法通过外部形态识别其遗传性别。这些问题的存在给单性育种、养殖及相关的遗传学基础研究带来很大的困扰，尤其是性别决定分子机制研究。因此，针对这些鱼类物种开发可以准确鉴定其遗传性别的分子标记，不仅对这些鱼类遗传学相关的研究，而且对开展单性育种与养殖从而提高鱼产量、增加水产养殖收益都有着非常重要的意义。大黄鱼(Larimichthyscrocea)隶属脊索动物门、脊椎动物亚门、硬骨鱼纲、鲈形目、石首鱼科、黄鱼属，分布于东亚沿海，兼具食用和药用价值。大黄鱼具有显著的雌雄生长二态性，同时期的大黄鱼雌鱼生长速度显著快于雄鱼，且达到成熟时的雌鱼个体较雄鱼个体大，开发大黄鱼单性育种及单性养殖技术具有重要的产业意义。但在性腺发育成熟之前，很难从外部形态上加以区分雌鱼和雄鱼，胚胎和幼体阶段雌雄鱼形态上几乎没有区别；据已有的研究表明，大黄鱼不存在异形性染色体，也无法从细胞学角度鉴定其遗传性别；这给其单性育种技术的开发带来了很大困难。因此，开发一种可以准确鉴别其遗传性别的分子标记用于大黄鱼性别控制育种具有极大的生产应用价值。随着分子生物学技术的发展，目前已有多种类型的DNA分子标记技术，其中主要包括：(1)限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP)；(2)随机扩增多态性DNA(RandomAmplificationPolymorphismDNA，RAPD)；(3)扩增片段长度多态性(AmplifiedFragmentLengthpolymorphism，AFLP)；(4)微卫星标记(microsatellite)，又称为短串联重复序列(ShortTandemRepeats，STRs)或简单重复序列(SimpleSequenceRepeat，SSR)；(5)单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphism，SNP)。利用上述DNA分子标记技术，已经有许多物种的性别特异的分子标记被开发出来，但不同物种其基因组DNA序列结构不同，没有一个物种的性别特异分子标记可以被用于对其他物种的遗传性别进行鉴定，只能针对不同物种分别进行开发。可以识别与鉴定(鉴别)大黄鱼遗传性别的分子标记迄今为止国内外都还没有见到报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鉴别大黄鱼遗传性别的分子标记。为实现上述目的，本专利技术提供一种大黄鱼遗传性别相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记表现为SEEIDNO:1所示核苷酸序列的插入/缺失长度多态性。进一步，具有SEEIDNO:1所示核苷酸序列的个体，表现为雌性大黄鱼；缺失SEQIDNO:1所示核苷酸序列的个体，表现为雄性大黄鱼。进一步，所述引物对具有SEQIDNO:2-3或SEQIDNO:4-5所示的核苷酸序列。进一步，利用所述引物对SEQIDNO:2-3对待检测大黄鱼基因组DNA进行PCR扩增，并检测扩增片段的长度，当所述扩增片段为112bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的插入，表现为雄性大黄鱼；当没有出现所述扩增片段时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的缺失，表现为雌性大黄鱼；或利用所述引物对SEQIDNO:4-5对待检测大黄鱼基因组DNA进行PCR扩增，并检测扩增片段的长度，当所述扩增片段有两条，分别为229bp和214bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的插入，表现为雄性大黄鱼；当所述扩增片段为214bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的缺失，表现为雌性大黄鱼。本专利技术还提供一种用于检测所述分子标记的试剂盒，其特征在于，包括所述的引物对。所述分子标记，所述引物对，或所述试剂盒，在大黄鱼育种中的用途。本专利技术还提供一种鉴别大黄鱼性别的方法，其特征在于，对待测大黄鱼进行所述分子标记的检测，以便确定所述待测大黄鱼的性别。进一步，所述方法包括：利用所述引物对，所述试剂盒，对待测大黄鱼基因组DNA进行PCR扩增；检测扩增片段的长度，以及基于所述扩展片段的长度，确定所述待测大黄鱼的性别，其中，当所述扩增片段为112bp，或者229bp和214bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的插入，表现为雄性大黄鱼；当没有出现所述扩增片段或扩增片段为214bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的缺失，表现为雌性大黄鱼。进一步，利用凝胶电泳,优选琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测所述扩增片段的长度。本专利技术还提供一种大黄鱼辅助育种方法，其特征在于，所述方法包括：通过所述方法，检测所述分子标记，以便确定待测大黄鱼的性别。本专利技术的申请人比较了一处大黄鱼雌雄鱼基因组差异的序列(见图1)，经过分析发现:SEQIDNO:1为与大黄鱼性别相关的分子标记。所述分子标记核苷酸序列为：5'aatgagtttcactca3'(15bp)SEQIDNO:1本专利技术所述引物对序列如下所示：a.LYC-MS引物LYC-MS-F:5'GGCTCTGTGAGGCGTCTT3'SEQIDNO:2LYC-MS-R:5'CTTACAGTTATCTGCAATTTGTATG3'SEQIDNO:3b.LYC-MFS引物LYC-MFS-F:5'TGGCTCTGTGAGGCGTCT3'SEQIDNO:4LYC-MFS-R:5'ATACAATGATGACATCAATCCTGAT3'SEQIDNO:5采用本专利技术的分子标记进行黄鱼遗传性别的鉴别，与现有的鉴别大黄鱼遗传性别的方法相比，具有明显的优势：只需剪取大黄鱼的部分组织或提取部分血液用来提取基因组DNA，进而从最小程度上减少对鱼体的伤害。然后用所提供的引物做PCR，结合电泳检测，即可快速、准确地鉴定不同生长阶段的大黄鱼不同个体的遗传性别。本专利技术具有如下优点：1、本专利技术提供的大黄鱼遗传性别相关的分子标记不受大黄鱼生长阶段的限制，可用于大黄鱼的早期选育，节省时间，同时可显著促进大黄鱼的育种进程。2、检测大黄鱼如SEQIDNO:1所示的大黄鱼性别相关的分子标记的方法准确可靠，操作方便，成本低廉。3、大黄鱼如SEQIDNO:1所示的大黄鱼性别相关的分子标记的检出，为大黄鱼性别的辅助选择提供了科学依据。附图说明图1为本专利技术公开的部分大黄鱼雌雄鱼全基因组重测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大黄鱼遗传性别相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记表现为SEE ID NO:1所示核苷酸序列的插入/缺失长度多态性。

【技术特征摘要】
1.一种大黄鱼遗传性别相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记表现为SEEIDNO:1所示核苷酸序列的插入/缺失长度多态性。2.权利要求1所述分子标记，其特征在于，具有SEEIDNO:1所示核苷酸序列的个体，表现为雌性大黄鱼；缺失SEQIDNO:1所示核苷酸序列的个体，表现为雄性大黄鱼。3.一种用于检测权利要求1或2所述分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对具有SEQIDNO:2-3或SEQIDNO:4-5所示的核苷酸序列。4.权利要求3所述引物对，其特征在于，利用所述引物对SEQIDNO:2-3对待检测大黄鱼基因组DNA进行PCR扩增，并检测扩增片段的长度，当所述扩增片段为112bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的插入，表现为雄性大黄鱼；当没有出现所述扩增片段时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的缺失，表现为雌性大黄鱼；或利用所述引物对SEQIDNO:4-5对待检测大黄鱼基因组DNA进行PCR扩增，并检测扩增片段的长度，当所述扩增片段有两条，分别为229bp和214bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的插入，表现为雄性大黄鱼；当所述扩增片段为214bp时，所述待测大黄鱼具有SEQIDNO:1所示核苷酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：王志勇，林爱强，肖世俊，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35