一种动物细胞融合基础培养基的使用方法技术

本发明专利技术公开了一种动物细胞融合基础培养基的使用方法，包括以下步骤：包括以下步骤：(A)准备小鼠骨髓瘤细胞、免疫小白鼠脾细胞、基础培养基、灭菌后4℃保存的聚乙二醇4000、饲养细胞四板，每个板上有96个孔，每孔的体积为100μl；(B)用基础培养基吹洗小鼠骨髓瘤细胞后，将小鼠骨髓瘤细胞加入至50ml离心管中，并同时加入复苏的免疫小白鼠脾细胞，混匀后离心；(C)离心完成后除去离心管中的上清液，将细胞沉淀轻轻混匀后，沿着管壁在60秒内加入缓慢加入800μl的PEG4000，加完后静置90秒；(D)加入50ml培养基后离心；(E)离心完成后除去上清液，加入基础培养基混匀后，用加样枪将其转入板中；(F)放入5％CO2的孵箱培养七天后，全换液。

Method for using basal culture medium for animal cell fusion

Using the method of the invention discloses an animal cell fusion medium, which comprises the following steps: including the following steps: (A) to prepare mouse myeloma cells and spleen cells of mice, immune based medium, save 4 C sterilized polyethylene glycol 4000, feeding plate four cells, with 96 holes in each plate each, pore volume is 100 L; (B) with basal medium purge mouse myeloma cells, mouse bone marrow tumor cells into 50ml centrifuge tube, and add the immunized mouse spleen cell recovery, mixing after centrifugation; (C) the removal of the centrifugal supernatant centrifugal tube end when the cell pellet gently after mixing, along the wall in 60 seconds with slow addition of 800 l PEG4000, and after standing for 90 seconds; (D) 50ml medium after centrifugation; (E) centrifugal supernatant after complete removal, with basal medium mixing After that, the sample gun was used to transfer it into the plate; (F) the incubator was incubated in 5%CO2 for seven days and the whole solution was changed.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种动物细胞融合基础培养基的使用方法。
技术介绍
细胞培养技术始于20世纪初，是指从体内组织取出细胞，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。经过几十年的发展，细胞培养技术现广泛应用于生物、医疗技术、药品等领域，形成了庞大的产业。同时，为了满足市场的不同需求，通过细胞培养技术获得的产品种类也更加多元化。细胞融合是细胞培养技术的一种应用，其在自发或人工诱导下，将两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。目前，细胞融合技术多用于获取杂交瘤，并用于单克隆抗体的科研和生产。培养基是维持体外细胞生存和生长的溶液，分为天然培养基和合成培养基。其中，合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法合成的。目前，关于细胞融合培养基进行了很多改造和研究，但通常都忽略了细胞培养基组分的改造所带来的影响，使得细胞融合效率通常偏低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种动物细胞融合基础培养基的使用方法，以解决现有技术中细胞融合培养基的细胞融合效率低的问题，从而通过提高细胞融合效率，达到高效获取杂交瘤的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动物细胞融合基础培养基的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(A)准备小鼠骨髓瘤细胞、免疫小白鼠脾细胞、基础培养基、灭菌后4℃保存的聚乙二醇4000、饲养细胞四板，每个板上有96个孔，每孔的体积为100μl；(B)用基础培养基吹洗小鼠骨髓瘤细胞后，将小鼠骨髓瘤细胞加入至50ml离心管中，并同时加入复苏的免疫小白鼠脾细胞，混匀后离心；(C)离心完成后除去离心管中的上清液，将细胞沉淀轻轻混匀后，沿着管壁在60秒内加入缓慢加入800μl的PEG4000，加完后静置90秒；(D)加入50ml培养基后离心；(E)离心完成后除去上清液，加入基础培养基混匀后，用加样枪将其转入板中；(F)放入5％CO2的...

【技术特征摘要】
1.一种动物细胞融合基础培养基的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(A)准备小鼠骨髓瘤细胞、免疫小白鼠脾细胞、基础培养基、灭菌后4℃保存的聚乙二醇4000、饲养细胞四板，每个板上有96个孔，每孔的体积为100μl；(B)用基础培养基吹洗小鼠骨髓瘤细胞后，将小鼠骨髓瘤细胞加入至50ml离心管中，并同时加入复苏的免疫小白鼠脾细胞，混匀后离心；(C)离心完成后除去离心管中的上清液，将细胞沉淀轻轻混匀后，沿着管壁在60秒内加入缓慢加入800μl的PEG4000，加完后静置90秒；(D)加入50ml培养基后离心；(E)离心完成后除去上清液，加入基础培养基混匀后，用加样枪将其转入板中；(F)放入5％CO2的孵箱培养七天后，全换液；上述步骤中，基础培养基的组分包括：丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸二钠、缬氨酸、氯化钙、硫酸镁、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、生物素、氯化胆碱、肌醇、尼克酰胺、D-泛酸、吡哆醛、硫胺素、核黄素、抗坏血酸、维生素B-12、对氨基苯甲酸、叶酸、D-葡萄糖、酚红、丙酮酸钠、胸苷、还原型谷胱甘肽、碳酸氢钠、氢氧化钠、氯化钠、4-羟乙基哌嗪乙磺酸。2.根据权利要求1中所述的一种动物细胞融合基础培养基的使用方法，其特征在于，所述各组分的含量为：丙氨酸10-50mg/l，精氨酸100-300mg/l，天冬氨酸10-50mg/l，天冬酰氨10-50mg/l，胱氨酸10-50mg/l，谷氨酰胺100-500mg/l，谷氨酸10-50mg/l，甘氨酸10-50mg/l，组氨酸10-50mg/l，羟脯氨酸10-50mg/l，异亮氨酸10-50mg/l，亮氨酸10-50mg/l，赖氨酸10-50mg/l，蛋氨酸10-50mg/l，苯丙氨酸10-50mg/l，脯氨酸10-50mg/l，丝氨酸10-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘才明，
申请(专利权)人：成都源泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51