一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法及其应用与试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法及其应用与试剂盒，其涉及生物技术领域。本发明专利技术用于确定在接受器官移植的病人体内是否产生了导致慢性器官排斥的抗体，试剂盒用于检测具有致病性的特异性抗供者抗体。本发明专利技术是将器官受者的血清加入与供者组织相容抗原相同的血管内皮细胞培养物内，在摄氏温度35℃‑37℃下培育后测定血管内皮细胞的反应。试验结果揭示了器官移植受者与供者之间高度特异且精准的相互作用，为早期发现器官排异反应并制定早期治疗方案提供了病理学依据。不需活检材料，为临床医师提供了一种定期监视接受器官移植病人的有力、有效且十分经济的手段。

【技术实现步骤摘要】
一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法及其应用与试剂盒
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法及其应用与试剂盒，用于确定在接受器官移植的病人体内是否产生了导致慢性器官排斥的抗体。
技术介绍
外科移植是目前根治器官衰竭最有效的途径，它不但需要严格广泛的医疗护理，还要求器官供者和受者之间的人类组织相容抗原相同以避免受者的免疫系统攻击外来的组织。如果二者的人类组织相容抗原类型不同，受者体内天然存在或诱导合成的抗体将攻击移植的器官组织。然而，在临床实践中，器官供者和资源十分限制，供者和受者之间的抗原相同程度变异相当巨大。据报道，8－25％的接受器官移植的病人都会产生针对供者特异的抗体即DSA,其中50％的病人在五年内将出现抗体介导的排斥反应并最终导致器官移植失败。然而，不是所有的DSA都能介导排斥反应。虽然DSA的某些特性包括亚型、滴度、特异性、结合力及克隆性与致病性有密切关系，但是目前尚无试验手段直接观察DSA与供者血管细胞的相互作用。这是鉴定DSA的致病性的关键步骤；DSA与供者细胞的相互作用才是决定器官在受者体内生存时间的决定性因素。迄今为止，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法，其特征在于：(1)依据病人血样中要鉴定DSA的分型，在细胞库内选择表达与DSA类型相对应抗原的血管内皮细胞；(2)将所述血管内皮细胞种植在96‑孔细胞培养微孔板的底部，每孔含3000‑4000活细胞，所述种植活细胞的微孔板定义为再构细胞板；(3)向测试的每孔内加入病人血清，在一定条件下孵育一段时间；(4)收集再构细胞板孔内的上清液，测定血管内皮细胞与血清反应后释放的生物活性细胞因子；(5)用体积比4％聚甲醛固定种植在再构细胞板的底部血管内皮细胞，采用免疫荧光组化的方法分析细胞表面粘附分子；(6)准备试剂盒；(7)参考试剂盒内提供的阳性与阴性对照血清数值...

【技术特征摘要】
1.一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法，其特征在于：(1)依据病人血样中要鉴定DSA的分型，在细胞库内选择表达与DSA类型相对应抗原的血管内皮细胞；(2)将所述血管内皮细胞种植在96-孔细胞培养微孔板的底部，每孔含3000-4000活细胞，所述种植活细胞的微孔板定义为再构细胞板；(3)向测试的每孔内加入病人血清，在一定条件下孵育一段时间；(4)收集再构细胞板孔内的上清液，测定血管内皮细胞与血清反应后释放的生物活性细胞因子；(5)用体积比4％聚甲醛固定种植在再构细胞板的底部血管内皮细胞，采用免疫荧光组化的方法分析细胞表面粘附分子；(6)准备试剂盒；(7)参考试剂盒内提供的阳性与阴性对照血清数值，用于确定病人血清与血管内皮细胞的反应幅度。2.根据权利要求1所述的一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法，其特征在于：使用了与供者的人类组织相容抗原表达相同的血管内皮细胞培养物，血管内皮细胞培养物与病人血清的相互作用是特异的。3.根据权利要求1所述的一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法，其特征在于：所述再构细胞板为高度选择性血管内皮细胞；当医师申请使用此诊断试剂的同时，应提交已植入病人体内供者器官的人类白细胞组织相容抗原的分型即HLA－A，HLA－B，HLA－C，HLA－DR，HLA－DQ，HLA－DP；依据此抗原分型谱在细胞库内提取、复苏、种植表达这些抗原的细胞于96-孔细胞培养微孔板的底部；所述细胞诊断试剂盒内的血管内皮细胞板的设计是依据供者的人类白细胞组织相容抗原的类型而为受者制定的，因而有高度的选择性。4.根据权利要求1所述的一种功能性地检测抗体介导的器官排异的方法，其特征在于：血管内皮细胞表达的人类组织相容抗原与接受器官移植的病人DSA抗体相对应。5.根据权利要求1所述的一种功能性地检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：石强，
申请(专利权)人：石强，
类型：发明
国别省市：美国,US