用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱制造技术

本发明专利技术的课题在于，提供一种使用聚凝胺作为红细胞凝集剂、使用胶体金缀合物作为检测试剂时，将全血中的红细胞凝集并分离除去并且不引起胶体金的凝集的免疫色谱用测试条；以及利用免疫色谱的检测方法。本发明专利技术人们为了解决上述课题，并非进行聚阴离子的种类、量的选定，而是从完全不同的观点出发，审视了此前的试剂构成本身并对各要素进行了深入研究，结果惊奇地发现，通过使用特定的添加剂，在不基于聚阴离子进行中和的情况下也能够抑制胶体金的凝集。

Immunochromatographic test strip for detecting objects in a sample containing red blood cells and immune chromatography using the test strip

The invention provides a Polybrene as red cell agglutination agent, using colloidal gold conjugates as detection reagent, the agglutination of red blood cells in whole blood and removing and not cause agglutination of colloidal gold immunochromatographic test strip; and the use of immune chromatography detection method. The present invention in order to solve the above problem, not for selected species, amount of polyanions, but starting from a different point of view, look at the previous Constitution itself and all elements of the reagents were studied, the results surprised by the use of specific additives, which is not based on colloidal gold can be suppressed polyanion neutralization condition agglutination.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱
本专利技术涉及用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱。更详细而言，涉及：为了即使在以聚阳离子为有效成分的红细胞凝集剂共存在测定体系中时也不会因该红细胞凝集剂的存在导致作为检测试剂的胶体金缀合物发生非特异性凝集而用特定添加剂进行了处理的测试条；以及使用该测试条的免疫色谱。
技术介绍
近年，在诊所或小规模医院中，“想在患者诊察期间获知检查结果”的需求在增加，正在由以前的委托院外进行检查向即时检查(PointofCareTesting，POCT)转变。随着POCT的普及，已在使用收纳有侧流式免疫色谱用测试条的设备作为体外诊断药。就免疫色谱用测试条而言，不需要在检查时制备试剂，仅通过将血液或尿等被检试样(以下有时称为“样品”)直接滴加到该测试条上等简单操作即能够对样品中的对象物进行检测，对于简便且迅速地分析检测对象物而言是非常有用的。免疫色谱用测试条(以下有时称为“测试条”)通常为具备样品供给部、展开部、检测部的多孔性的膜，其结构如下：针对检测对象物的标记抗体等检测试剂(以下有时称为“缀合物”)以能够溶出、展开的方式保持于展开部的展开起始部位，从而与样品接触后能够通过展开部并到达检测部，进而固定化抗体被固定在展开部的局部，构成检测部。这里，当样品滴加到样品供给部时，样品中的检测对象物与标记抗体特异性结合，形成复合物，该复合物在展开部向着下游方向逐渐展开，进而与固定化抗体结合。因此，通过在抗体固定化部分对由标记抗体、检测对象物和固定化抗体形成的三明治型复合物进行检测，从而能够对检测对象物进行定性或定量分析。构成缀合物的标记物的一例为胶体金粒子，通过胶体金粒子的显色反应能够进行定性检测。进一步地，基于其显色程度，还能够定量地检测样品中的检测对象物。但是，在前述样品为全血时存在如下问题：全血中的红细胞不能在多孔性的膜中移动而将膜孔堵塞，妨碍样品的展开。因此，在以全血为样品的情况下，需要预先从全血中分离除去红细胞，作为这样的方法，已知如下方法：在测定前，通过离心分离使红细胞沉降并除去的方法；在测定前或者测定开始时，通过红细胞分离剂使红细胞凝集并过滤除去的方法。作为前述红细胞分离剂，已知有例如海美溴铵(以聚凝胺的商品名流通。以下有时简称聚凝胺)(专利文献1、2、3)。专利文献1中，作为由合成的水溶性聚合物形成的红细胞凝集剂的一例，而列举了聚凝胺。专利文献2中，记载了一种色谱用玻璃纤维制血细胞分离膜，其含有聚凝胺作为红细胞凝集化物质。并且公开了如下技术：单独聚凝胺的情况下，血液通过血细胞分离膜时伴随有溶血，为了避免该溶血，用PVA被覆前述血细胞分离膜。这样，虽然聚凝胺作为红细胞凝集剂是广泛已知的，但将聚凝胺用于将金属缀合物用作检测试剂的免疫色谱的情况下，存在不仅使全血中的红细胞凝集而且还使金属缀合物凝集的问题(专利文献3)。专利文献3中公开了用于防止这样的金属缀合物的凝集的技术。即，开发了一种免疫色谱分析设备，其中，使作为红细胞分离剂的聚凝胺等聚阳离子结合于色谱载体的上游，在其下游结合有用于中和聚阳离子的聚阴离子。根据该技术，聚阳离子的正电荷被聚阴离子的负电荷中和，因此可以防止含硒的金属缀合物凝集。以往技术文献专利文献专利文献1：日本特开平3-205563号公报专利文献2：日本特开平5-099918号公报专利文献3：日本特表2002-509254号公报
技术实现思路
专利技术要解决的课题在以全血为样品，采用聚凝胺作为红细胞凝集剂，采用胶体金缀合物作为检测试剂来实施免疫色谱时，本专利技术人们尝试按照上述专利文献3公开那样，通过添加用于防止胶体金缀合物凝集的聚阴离子来中和聚凝胺的正电荷。但是，虽然实现了全血中的红细胞的凝集和分离除去，但未能防止胶体金缀合物的凝集。其原因尚不确定，但可能是由于专利文献3的硒缀合物与胶体金缀合物不同、以及聚阴离子的种类等。本专利技术的课题在于，提供使用聚凝胺作为以聚阳离子为有效成分的红细胞凝集剂且使用胶体金缀合物作为检测试剂时，使血液中的红细胞凝集并分离除去，并且不引起胶体金缀合物的凝集的免疫色谱用测试条；以及提供使用该测试条的免疫色谱。用于解决课题的手段本专利技术人们在研究用于解决上述课题的方法时，不进行引起课题的物质、即聚阳离子的种类或量的选定，而是从完全不同的观点出发，审视此前的试剂构成本身并对各构成要素进行深入了研究，结果惊奇地发现存在一种具有抑制由聚凝胺引起的胶体金缀合物的凝集的能力的添加剂，发现通过使用该添加剂，在不通过聚阴离子来中和聚阳离子的情况下就能抑制胶体金缀合物的凝集，至此完成了本专利技术。即，本专利技术具有以下构成。[1]一种免疫色谱用测试条，其具有以下的构成。(1)具有由多孔体构成的膜，所述多孔体至少具备样品供给部、展开部和检测部，在展开部的局部具有缀合物保持部，所述缀合物保持部以能够溶出的方式保持有被胶体金标记的抗检测对象物抗体缀合物，进而在展开部的局部且所述缀合物保持部分的下游侧具有检测部，所述检测部固定有固定化抗体；(2)从样品供给部至展开部的缀合物保持部的上游侧中的至少局部，以能够与通过样品供给部而被提供的聚凝胺接触的方式含有添加剂，所述添加剂用于抑制由作为红细胞凝集剂的聚凝胺引起的所述缀合物的凝集。[2]根据[1]所述的测试条，其中，聚凝胺包含于样品供给部。[3]根据[1]或[2]所述的测试条，其中，前述添加剂包含于缀合物保持部。[4]根据[1]～[3]中任一项所述的测试条，其中，不含有作为中和剂的聚阴离子，所述聚阴离子用于中和作为红细胞凝集剂的聚凝胺的阳离子。[5]根据[1]～[4]中任一项所述的测试条，其中，前述添加剂为选自属于(A)2价金属的盐、(B)硫酸与金属或鎓的盐、(C)亚硫酸与金属的盐、(D)羧酸螯合物、(E)聚碱性氨基酸的化合物中的1种或2种以上化合物。[6]一种利用免疫色谱的检测方法，其具有下述工序：(A)将样品供给到测试条的样品供给部的工序，所述测试条具有由多孔体构成的膜，所述多孔体至少具备样品供给部、展开部和检测部，在展开部的局部具有缀合物保持部，所述缀合物保持部以能够溶出的方式保持有含胶体金的缀合物，所述胶体金固定有针对对象物的抗体，进而在展开部的局部且缀合物保持部分的下游侧具有检测部，所述检测部固定有固定化抗体；(B)使聚凝胺与样品在样品供给部或样品供给部的上游接触，使样品中的来自血液的成分凝集的工序；(C)将通过(B)工序得到的凝集物从样品中分离除去的工序；(D)使通过(C)工序得到的分离除去了凝集物的样品成分与含胶体金的缀合物接触的工序，该工序在具有抑制由聚凝胺引起的所述缀合物的凝集的能力的添加剂的存在下进行；(E)在检测部检测通过(D)工序得到的、样品成分中的对象物与缀合物的复合物的工序。[7]根据[6]所述的检测方法，其中，聚凝胺包含于样品供给部。[8]根据[6]或[7]所述的检测方法，其中，前述添加剂包含于缀合物保持部。[9]根据[6]～[8]中任一项所述的检测方法，其中，不含有作为中和剂的聚阴离子，所述聚阴离子用于中和作为红细胞凝集剂的聚凝胺的阳离子。[10]根据[6]～[9]中任一项所述的检测方法，其中，样品为肝素采血被检体或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫色谱用测试条，其具有以下的构成，(1)具有由多孔体构成的膜，所述多孔体至少具备样品供给部、展开部和检测部，在展开部的局部具有缀合物保持部，所述缀合物保持部以能够溶出的方式保持有被胶体金标记的抗检测对象物抗体缀合物，进而在展开部的局部且所述缀合物保持部分的下游侧具有检测部，所述检测部固定有固定化抗体；(2)从样品供给部至展开部的缀合物保持部的上游侧中的至少局部，以能够与通过样品供给部而被提供的聚凝胺接触的方式含有添加剂，所述添加剂用于抑制由作为红细胞凝集剂的聚凝胺引起的所述缀合物的凝集。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫色谱用测试条，其具有以下的构成，(1)具有由多孔体构成的膜，所述多孔体至少具备样品供给部、展开部和检测部，在展开部的局部具有缀合物保持部，所述缀合物保持部以能够溶出的方式保持有被胶体金标记的抗检测对象物抗体缀合物，进而在展开部的局部且所述缀合物保持部分的下游侧具有检测部，所述检测部固定有固定化抗体；(2)从样品供给部至展开部的缀合物保持部的上游侧中的至少局部，以能够与通过样品供给部而被提供的聚凝胺接触的方式含有添加剂，所述添加剂用于抑制由作为红细胞凝集剂的聚凝胺引起的所述缀合物的凝集。2.根据权利要求1所述的测试条，其中，聚凝胺包含于样品供给部。3.根据权利要求1或2所述的测试条，其中，所述添加剂包含于缀合物保持部。4.根据权利要求1～3中任一项所述的测试条，其中，不含有作为中和剂的聚阴离子，所述聚阴离子用于中和作为红细胞凝集剂的聚凝胺的阳离子。5.根据权利要求1～4中任一项所述的测试条，其中，所述添加剂为选自属于(A)2价金属的盐、(B)硫酸与金属或鎓的盐、(C)亚硫酸与金属的盐、(D)羧酸螯合物、(E)聚碱性氨基酸的化合物中的1种或2种以上的化合物。6.一种利用免疫色谱的检测方法，其具有下述工序：(A)将样品供给到测试条的样品供给部的工序，所述测试条具有由多孔体构成的膜，所述多孔体至少具备样品供给部、展开部和检测部，在展开部的局...

【专利技术属性】
技术研发人员：河野景吾，吉田万友美，山本光章，横川伸也，浅见麻里惠，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP