用于筛查血型不规则抗体的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种用于筛查血型不规则抗体的试剂盒，属于血型抗体检测技术领域。本发明专利技术的试剂盒含有3组共6份独立规格包装的红细胞，3组红细胞分别来自3人份，每人份红细胞中D、C、c、E、e、s、Le

Kit for screening irregular antibodies in blood group

The invention provides a kit for screening irregular antibodies of blood type, which belongs to the technical field of blood type antibody detection. The kit contains 3 groups of a total of 6 independent specification of packed red blood cells, red blood cells from 3 groups of 3 people, each person in red blood cells of D, C, C, E, e, s, Le

【技术实现步骤摘要】
用于筛查血型不规则抗体的试剂盒
本专利技术涉及血型抗体检测
，具体地说，涉及一种适用于各种血型抗体检测方法的用于筛查血型不规则抗体的试剂盒。
技术介绍
为了预防各类输血反应或新生儿溶血病的发生，对相关献血员和病患进行不规则抗体的筛查是非常必要的。我国卫生部《临床输血技术规范》第十七条规定：凡遇有下列情况必须按《全国临床检验操作规程》有关规定作抗体筛选试验：交叉配血不合时；对有输血史、妊娠史或短期内需要接收多次输血者。此外对于某些健康献血员，在发生血型定型有异议或怀疑有不规则抗体时，也可进行不规则抗体筛查试验。所谓不规则抗体是指抗A和抗B以外的抗体，其产生的途径可能是怀孕，输血，移植，或者是注射了免疫原性的物质。不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入血液中的不匹配红细胞或缩短红细胞的寿命，轻则影响治疗效果，重则危及生命。此外，对孕妇而言，不规则抗体会导致新生儿溶血病，影响新生儿脏器发育和智力发育，严重者则会危及新生儿生命安全。目前国内各级医院、血站检测血型不规则抗体的方法有盐水法、聚凝胺法、蛋白酶法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法等，其中应用最广的是微柱凝胶法，也是FDA的推荐方法。以上方法学的主要原理均为受检的血浆与不规则抗体筛检细胞起反应，以发现受检血浆中是否存在不规则抗体。目前，常用的商品化不规则抗体筛检试剂盒主要由3支抗原谱配比适宜的O型红细胞组合而成，红细胞表达D、C、c、E、e、Jka、Jkb、M、N、S、s、Fya、Fyb、Lea、Leb、K、k、P1等抗原，微柱凝胶法中常用的细胞浓度为0.8％～1％，盐水法、聚凝胺法、蛋白酶法、抗人球蛋白法常用的细胞浓度为3％～5％。由于不规则抗体筛检试剂盒的原料为人血红细胞，其来源受限，因此不同厂家生产的不规则抗体筛检红细胞的抗原谱普遍存在缺陷，如Rh、Kidd、Lewis等血型系统多数不是纯合子，而是杂合子，纯合子基因编码产生的抗原是杂合子基因的双倍剂量，因此用这些血型系统的杂合子红细胞去检测不规则抗体，可能会由于剂量效应造成针对这些血型系统的弱抗体漏检；且不规则抗体筛检红细胞上的Kidd血型系统、Lewis血型系统与相应抗体亲和力较差，凝集强度弱，也可能会使针对Kidd血型系统、Lewis血型系统产生的不规则抗体漏检。针对Rh、Kidd、Lewis等血型系统产生的抗体在所有不规则抗体中占比较大，且多数具有临床意义，如果漏检，可能引起较严重的速发型输血反应或迟发型输血反应，危及患者生病。因此，迫切需要一种减少不规则抗体的漏检率的检测方法，以避免漏检，降低临床输血风险。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够有效减少不规则抗体漏检，降低临床输血风险，准确度高，稳定性强的血型不规则抗体筛查试剂盒。为了实现本专利技术目的，本专利技术提供一种用于筛查血型不规则抗体的试剂盒，含有两套红细胞检测体系，一套红细胞检测体系经过蛋白酶处理，另一套红细胞检测体系不经过酶处理。本专利技术的试剂盒中，每套红细胞检测体系含有2-5人份的红细胞，每人份红细胞中D、C、c、E、e、s、Leb、Fya、K、抗原至少有两个阳性，M、N、S、Lea、JKa、JKb、Fyb、P1抗原至少有一个阳性。进一步地，每套红细胞检测体系中，Rh、Lewis、Kidd抗原系统选用纯合子。本专利技术试剂盒中每套红细胞检测体系含有独自分装的3人份的红细胞，且3人份的抗原成分尽量互补。本专利技术试剂盒中，所述的蛋白酶为菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶；当选用菠萝蛋白酶时，其处理红细胞的方法为：将pH值7.2-7.4，质量浓度为0.1％-0.3％的菠萝蛋白酶溶液按照与红细胞压积体积比2-3:1加入红细胞中，35-38℃处理10-20min，立即洗涤除去酶溶液。所述菠萝蛋白酶溶液是将菠萝蛋白酶加入0.1MpH值7.2-7.4的磷酸盐缓冲溶液中制得。优选地，菠萝蛋白酶处理红细胞的方法为：将pH值7.3，质量浓度为0.2％的菠萝蛋白酶溶液按照与红细胞压积体积比2:1加入红细胞中，37℃处理15-20min，立即用生理盐水洗涤，以除去酶溶液，再用红细胞保存液进行保存。本专利技术的红细胞保存液购自迈克生物科技股份有限公司。菠萝蛋白酶的浓度和作用时间、温度对红细胞的影响很大，经过大量试验，最终确定用于酶处理红细胞的菠萝蛋白酶溶液的最适初始浓度为0.1％～0.3％，处理红细胞的最适条件为37℃15～20分钟，菠萝蛋白酶溶液的盐离子浓度为0.1mol/L，pH为7.3±0.1，菠萝蛋白酶溶液须分装后置于-20℃保存，复溶后当天使用，且不可再冻存。本专利技术的试剂盒中，两套红细胞检测体系中红细胞悬液的浓度相同，为1％-5％；不同浓度红细胞悬液配制采用以下方式进行计算：稀释液的体积＝配制体积—原料细胞的体积。例如，要配制1％浓度的红细胞悬液1000ml，原料细胞的HCT为50.00％，则需要原料细胞的体积为(配制浓度1％×配制体积1000ml)/原料细胞的HCT50.00％＝20ml。本专利技术提供了上述试剂盒在筛查血型不规则抗体中的应用。本专利技术的试剂盒检测对象为血浆，判读结果时，应同时观察酶处理红细胞和酶未处理红细的反应结果，进行综合分析。本专利技术还提供了一种处理红细胞以增强红细胞上抗原与抗体反应能力的方法，是将pH值7.2-7.4，质量浓度为0.1％-0.3％的菠萝蛋白酶溶液按照与红细胞压积体积比2-3:1加入红细胞中，35-38℃处理10-20min；所述菠萝蛋白酶溶液的溶剂为0.1MpH值7.2-7.4的磷酸盐缓冲溶液。经该方法处理的红细胞，其抗原能够与血浆中抗体反应能力显著增强，见本申请实施例4的记载。本专利技术的有益效果在于：(1)在原有不规则抗体筛检试剂盒的基础上设计增加了酶处理红细胞，经酶处理过的红细胞能明显增强Rh血型系统、Kidd血型系统、Lewis血型系统、P血型系统与血浆中相应抗体的反应强度，减少血浆中不规则抗体的漏检。在临床样本检测中，用酶处理红细胞和未被酶处理红细胞同时检测同一样本，不仅能减少血浆中弱抗体的漏检，降低临床输血风险，还能通过反应格局初步推断阳性样本中不规则抗体的大致分布，辅助操作者分析试验结果。(2)通过反复试验优化酶处理红细胞的反应体系和酶处理红细胞后期的保存体系，使得酶处理红细胞的长期稳定性较好，与未被酶处理的红细胞基本一致。(3)传统的不同浓度红细胞悬液的配制方法是将样本离心后，吸取相应体积的压积红细胞加入到稀释液中即为相应浓度的红细胞悬液，由于离心后的压积红细胞之间仍然有较多液体，因此按照这样的配制方法得来的细胞浓度普遍比理论浓度低，且批间差异较大。本专利技术试剂盒红细胞浓度的确定采用HCT(红细胞比容)计算而来，采用HCT计算法来确定红细胞的浓度不仅使红细胞的浓度与理论浓度更接近，还能减少批间差异，使试剂盒性能更稳定。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。本专利技术0.1-0.3％菠萝蛋白酶溶液的配制方法如下：1、pH7.3磷酸盐缓冲液(PBS)的制备：1000mlA液的配制1000mlB液的配制100ml0.1MpH7.3的磷酸盐缓冲液的配制2、1％-0.3％菠萝蛋白酶的制备：将1g菠萝蛋白酶干粉置于1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于筛查血型不规则抗体的试剂盒，其特征在于，含有两套红细胞检测体系，一套红细胞检测体系的红细胞经过蛋白酶处理，另一套红细胞检测体系的红细胞不经过酶处理。

【技术特征摘要】
1.一种用于筛查血型不规则抗体的试剂盒，其特征在于，含有两套红细胞检测体系，一套红细胞检测体系的红细胞经过蛋白酶处理，另一套红细胞检测体系的红细胞不经过酶处理。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每套红细胞检测体系含有2-5人份的红细胞，每人份红细胞中D、C、c、E、e、s、Leb、Fya、K、抗原至少有两个阳性，M、N、S、Lea、JKa、JKb、Fyb、P1抗原至少有一个阳性。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，每套红细胞检测体系中，RH、Lewis、Kidd抗原系统选用纯合子。4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，每套红细胞检测体系含有独自分装的3人份的红细胞，且3人份的抗原成分尽量互补。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的蛋白酶为菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶；当选用菠萝蛋白酶时，其处理红细胞的方法为：将pH值7.2-7.4，质量浓度为0.1％-0.3％的菠萝蛋白酶溶液按照与红细...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛亚琳，王小波，田君喜，龙腾镶，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51