一种臧酋猴血型的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种臧酋猴血型的鉴定方法，包括以下步骤：(1)采集血液于含多孔棉的容器中，离心；(2)吸取上层液体，室温静置，然后4℃过夜，再室温静置，离心得血清；(3)制备人O型血红细胞；(4)将血清与人O型血红细胞混合，吸附去除人‑猴种属间非特异性抗体；(5)去除人‑猴种属间非特异性后的血清与保护液混合；(5)将步骤(5)所得物分别与正常人的A型血红细胞和B型血红细胞混合，根据混合后的凝集现象判断臧酋猴的血型。该方法操作简单，成本低，对臧酋猴损伤小，鉴定结果准确率高，重复性好。

Identification of a type of monkey chieftain Zang

The invention discloses a method for identification of a monkey chieftain Zang type, which comprises the following steps: (1) the collection of blood in a container containing porous cotton, centrifugal; (2) learn from the upper liquid, standing at room temperature, then 4 degrees overnight, then standing at room temperature, away from the experience of serum; (3) preparation human type O red blood cells; (4) the O mixed serum and red blood cells, removal of monkey species nonspecific antibody adsorption; (5) removal of monkey serum and protective liquid mixed after nonspecific species; (5) the step (5) blood type A red blood cells and red blood cells type B were respectively mixed income and normal people, judge the monkey blood group according to Zang chieftain agglutination after mixing. This method has the advantages of simple operation, low cost, small damage to Zang monkey chieftain, the identification results of high accuracy, good repeatability.

【技术实现步骤摘要】
一种臧酋猴血型的鉴定方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种臧酋猴血型的鉴定方法。
技术介绍
血型是人类血液的主要特征之一，ABO血型抗原广泛存在于人类红细胞和组织中，是最主要的红细胞血型系统。臧酋猴也有ABO血型系统，但和人类不同，臧酋猴的ABO血型抗原都表达在组织器官内，其外周血红细胞上不表达AB抗原，或是表达非常弱。这些血型抗体与移植器官上表达的AB抗原结合同样可以造成类似于人类ABO血型不合的同种异体器官移植排斥反应。由于臧酋猴的ABO血型抗原并不表达在外周血红细胞上，且血浆中的纤维蛋白和人-猴种属间非特异性抗体都会对部分检测结果产生干扰，容易产生假阳性或假阴性结果，所以臧酋猴的血型鉴定一直都较难。目前，臧酋猴的血型鉴定方法有：(1)通过传统试管法抗球蛋白试验和毛果芸香碱用药后唾液的AB抗原鉴定，但这两种方法不易标准化，认为因素较多，容易出现假阳性或者假阴性，造成血型判断不能明确或者判断错误。(2)组织切片免疫组织化学染色法，此方法对动物的损伤较大，一般只用于回顾验证性研究，不能满足繁育种群进行血型鉴定的要求。(3)卡式凝胶法，该方法成本高，离心需要专用离心机，且专用离心机不能用于其他试管离心，具有一定的局限性。
技术实现思路
针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供了一种臧酋猴血型的鉴定方法，可有效解决现有技术中成本高，具有局限性，鉴定不准确，易出现假阳性或者假阴性的问题。为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种臧酋猴血型的鉴定方法，包括以下步骤：(1)采集臧酋猴后肢浅静脉血置于含多孔棉的容器中，以120-130r/min的转速震荡10-15min；(2)吸取步骤(1)处理后的血液置于红头采血管中，室温静置40-60min，然后置于4℃过夜，再室温放置30-40min，于3500-6000r/min离心10-15min，吸取上清液；(3)吸取新鲜的正常人O型血于离心管中，加入9-10倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500-2000r/min离心15-20min，弃去上清液，然后用0.9％的生理盐水清洗沉淀物3-4次；(4)将步骤(2)所得上清液与步骤(3)所得物按体积比为1:1混合，并于37℃孵育30-40min，再于1300-1500r/min离心8-10min，取上清液；(5)步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为3-4:1-2混合；其中，保护液包括5％牛血清蛋白、5％蔗糖、5％PVP和含5％小牛血清的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液浓度为5mM，pH值为7.4；(6)将步骤(5)所得物分别与正常人的A型血红细胞和B型血红细胞按体积比为1:1混合，轻微摇匀后于1000r/min离心1min，观察凝集现象。若只与A型血红细胞混合后出现凝集现象，则鉴定为B型血；若只与B型血红细胞混合后出现凝集现象，则鉴定为A型血；若两种混合条件下均出现凝集现象，则鉴定为O型血；若两种混合条件下均不出现凝集现象，则鉴定为AB型血。进一步地，步骤(1)中离心转速为120r/min，离心时间为15min。进一步地，步骤(2)中室温静置60min，然后置于4℃过夜，再室温放置30min，于3800r/min离心10min。进一步地，步骤(3)中向正常人O型血红细胞中加入9倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500r/min离心15min。进一步地，步骤(4)中孵育时间为30min，离心速度为1372r/min，离心时间为10min。进一步地，步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为3:1混合。本专利技术提供的臧酋猴血型的鉴定方法，具有以下有益效果：(1)将采集的血液置于含多孔棉的容器中，可在摇床中不断震荡，血液中的纤维蛋白原转变成不溶性纤维蛋白时，生成的不溶性纤维蛋白接触到多孔棉后可被多孔棉吸附，可有效去除纤维蛋白原，避免其对测试结果的干扰。(2)将经过多孔棉处理后的血液在室温下静置，然后再于4℃静置过夜过夜，最后再放置室温静置，接着离心，可有效去除血清中的杂质，得到清亮的血清。(3)清亮血清与O型红细胞混合，吸附处理后可消除人-猴种属间非特异性抗体，同时进一步去除纤维蛋白原。(4)将去除人-猴种属间非特异性抗体和纤维蛋白原后的上清液经保护液保护，可增强抗体的活力，再与A型血红细胞或B型血红细胞混合，可准确有效的鉴定出血型类型，不会出现假阳性或假阴性的问题，此外，该方法成本低，对离心不具有局限性。附图说明图1为显微镜下单个红细胞图。图2为显微镜下红细胞凝集现象图。具体实施方式实施例1一种臧酋猴血型的鉴定方法，包括以下步骤：(1)选取20只臧酋猴，分别采集臧酋猴后肢浅静脉血置于含多孔棉的容器中，以120r/min的转速震荡15min；(2)吸取步骤(1)处理后的血液3mL置于红头采血管中，室温静置60min，然后置于4℃过夜，再室温放置30min，于3800r/min离心10min，吸取上清液；(3)吸取新鲜的正常人O型血于离心管中，加入9倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500r/min离心15min，弃去上清液，然后用0.9％的生理盐水清洗沉淀物3次，在显微镜下可观察到单个红细胞，如图1所示；(4)将步骤(2)所得上清液与步骤(3)所得物按体积比为1:1混合，并于37℃孵育30min，再于1372r/min离心10min，取上清液；(5)步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为3:1混合；其中，保护液包括5％牛血清蛋白、5％蔗糖、5％PVP和含5％小牛血清的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液浓度为5mM，pH值为7.4；(6)将步骤(5)所得物分别与正常人的A型血红细胞和B型血红细胞按体积比为1:1混合，轻微摇匀后于1000r/min离心1min，观察凝集现象，可在显微镜的低倍镜下观察红细胞凝集现象，若镜下出现成块，颗粒状或者红油状的凝块，则表明红细胞出现凝集，若镜下红细胞分布均匀，则表明未出现凝集，凝集现象如图2所示。若只与A型血红细胞混合后出现凝集现象，则鉴定为B型血；若只与B型血红细胞混合后出现凝集现象，则鉴定为A型血；若两种混合条件下均出现凝集现象，则鉴定为O型血；若两种混合条件下均不出现凝集现象，则鉴定为AB型血。根据凝结现象来判断臧酋猴最终的血型，由结果可知，20只臧酋猴中有8只为A型血，由6只为B型血，5只为O型血，1只为AB型血。实施例2一种臧酋猴血型的鉴定方法，包括以下步骤：(1)选取20只臧酋猴，分别采集臧酋猴后肢浅静脉血置于含多孔棉的容器中，以120r/min的转速震荡10min；(2)吸取步骤(1)处理后的血液3mL置于红头采血管中，室温静置40min，然后置于4℃过夜，再室温放置40min，于3500r/min离心15min，吸取上清液；(3)吸取新鲜的正常人O型血于离心管中，加入10倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500r/min离心15min，弃去上清液，然后用0.9％的生理盐水清洗沉淀物3次；(4)将步骤(2)所得上清液与步骤(3)所得物按体积比为1:1混合，并于37℃孵育40min，再于1500r/min离心8min，取上清液；(5)步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为4:1混合；其中，保护液包括5％牛血清蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种臧酋猴血型的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集臧酋猴后肢静脉血置于含多孔棉的容器中，以120‑130r/min的转速震荡10‑15min；(2)吸取步骤(1)处理后的血液置于红头采血管中，室温静置40‑60min，然后置于4℃过夜，再室温放置30‑40min，于3500‑6000r/min离心10‑15min，吸取上清液；(3)吸取新鲜的正常人O型血于离心管中，加入9‑10倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500‑2000r/min离心15‑20min，弃去上清液，然后用0.9％的生理盐水清洗沉淀物3‑4次；(4)将步骤(2)所得上清液与步骤(3)所得物按体积比为1:1混合，并于37℃孵育30‑40min，再于1300‑1500r/min离心8‑10min，取上清液；(5)步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为3‑4:1‑2混合；其中，保护液包括5％牛血清蛋白、5％蔗糖、5％PVP和含5％小牛血清的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液浓度为5mM，pH值为7.4；(6)将步骤(5)所得物分别与正常人的A型血红细胞和B型血红细胞按体积比为1:1混合，轻微摇匀后于1000r/min离心1min，观察凝集现象。...

【技术特征摘要】
1.一种臧酋猴血型的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集臧酋猴后肢静脉血置于含多孔棉的容器中，以120-130r/min的转速震荡10-15min；(2)吸取步骤(1)处理后的血液置于红头采血管中，室温静置40-60min，然后置于4℃过夜，再室温放置30-40min，于3500-6000r/min离心10-15min，吸取上清液；(3)吸取新鲜的正常人O型血于离心管中，加入9-10倍体积，浓度为0.9％的生理盐水，轻微摇匀，于1500-2000r/min离心15-20min，弃去上清液，然后用0.9％的生理盐水清洗沉淀物3-4次；(4)将步骤(2)所得上清液与步骤(3)所得物按体积比为1:1混合，并于37℃孵育30-40min，再于1300-1500r/min离心8-10min，取上清液；(5)步骤(4)所得上清液与保护液按体积比为3-4:1-2混合；其中，保护液包括5％牛血清蛋白、5％蔗糖、5％PVP和含5％小牛血清的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液浓度为5m...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨锋，谢晓娟，曾代文，
申请(专利权)人：四川省医学科学院·四川省人民医院实验动物研究所，
类型：发明
国别省市：四川,51