细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法技术

本发明专利技术公开了细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白，所述细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。并实现了该重组蛋白的高效可溶性表达，然后使用HisPur Cobalt（Clontech）亲和层析纯化蛋白，在使用洗脱缓冲液（200mM /L咪唑，50mM/L NaH2PO4，300mM/L NaCl）时得到一种高纯度的细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白。将该纯化蛋白作为包被抗原，可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。

Echinococcus granulosus antigen cC1 recombinant protein and its soluble expression method and purification method

The present invention discloses Echinococcus granulosus antigen cC1 recombinant protein and the amino acid sequence of the Echinococcus granulosus recombinant antigen cC1 protein sequence table SEQ ID No.2. And implement the soluble recombinant protein expression, and then use the HisPur Cobalt (Clontech) affinity purified protein chromatography in elution buffer (200mM /L 50mM/L NaH2PO4300mM/L imidazole, NaCl) obtained a Echinococcus granulosus antigen cC1 protein with high purity heavy group. The purified protein is used as a coated antigen, and a ELISA kit for detecting Echinococcus granulosus is prepared.

【技术实现步骤摘要】
细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法。
技术介绍
抗原cC1是细粒棘球绦虫成虫cDNA文库中的一个抗原基因。抗原cC1是一种重要的细粒棘球绦虫抗原，可能参与了细粒棘球绦虫信号传导途径，对于细胞的生长、分化具有重要的生理意义。抗原cC1同膜联蛋白家族(Annexinfamily)成员可能是同源基因，属于Annexin家族。研究该抗原的生理功能，不仅可以了解其对于细粒棘球蚴的寄生、生长、发育等生命活动中的重要意义，还可以为治疗和预防包虫病提供新的药物靶点和候选疫苗。基于以上研究背景，本专利技术构建了编码细粒棘球绦虫抗原cC1基因的原核表达质粒，转化入大肠杆菌表达系统，诱导其可溶性表达，并进行蛋白纯化，得到了该蛋白，为其今后的免疫原性、生化特性分析以及功能研究奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术通过基因工程技术，提供了一种细粒棘球绦虫抗原cC1的原核表达载体pET30a-抗原cC1，利用该载体转化大肠杆菌（BL21-DE3）实现了抗原cC1的高水平可溶性表达。并提供了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白，其特征在于：所述细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。

【技术特征摘要】
1.细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白，其特征在于：所述细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQIDNo.2。2.根据权利要求1所述的细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白，其特征在于：所述细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白编码的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.1中第22位-1065位碱基。3.权利要求1或2所述的细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白的可溶性表达，其特征在于：步骤如下：（1）目的基因抗原cC1的扩增；（2）构建抗原cC1表达质粒：将步骤（1）制备的目的基因细粒棘球绦虫抗原cC1纯化后酶切，构建入pET-30a相应的多克隆酶切位点，构建质粒pET30a-抗原cC1；（3）将步骤（2）制备的质粒pET30a-抗原cC1转化入E.ColiBL21(DE3)感受态细胞中，将活化表达的菌液加入LB液体培养基中，置于摇床上于37℃，180r/min振荡培养3小时，再加入0.1mmol/L的IPTG于18℃，诱导振荡培养6小时，离心、超声后收集上清。4.权利要求1或2所述的细粒棘球绦虫抗原cC1重组蛋白的纯化方法，其特征在于：是使用HisPurCobalt（Clontech）亲和层析纯化重组蛋白，使用洗脱缓冲液进行洗脱；所述洗脱缓冲液的配方为：200mM/L咪唑，50mM/LNaH2PO4，300mM/LNaCl，pH8.0。5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于：步骤如下：（1）加入20mMMES缓冲液于HisTALONTMGravityColumns预装柱冲洗介质；（2）加入超纯水，使其缓慢的流过柱内填充的介质；（3）加入结合缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：景涛，辛奇，高海军，袁苗苗，李焕平，宋晓霞，孙旭东，鲁俊，那斌，吕薇，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62