基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒，制备具有超顺磁性的磁珠，将该磁珠与副溶血性弧菌多克隆抗体偶联；合成MnO2纳米粒子，将该纳米粒子与副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体偶联；取待测液，将其与两种探针混合，使用磁力架分离磁珠‑菌体‑MnO2复合物，用柠檬酸盐缓冲液重悬该混合物，加入TMB显色，从而实现副溶血性弧菌快速特异性检测。该发明专利技术提出利用免疫磁珠和MnO2纳米粒子技术对副溶血性弧菌检测，利用ELISA方法的免疫学反应显色，缩短了检测时间，定量检测时变异系数小。最低检测浓度为10CFU/mL，加标回收率达到96.7%，灵敏度高，稳定性好。

Detection kit for detection of Vibrio parahaemolyticus based on immunomagnetic beads and MnO2 nanoparticles

The present invention discloses immunomagnetic beads and MnO2 nanoparticles for detection of Vibrio parahaemolyticus kit based on the preparation of super paramagnetic beads and the beads with Vibrio parahaemolyticus polyclonal antibody coupling; synthesis of MnO2 nanoparticles, the nanoparticles and Vibrio parahaemolyticus of chicken egg yolk antibodies from the sample solution, the coupling; the two probe hybrid, using magnetic frame MnO2 cell separation bead complexes, the mixture with citrate buffer was resuspended, adding TMB color, so as to realize the Vibrio parahaemolyticus fast specific detection. The invention uses immunomagnetic beads and MnO2 nanoparticle technology to detect Vibrio parahaemolyticus, and uses ELISA method to shorten the detection time, and the coefficient of variation is small in quantitative detection. The minimum detection concentration is 10CFU/mL, and the recovery rate is 96.7%. The sensitivity is high and the stability is good.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属微生物检测领域，具体涉及基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒。
技术介绍
副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus，VP）是一种革兰氏阴性非芽孢嗜盐菌，是常见的食源性致病菌之一。该菌主要来源于虾，鱼和贝类等海产品中，主要通过污染的海产品引起人类急性胃肠炎、伤口感染和败血症等。近几年来，随着食用海产品的人群在不断扩增，由副溶血性弧菌引起的食物中毒呈上升趋势，据报道，自1998年以来，副溶血性弧菌引起的食物中毒已超过沙门菌食物中毒，成为最严重的食源性病原菌。目前，该菌是多数进出口水产品必检的致病菌。当前，我国副溶血性弧菌的传统检测方法以微生物培养法为主，全程大概需要5-8天，操作繁琐，耗时长，已不能满足人们对食品安全检测快速简便的要求。随着技术的不断进步，推动着检测方法的不断发展，越来越多的方法应用于检测副溶血性弧菌，如PCR技术、酶联免疫吸附法（ELISA）、环介导等温扩增技术（LAMP）等。PCR技术可在短时间内放大检测目标，具有灵敏度高的特点，但是PCR操作过程要求高且易出现假阳性。ELISA法利用抗原-抗体的特异性结合检测，对设备要本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒，它包括：羧基化Fe3O4纳米粒子与抗副溶血性弧菌兔多抗偶联的免疫磁珠和MnO2纳米粒子与抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY偶联的MnO2纳米探针。

【技术特征摘要】
1.基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒，它包括：羧基化Fe3O4纳米粒子与抗副溶血性弧菌兔多抗偶联的免疫磁珠和MnO2纳米粒子与抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY偶联的MnO2纳米探针。2.快速检测食品副溶血性弧菌的方法，它包括：1）纳米磁珠的制备：添加1.08gFeCl3.6H2O到22mL乙二醇中，超声溶解10min，；再添加1.2gNaAc和0.2g柠檬酸钠超声10min，；最后，添加0.2gPEG6000于上述溶液中，超声混匀，将所得均质溶液转移至反应釜中，于199℃烘箱中反应18h；用永磁铁从反应溶液中分离中黑色的固体物质，用超纯水和乙醇交替清洗3-5次，得到羧基化Fe3O4纳米粒子；2）免疫磁珠的制备：取0.5mg羧基化Fe3O4纳米粒子，用PBS洗2次，用1mLPBS重悬，加入10mgEDC和10mgNHS活化羧基，30min后，磁吸附，去上清，PBS洗3次，1mLPBS重悬，加入50µg抗副溶血性弧菌兔多抗，室温反应2h，磁分离，去上清，PBS洗3次，加入1mL封闭液封闭1h，得到功能化免疫磁珠；3）纳米MnO2粒子的制备：添加25mg牛血清白蛋白于10mLPBS中，搅拌混匀，加入100µLMnSO4.H2O(0.1M)于混合液中，搅拌2min，再向其加入1M的NaOH100µL，搅拌6-7h后，用超纯水透析48h，15000...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵超，刘玉申，李娟，王娟，付凯悦，聂玮，宋秀玲，徐坤，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22