一种食品中游离氨基酸含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及氨基酸检测领域，具体而言，涉及一种食品中游离氨基酸含量的测定方法包括以下步骤：对质量为m的待检测物预处理，得到体积为V的检测液；将检测液进行柱前衍生化，得到衍生化的检测液；采用超临界流体色谱仪采用特定参数下检测其中氨基酸的含量，得到检测液所含的氨基酸的质量浓度；通过以下公式分别计算得到所述待检测物中氨基酸的含量：(质量浓度*V)/m。该方法整个超临界流体色谱的检测过程不会超过16min，溶剂用量极少，并且谱图显示完全可以将十七种氨基酸同时分离开，并定量检测出含量，具有检测速度快、有机溶剂用量少、分离度高、灵敏度高、再现性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种食品中游离氨基酸含量的测定方法
本专利技术涉及氨基酸检测领域，具体而言，涉及一种食品中游离氨基酸含量的测定方法。
技术介绍
氨基酸是既含氨基(-NH2)又含羧基(-COOH)的有机化合物的统称，是构成生物体蛋白质的基本单位，也是人体必需的营养物质之一，不仅具有营养保健价值，还具有特殊的生理调节功效，被认为是世界保健食品第三代产品。在食品工业中，氨基酸除用于食品营养强化剂外，还广泛用于调味、增香、消除异臭、防腐保鲜等方面，是食品品质鉴定中一个重要的理化指标。各种食品中都含有游离氨基酸，在食物的加工过程中，可以与肽、核苷酸、有机酸、糖、无机离子等形成相应的呈味活性物质，决定了每一种食物独有的风味特征。目前，食品或饮料中游离氨基酸含量测定方法主要采用电位滴定法、茚三酮比色法、消旋光法、氨基酸分析仪法、色谱法(液相、气相)等。其中，反相高效液相色谱法准确度最高，应用最广，但该方法最主要的缺点是分析时间长、分离度差、有机溶剂用量大。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种超临界流体色谱法测定食品中游离氨基酸含量的方法，所述的测定方法能在16min内快速分离并分别定量检测出食品中十七种氨基酸的含量，具有检测速度快、有机溶剂用量少、分离度高、灵敏度高、再现性好等优点。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种食品中游离氨基酸含量的测定方法，包括以下步骤：对质量为m的待检测物预处理，得到体积为V的检测液；将所述检测液进行柱前衍生化，得到衍生化的检测液；采用超临界流体色谱仪检测所述衍生化的检测液中氨基酸的含量，得到检测液所含的氨基酸的质量浓度；所述超临界流体色谱仪的检测条件为：色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.7μm，填料为高密度二醇；流动相为超临界二氧化碳和含有甲酸铵的甲醇乙腈溶液，其中，甲醇与乙腈的体积比为1：0.9-1.1，甲酸铵在所述甲醇乙腈溶液中的质量百分数为0.18％-0.22％；采用梯度洗脱，超临界二氧化碳在不同时间段的体积百分比为：0-0.2min为100％-95％，0.2-5.0min为90％-70％，5.0-10.5min为80％-60％，10.5-16.0min为90％-70％，16.0-17.0min为95％-100％；分析时间：3.5-16.0min；柱温：40-60℃；备压：1500-3000psi；进样量：0.2-10μl；流速：1.0-3.0mL/min；检测波长为280nm；通过以下公式分别计算得到所述待检测物中氨基酸的含量：(质量浓度*V)/m。本专利技术提供的测定方法，先将食品中的氨基酸提取出来，然后在超临界流体色谱仪中采用特定的洗脱条件，将十七种氨基酸分别选择性地分配，进而分离开，并定量检测出其浓度。最后代入公式(质量浓度*V)/m，计算出食品中十七种氨基酸的含量。整个超临界流体色谱的检测过程不会超过16min，溶剂用量极少，并且谱图显示完全可以将十七种氨基酸同时分离开，并定量检测出含量，具有检测速度快、有机溶剂用量少、分离度高、灵敏度高、再现性好等优点。进一步地，所述氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、精氨酸、苏氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、酪氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸。即本专利技术提供的测定方法可以检测这些氨基酸中的任一种或多种。上述测定方法适用于测定各种类型的食品，例如，植物组织、水果(火龙果、苹果、草莓等)和果酒(菠萝果酒等)。进一步地，所述待检测物包括植物组织、水果、果酒、果汁、饮料、固体饮料(如速溶茶等)、食品添加剂等。进一步地，若待检测物为液体，则所述预处理为直接取样；若待检测物为植物组织，所述预处理为：将待检测物粉碎，等体积比加入盐酸，充分混合后离心，上清液即为所述检测液；若待检测物为固体饮料、食品添加剂，所述预处理为：取待检测物，加入盐酸，使待检测物在盐酸中的浓度为0.8-1.5g/L，混合后离心得到上清液为所述检测液；如可以为0.8g/L、1g/L、1.2g/L、1.5g/L等等。所述盐酸溶液的浓度为0.2±0.02mol/L。加入盐酸溶液可以避免检测成分被氧化，可以在几乎零氧化率的条件下将食品中的氨基酸充分提取出来，提取率可以达到90％以上，该预处理方法对十七种氨基酸的提取率高，损失少。进一步地，所述衍生化为：依次加入pH为9.0±0.2的1±0.02mol/L硼酸盐标准缓冲液、甲醇、检测液、乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯，混合后超声处理10-20min，然后在60-80℃下水浴1.0h以上，去除过量的衍生化试剂；其中，硼酸盐标准缓冲液、甲醇、检测液和乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯的体积比为25：24：24-26：1。衍生化反应时，反应物之间的配比对反应产物的产量及反应速度具有至关重要的影响，采用上述配比的衍生化体系产量高，且反应速度快。水浴衍生化1h以后，反应基本达到饱和，如果再延长反应时间，提取率会提高，但相应的成本会急剧增加。水浴的时间可以为1h、1.5h、2h、3h等等。优选地，硼酸盐标准缓冲液、甲醇、检测液和乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯的体积比为25：24：25：1。进一步地，去除过量的衍生化试剂后还过滤，所述过滤采用0.22μm尼龙膜进行。通过过滤进一步去除杂质，为检测的稳定进行提供良好的基础。优选地，所述进样体积为0.2-3.0μl。经大量实验，该进样体积可以保证峰面积在比较合理的范围，从而保证在仪器的检测范围内。优选地，所述备压为1800psi。现该范围的备压，可以提高氨基酸的柱效，此时分离效果最佳，峰型分离度好。优选地，所述流速为2mL/min。该条件下分离效果更佳，灵敏度更高。优选地，所述超临界流体色谱仪检测时，波长补偿范围为330-430nm。该条件可以降低基线噪音干扰，得到的峰型对称性好、选择性强、干扰少。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术提供的测定方法能在16min内快速分离并分别定量检测出食品中十七种氨基酸的含量，具有检测速度快、采样量少、有机溶剂用量少、分离度高、灵敏度高、再现性好等优点。(2)本专利技术选用在待检测物中添加一定浓度的盐酸溶液，能快速将食品中的氨基酸分离出来，提高了食品中游离氨基酸的检测效率。(3)本专利技术还选择特定的衍生化体系以及步骤，反应速度快，衍生化效果好。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为本专利技术实施例1中标准品中测定的各氨基酸的色谱图；图2为本专利技术实施例1中火龙果样品中氨基酸的色谱图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1一种超临界流体色谱法测定食品中游离氨基酸含量的方法：一、制备衍生化的检测液取火龙果，去皮之后称量4g(m)打浆，按照1：1的质量体积比加入盐酸溶液(0.2mol/L)，在振荡器上震荡10s，使其完全混合，离心取上清液，得到检测液；取5mL具塞试管，向试管中依次加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中游离氨基酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：对质量为m的待检测物预处理，得到体积为V的检测液；将所述检测液进行柱前衍生化，得到衍生化的检测液；采用超临界流体色谱仪检测所述衍生化的检测液中氨基酸的含量，得到检测液所含的氨基酸的质量浓度；所述超临界流体色谱仪的检测条件为：色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.7μm，填料为高密度二醇；流动相为超临界二氧化碳和含有甲酸铵的甲醇乙腈溶液，其中，甲醇与乙腈的体积比为1：0.9‑1.1，甲酸铵在所述甲醇乙腈溶液中的质量百分数为0.18％‑0.22％；采用梯度洗脱，超临界二氧化碳在不同时间段的体积百分比为：0‑0.2min为100％‑95％，0.2‑5.0min为90％‑70％，5.0‑10.5min为80％‑60％，10.5‑16.0min为90％‑70％，16.0‑17.0min为95％‑100％；分析时间：3.5‑16.0min；柱温：40‑60℃；备压：1500‑3000psi；进样量：0.2‑10μl；流速：1.0‑3.0mL/min；检测波长为280nm；通过以下公式分别计算得到所述待检测物中氨基酸的含量：(质量浓度*V)/m。...

【技术特征摘要】
1.一种食品中游离氨基酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：对质量为m的待检测物预处理，得到体积为V的检测液；将所述检测液进行柱前衍生化，得到衍生化的检测液；采用超临界流体色谱仪检测所述衍生化的检测液中氨基酸的含量，得到检测液所含的氨基酸的质量浓度；所述超临界流体色谱仪的检测条件为：色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.7μm，填料为高密度二醇；流动相为超临界二氧化碳和含有甲酸铵的甲醇乙腈溶液，其中，甲醇与乙腈的体积比为1：0.9-1.1，甲酸铵在所述甲醇乙腈溶液中的质量百分数为0.18％-0.22％；采用梯度洗脱，超临界二氧化碳在不同时间段的体积百分比为：0-0.2min为100％-95％，0.2-5.0min为90％-70％，5.0-10.5min为80％-60％，10.5-16.0min为90％-70％，16.0-17.0min为95％-100％；分析时间：3.5-16.0min；柱温：40-60℃；备压：1500-3000psi；进样量：0.2-10μl；流速：1.0-3.0mL/min；检测波长为280nm；通过以下公式分别计算得到所述待检测物中氨基酸的含量：(质量浓度*V)/m。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、精氨酸、苏氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、酪氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸。3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述待检测物包括植物组织、水果、果酒、果汁、饮...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚霄，齐宁利，林茂，王晓芳，魏晓奕，林丽静，马丽娜，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院农产品加工研究所，贵州省现代农业发展研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44