纤维蛋白原测定制造技术

技术编号:16268234 阅读:19 留言:0更新日期:2017-09-22 20:23
本发明专利技术涉及一种检测完整纤维蛋白原的方法,所述方法包括以下步骤:a)提供一种样品,所述样品包含任选地至少部分地转化为纤维蛋白的至少一些纤维蛋白原,并且任选地包含凝血酶;b)将所述样品溶解在抑制凝血酶活性的溶解溶液中;c)在任选的SDS-PAGE后,将所述样品的一部分转印/施加到蛋白质结合膜;d)使所述纤维蛋白原与能够结合纤维蛋白肽A部分的单克隆一抗反应;以及e)通过对所述结合的单克隆一抗的量进行定量,检测所述样品中完整纤维蛋白原的量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】纤维蛋白原测定
本专利技术整体涉及用于在凝血酶存在下检测纤维蛋白原的免疫测定法。
技术介绍
血液是液体组织,包括分散于液相中的红细胞、白细胞、触觉小体和血小板。液相是血浆,其包括酸、脂质、溶解的电解质和蛋白质。存在于液相中的一种特定蛋白质是纤维蛋白原。当发生出血时,纤维蛋白原与凝血酶(一种酶)反应,以形成不可溶的纤维蛋白凝块。在广泛多样的情况下,动物包括人可遭受由于伤口或外科手术期间的出血。在一些情况下,出血是相对少量的,并且除施加简单急救之外的正常血液凝固功能是所需要的全部。在其它情况下,可发生大量出血。这些情况通常需要专门的设备和材料以及受过训练的施用适当援助的人员。在解决上述问题的努力中,已开发了用于控制过量出血的材料。局部吸收性止血剂(TAH)广泛用于外科应用中。TAH涵盖基于多种织造或非织造织物或海绵的产品,通常由至少部分吸收性的材料制成,范围从天然聚合物到合成聚合物以及它们的组合,包括基于丙交酯-乙交酯的共聚物,例如Polyglactin910、氧化纤维素、氧化再生纤维素(ORC)、明胶、胶原、几丁质、壳聚糖等。为了提高止血性能,可将基于上述材料的支架与生物衍生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测完整纤维蛋白原的方法,包括以下步骤: a)提供样品,所述样品包含任选地至少部分地转化为纤维蛋白的至少一些纤维蛋白原,并且任选地包含凝血酶; b)将所述样品溶解在抑制凝血酶活性的溶解溶液中; c)将所述样品的一部分转移到凝胶,并使所述部分经受电泳; d)将样品的所述部分的级分从所述凝胶转印到蛋白质结合膜,并将所述纤维蛋白原固定在所述膜上; e)使所述膜经受至少一个封闭步骤; f)使固定在所述膜上的所述纤维蛋白原与能够结合纤维蛋白肽A部分的单克隆一抗反应,以形成纤维蛋白原-抗体复合物; g)使所述膜经受至少一个洗涤步骤,以去除任何未结合的单克隆一抗; h)使形成所述纤维蛋白原-抗体复合物的所述单克隆抗体与具有标记物的二抗反应; i)使所述膜经受至少一个洗涤步骤,以去除任何未结合的具有标记物的二抗;以及 j)通过对所述标记物的量进行定量,检测所述样品中完整纤维蛋白原的量。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述样品包含未知量的完整纤维蛋白原。3.根据权利要求1所述的方法,其中所述样品为固体、液体或半液体。4.根据权利要求1所述的方法,其中所述样品包含冻干的纤维蛋白原和凝血酶。5.根据权利要求1所述的方法,其中所述方法采用SDS-PAGE和蛋白质印迹。6.根据权利要求1所述的方法,其中能够结合纤维蛋白肽A部分的所述单克隆一抗为克隆1F7。7.根据权利要求1所述的方法,其中所述单克隆一抗能够结合所述纤维蛋白原上的纤维蛋白肽B部分。8.根据权利要求1所述的方法,其中所述具有标记物的二抗为缀合至碱性磷酸酶的山羊抗小鼠IgG。9.根据权利要求1所述的方法,其中通过对所述标记物的量进行定量来检测所述样品中完整纤维蛋白原的量的所述步骤通过将所述蛋白质结合膜与碱性磷酸酶的底物进行温育而进行。10.根据权利要求1所述的方法,其中所述标记物为电化学检测标记物、比色测定法检测标记物、放射学检测标记物、磁学检测标记物或突光标记物。11.一种用于评估止血装置的性能或稳定性的方法,所述止血装置包含至少一种为纤维蛋白原的生物组分,所述方法包括将根据权利要求1所述的方法获得的样品中完整纤维蛋白原的量相对于完整纤维蛋白原的阈值水平进行比较。12.—种检测完整纤维蛋白原的方法,包括以下步骤: a)提供样品,所述样品包含任选地至少部分地转化为纤维蛋白的至少一些纤维蛋白原,并且任选地包含凝血酶; b)将所述样品溶解在抑制凝血酶活性的溶解溶液中; c)将所述样品的一部分施加到蛋白质结合膜,并将所述纤维蛋白原固定在所述膜上;d)使所述膜经受至少一个封闭步骤,并从所述膜去除从纤维蛋白原裂解的纤维蛋白肽A ; e)使固定在所述膜上的所述纤维蛋白原与能够结合纤维蛋白肽A部分的单克隆一抗反应,以形成纤维蛋白原-抗体复合物; f)使所述膜经受至少一个洗涤步骤,以去除任何未结合的单克隆一抗; g)使形成所述纤维蛋白原-抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员:A德安格里斯E布科格鲁
申请(专利权)人:研究的一个目的是开发一种用于测量纤维蛋白原向纤维蛋白转化反应的速率和程度以及测量在凝血酶存在下完整纤维蛋白原的量的稳健测定法
类型:发明
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