表达CD40L的哺乳动物细胞及其用途制造技术

本文报道了用于在存在IL‑2和IL‑21的情况下共培养兔B‑细胞集合或单个放置的兔B‑细胞的共培养系统，其中表达CD40L的CHO细胞用作饲养细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达CD40L的晡乳动物细胞及其用途 本专利申请是B-细胞培养领域。本文报道了这样的培养系统，其用于刺激和扩展兔和人来源的抗体分泌细胞，如激活的B-细胞、成浆细胞以及在存在兔或人表达CD40L的饲养细胞的情况下从疾病中存活后免疫的兔或人分离的B-细胞。_2] 专利技术背景已经报道，来自不同物种的分离的B-细胞、成浆细胞和浆细胞难以在体外进行培养。实际上，这正常通过将原代B-细胞与杂交瘤配偶体融合产生无限增殖B-细胞系或无限增殖化来克服。对于兔，还开发了浆细胞瘤融合配偶体(Spieker-Polet，!!.，等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA92 (1995) 9348-9352，但是杂交瘤技术在兔中不能很好地运行。对于兔B-细胞在体外的持续存活，提供必要的激活刺激剂和存活因子是必需的。已经描述了多种化 合物，如IL-2、IL-4、IL-1O及其他(参见例如Zubler，R.，等，Eur.J.1mmunol.14 (1984) 357-363 和 J.Exp.Med.160 (1984) 1170-1183)。在生理学上，B-细胞在遭遇特异抗原加例如通过⑶40/⑶40L途径本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于产生抗体的方法，其包括在存在IL-2和IL-21的情况下共培养兔B-细胞与表达兔⑶40L的哺乳动物细胞的步骤。2.权利要求1的方法，其特征在于所述B-细胞是非成熟的B-细胞。3.前述权利要求任一项的方法，其特征在于所述IL-2是人IL-2并且所述IL-21是鼠类 IL-21。4.前述权利要求任一项的方法，其特征在于所述B-细胞是单个放置的B-细胞。5.前述权利要求任一项的方法，其特征在于所述B-细胞是IgG阳性的B-细胞(IgG+B-细胞)。6.1L-2和/或IL-21用于共培养兔B-细胞与饲养细胞的用途。7.权利要求6的用途，其特征在于所述饲养细胞是表达兔CD40L的哺乳动物细胞。8.用于培养分泌特异性结合T-细胞表面抗原并且介导阴性刺激物至T-细胞的抗体的兔B-细胞的方法，其包括在存在IL-2和IL-21的情况下共培养B-细胞和表达兔⑶40L的哺乳动物细胞。9.用于培养分泌抗体的兔B-细胞的方法，其以以下顺序包括 i)在存在促有丝分裂 刺激剂的情况下兔B-细胞与表达兔CD40L的哺乳动物细胞的第一次共培养，和 ?)在存在抗体产生刺激剂的情况下兔B-细胞与表达兔CD40L的哺乳动物细胞的随后第二次共培养。10.权利要求9的方法，其特征在于所述促有丝分裂刺激剂选自CD40-和CD40L相互作用的化合物、ICOS-和ICOS-L-相互作用的化合物、APRIL、BAFF、CR2、CXCL9、CXCLl2 (SDF-1)、CXCLl3, CXCL16, Flt_3L、白细胞介素-1 ( α / β )、白细胞介素-2、白细胞介素_3、白细胞介素_4、白细胞介素-5、白细胞介素-7、白细胞介素-10、白细胞介素-14、白细胞介素-21、SAP (信号传递淋巴细胞激活分子相关蛋白质)、葡萄球菌A菌株Cowanl颗粒(SAC ;热杀死的、福尔马林固定的)、TLR配体如LPS、不同的CpG ODN或瑞喹莫德(R-848)、TSLP、肿瘤坏死因子(TNF) α、I型干扰素(例如IFN α / β )，和II型干扰素(例如 IFN Y ) ο11.权利要求9或10任一项的方法，其特征在于所述抗体产生刺激剂选自CD40-和CD40L相互作用的化合物、ICOS-和ICOS-L-相互作用的化合物、APRIL、BAFF, CR2、CXCL9、CXCL12 (SDF-1)、CXCL13、CXCL16、Flt-3L、白细胞介素-1 ( α / β )、白细胞介素-2、白细胞介素_3、白细胞介素_4、白细胞介素_5、白细胞介素_6、白细胞介素_9、白细胞介素-10、白细胞介素-13、白细胞介素-21、白细胞介素-33、SAP (信号传递淋巴细胞激活分子相关蛋白质)、葡萄球菌A菌株Cowanl颗粒(SAC ;热杀死的、福尔马林固定的)、TLR配体如LPS、不同的CpGODN或瑞喹莫德(R-848)、TSLP、肿瘤坏死因子(TNF) α、I型干扰素(例如IFN α / β )，和II型干扰素(例如IFN Y ) ο12.用于产生特异性结合抗原的抗体的方法，其包括以下步骤: a)在存在IL-2和IL-21的情况下共培养分泌抗体的兔B-细胞的集合或单个分泌抗体的兔B-细胞与表达兔CD40L的哺乳动物细胞， b)培养包含在一个或多个表达盒内含有编码步骤a)中共培养的兔B-细胞分泌的抗体可变区或其人源化变体的核酸的细胞，c)从细胞或培养基中回收抗体，并由此产生抗体，其特异性结合抗原。13.权利要求12的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤: a)提供分泌抗体的(成熟的)兔B-细胞群体(其获得自实验动物或人的血液)， b)用至少一种荧光染料(在一个实施方案中用1-3，或2-3种荧光染料)染色兔B-细胞群体的细胞， c)将B-细胞染色群体的单个细胞放置在单独的容器中(在一个实施方案中是这样的容器，其为多孔平板的一个孔)， d)在存在表达兔⑶40L的哺乳动物细胞以及IL-2和...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·恩德尔，J·菲舍尔，P·科恩，S·奥夫纳，J·普拉策尔，S·西伯尔，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：