一株绿脓杆菌用于κ-卡拉胶酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一株绿脓杆菌（Pseudomonassp.）fjfst-331，已于2013年12月25日在中国典型培养物保藏中心登记保藏，其保藏号为CCTCCM2013705，以及用该菌株发酵制备κ-卡拉胶酶的方法。本发明专利技术以该菌株作为菌种，采用碳源、氮源、无机盐组成的发酵培养基，在优化后的培养条件下，κ-卡拉胶酶的活力达到70.39U/ml。发酵液通过硫酸铵盐析，离心收集沉淀，后进行透析，取透析液过离子交换柱及凝胶柱，冷冻干燥即可获得κ-卡拉胶酶干粉。

【技术实现步骤摘要】
一株绿脓杆菌用于K-卡拉胶酶的制备
本专利技术属于生物化工领域，涉及一株绿脓杆菌用于K -卡拉胶酶的制备方法。
技术介绍
卡拉胶是由1，3-β -D-吡喃半乳糖和1，4- a -D-吡喃半乳糖作为基本骨架，交替连接而成的硫酸线性多糖，主要存在于红藻纲中的麒麟菜属、角叉菜属、杉藻属和沙菜属等的细胞壁中。根据其二糖单元上所含的硫酸基团的数量和内醚环的有无，可将卡拉胶分为K-、t -、Υ-、λ-、ξ-、ω-和ν-卡拉胶等类型，工业生产和使用的主要为K-卡拉胶、1-卡拉胶和λ-卡拉胶3种。卡拉胶是一种海藻硫酸半乳匀多糖，通过化学或生物手段降解和修饰后，获得的半乳低聚糖硫酸醋及其衍生物具有多种生物活性如抗病毒、抗肿瘤、抗凝血等，对人体的细胞免疫和体液免疫功能也具有显著的增强作用。研究显示，卡拉胶及其低聚糖的生物学活性与分子量大小和硫酸根含量密切相关，一般认为，多糖分子量在5000-60000范围具有明显的生物活性，因此经降解后得到的卡拉胶低聚糖硫酸酷有可能成为新型海洋药物的重要来源。卡拉胶酶主要来源于假单胞菌Aewt/offlmas、卩遼纤维菌弧菌Vibrio、别单胞菌等。目前利用卡拉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株绿脓杆菌，其特征在于:所述菌株为绿脓杆菌(AeotZoffioftas sp.) f jfst-331,已于2013年12月25日在中国典型培养物保藏中心登记保藏，其保藏号为CCTCC M2013705。2.根据权利要求1所述的一株绿脓杆菌，其特征在于:所述绿脓杆菌sp.) fjfst-331 的 16S rRNA 序列如 SEQ ID N0.1 所示。3.—种如权利要求1所述的一株绿脓杆菌的用途，其特征在于:用于制备K-卡拉胶酶。4.一株如权利要求1所述的一株绿脓杆菌用于制备K -卡拉胶酶的方法，其特征在于:包括如下步骤: ①.将绿脓杆菌(Aewt/offioftassp.) fjfst-331接种到产酶培养基中，250ml三角瓶装30ml产酶培养基，按常规方法灭菌、冷却并接种菌落，32°C、160r/min摇床培养24h后，取Iml培养液再次接种产酶培养基，32°C、160r/min摇床培养56h，发酵液5000r/min离心IOmin,去除沉淀,取上清液； ②.用250ml三角瓶装20ml只含质量分数为0.5% κ -卡拉胶底物的培养基，按常规方法灭菌、冷却并接种Iml上清发酵酶液，于32°C反应lh，得到含κ -卡拉胶酶的发酵液； ③.将发酵培养基经过4°C，8000-10000g冷冻离心10-20min之后，取上清液； ④.将上清液加入质量分数为60%-80%的饱和硫酸铵，加入后继续搅拌lh，放置冰箱沉降过夜，4°C，8000-10000g 离心 20-40min 取沉淀； ⑤.沉淀置于蒸馏水中透`析48h，冷冻干燥后得到粗酶粉，_20°C...

【专利技术属性】
技术研发人员：张龙涛，郭娟娟，曾绍校，郑宝东，张怡，曾诚，黄旭辉，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：