流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法技术

本发明专利技术公开了一种流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，包括以下步骤：取猪外周静脉血，制备抗凝血；吸取所述抗凝血，分别加入抗猪CD3、CD4、CD8单克隆抗体，旋涡混匀，于4℃避光染色；用红细胞裂解液破裂红细胞；用PBS液洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测；分析检测结果，获得猪外周血T淋巴细胞亚群比例。本发明专利技术成功建立了稳定规范的流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，通过对样品前处理、检测和分析过程中的目标细胞选取、补偿调节及参数选择的问题进行改进，避免了试验过程中人为因素造成的误差，提高了结果判断的真实性和客观性。

Detection of T lymphocyte subsets in peripheral blood of swine by flow cytometry

The invention discloses a method for flow cytometric detection of porcine peripheral blood T lymphocyte subsets, characterized by comprising the following steps: Pig peripheral blood, preparation of anti coagulation; absorb the anticoagulant, anti porcine CD3 and CD4 were added, CD8 monoclonal antibody, vortex mixing 4 DEG C to avoid light staining; with red blood cell lysis rupture of red blood cells; washed with PBS and suspended cells were detected using flow cytometry; analysis of test results, obtained the ratio of T lymphocyte subsets in peripheral blood of pigs. The invention successfully established the method of flow cytometry detection of porcine stable standard of peripheral blood T lymphocyte subsets, based on sample pretreatment, detection and analysis in the process of target cell selection, compensation adjustment and parameter selection problems, errors caused by human factors in the testing process to avoid, to improve the real the results of judgment and objectivity.

【技术实现步骤摘要】
流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法
本专利技术属于细胞检测
，具体地说，涉及一种流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法。
技术介绍
流式细胞术(FlowCytometry，FCM)是一种对单个细胞表面或细胞内化学成分进行荧光定量分析的新技术。其工作原理是对单个细胞或分子进行荧光标记后，进行多参数的定量分析。该技术作为一种快速细胞分析技术，广泛应用于免疫学、细胞生物学等基础医学研究领域。流式细胞术可以通过识别细胞表面特异的免疫荧光信号，来实现T淋巴细胞亚群的检测，有助于评价机体的细胞免疫功能。在兽医临床和科学研究中发现，样本前处理、检测时的参数调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定。目前，尚无使用流式细胞仪检测猪外周血T淋巴细胞亚群的可靠参考方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对样本前处理、检测时电压和荧光补偿的调节、结果分析时的处理方式的不同造成检测结果波动大、不稳定的问题，提供了一种流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，建立了一种稳定规范的猪外周血T淋巴细胞亚群的检测方法。为了解决上述技术问题，本专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，取猪外周静脉血，制备抗凝血；步骤2，吸取所述抗凝血于两支流式管中，一支管中加入抗猪CD3、CD4、CD8单克隆抗体，旋涡混匀，于4℃避光染色，用作检测管；另一支用作阴性设置管；步骤3，用红细胞裂解液破裂红细胞；步骤4，用PBS液洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测；步骤5，分析检测结果，获得猪外周血T淋巴细胞亚群比例。

【技术特征摘要】
1.一种流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，取猪外周静脉血，制备抗凝血；步骤2，吸取所述抗凝血于两支流式管中，一支管中加入抗猪CD3、CD4、CD8单克隆抗体，旋涡混匀，于4℃避光染色，用作检测管；另一支用作阴性设置管；步骤3，用红细胞裂解液破裂红细胞；步骤4，用PBS液洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测；步骤5，分析检测结果，获得猪外周血T淋巴细胞亚群比例。2.根据权利要求1所述的流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述制备抗凝血，具体为：于2mL规格的EDTA-Na2抗凝管中加入2mL猪外周静脉血。3.根据权利要求1所述的流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述吸取抗凝血的体积数为100uL。4.根据权利要求1所述的流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述染色的时间为30min。5.根据权利要求1所述的流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述使用流式细胞仪进行检测，包括：在前向散射光/侧向散射光双参数图中调节电压和电流线性增益参数，使左下方的淋巴细胞与邻近右...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭西，于正强，胡东，李林蔚，
申请(专利权)人：成都扬克斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51