一种靶向人肿瘤干细胞的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域。具体而言，本发明专利技术涉及一种针对人肿瘤干细胞的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及所述抗体或片段在肿瘤治疗和诊断中的用途。

Monoclonal antibody targeting human tumor stem cell and uses thereof

The present invention relates to the field of biomedicine. In particular, the present invention relates to isolated monoclonal antibodies or antigen binding fragments for human tumor stem cells and the use of said antibodies or fragments in tumor therapy and diagnosis.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向人肿瘤干细胞的单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及生物医药领域。具体而言，本专利技术涉及一种针对人肿瘤干细胞的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及所述抗体或片段在肿瘤治疗和诊断中的用途。
技术介绍
恶性肿瘤(癌症)已成为威胁全世界人民生命与健康的“头号杀手”。全世界每年肿瘤的发病人数超过1400万，仅在我国每年新增的肿瘤患者超过300万。导致癌症高死亡率的根本原因是癌细胞的扩散、转移和治疗后多数患者易复发和耐药。临床上现有的治疗手段，手术、放疗、化疗对癌细胞转移、复发、耐药疗效甚微，或只有近期疗效，并不能改变患者长期的存活情况。目前，手术切除对大约10-20％的早期患者效果好，但对已发生扩散转移的患者几乎无效。放疗只能治疗局部病灶，常作为术前、术后的辅助治疗和少数种类癌症的根治性治疗。化疗可用于已发生扩散转移的患者，但因毒副作用大，容易产生近期或远期的耐药，因而只能对大约20-30％的患者有明显的近期疗效。即使采用手术、放疗和化疗联合应用的综合治疗措施，其生存5年的远期疗效多年一直徘徊在20-30％，约70-80％的患者在治疗后因转移、复发和耐药在5年内死亡。即便是就诊时无转移的早期癌症患者，也还是有一部分在治疗后发生转移复发而死亡。近年发展起来的肿瘤的新型靶向药物，包括多肽、小分子、蛋白因子、基因治疗及抗体药物，与化疗药联合应用通常也只能相对现有治疗手段延长患者生存期3～9个月，对远期患者的5年生存率没有显著的提高。最近两年新兴起的肿瘤免疫治疗手段，例如针对免疫检查点的PD-1单抗药物以及CAR-T细胞疗法，虽然已经表现出可取得一些令人鼓舞的远期疗效的迹象，但总体对癌症患者的有效率仅能达到20-30％左右，仍然有大量的癌症患者得不到真正有效的药物的救治。因此提高肿瘤患者远期疗效、延长生存期的关键是开发抑制肿瘤转移、复发、耐药的新型药物。专利技术概述在第一方面，本专利技术提供了一种针对肿瘤干细胞的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含：VLCDR1，其包含SEQIDNO:2所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:2具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，VLCDR2，其包含SEQIDNO:3所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:3具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，和VLCDR3，其包含SEQIDNO:4所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:4具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列；所述重链可变区包含：VHCDR1，其包含SEQIDNO:6所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:6具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，VHCDR2，其包含SEQIDNO:7所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:7具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，和VHCDR3，其包含SEQIDNO:8所示氨基酸序列或包含相对于SEQIDNO:8具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单克隆抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含SEQIDNO:1所示氨基酸序列或与SEQIDNO:1具有至少85％、至少90％、至少95％或更高序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQIDNO:5所示氨基酸序列或与SEQIDNO:5具有至少85％、至少90％、至少95％或更高序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含人重链恒定区，例如，包含SEQIDNO:11所示的氨基酸序列的人重链恒定区。在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含人轻链恒定区，例如，包含SEQIDNO:12所示的氨基酸序列的人轻链恒定区。在一些实施方案中，所述单克隆抗体包含具有SEQIDNO:9所示氨基酸序列的重链和具有SEQIDNO:10所示氨基酸序列的轻链。在第二方面，本专利技术提供了一种药物组合物，其包含本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段与选自细胞毒素、放射性同位素或生物活性蛋白质的治疗性部分缀合。在第三方面，本专利技术提供了一种在患者中治疗恶性肿瘤、预防和/或治疗恶性肿瘤转移或复发的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段或本专利技术的药物组合物。在一些实施方案中，所述恶性肿瘤选自乳腺癌、大肠癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌和胃癌。在一些实施方案中，所述方法还包括给所述患者施用其它抗肿瘤治疗手段，例如施用化疗剂、靶向其它肿瘤特异性抗原的抗体或放疗。在第四方面，本专利技术提供了本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段或本专利技术的药物组合物在制备用于治疗恶性肿瘤、预防和/或治疗恶性肿瘤转移或复发的药物中的用途。在一些实施方案中，所述恶性肿瘤选自乳腺癌、大肠癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌和胃癌。在第五方面，本专利技术提供了一种检测生物学样品中肿瘤干细胞存在的方法，包括：a)使所述生物学样品与本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；b)检测本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段与所述生物学样品中的靶抗原的结合，其中检出所述结合代表所述生物学样品中存在肿瘤干细胞。在第六方面，本专利技术还提供一种用于分离肿瘤干细胞的方法，所述方法包括：(a)提供疑似包含肿瘤干细胞的细胞群；(b)鉴定所述细胞的亚群，其结合本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段；和(c)分离所述亚群。在第五和第六方面的一些实施方案中，所述肿瘤干细胞选自乳腺癌干细胞、大肠癌干细胞、胰腺癌干细胞、前列腺癌干细胞、肝癌干细胞、肺癌干细胞和胃癌干细胞。在第七方面，本专利技术还提供了一种检测患者中恶性肿瘤的存在的方法，包括：a)使获得自所述患者的生物学样品与本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；b)检测本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段与所述生物学样品中的靶抗原的结合，其中检出代表所述患者中存在恶性肿瘤。在第八方面，本专利技术还提供一种用于预后患者中恶性肿瘤复发或进展的方法，所述方法包括：(a)从所述患者中分离包含循环细胞的生物学样品；(b)使所述包含循环细胞的生物学样品与本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和(c)鉴定结合本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段的循环细胞的存在，从而预后所述患者中恶性肿瘤的复发或进展。在一些实施方案中，所述恶性肿瘤的进展包含所述恶性肿瘤在患者中的转移。在第七和第八方面的一些实施方案中，所述生物学样品包括血液样品、淋巴样品或其组分。在一些实施方案中，所述恶性肿瘤选自乳腺癌、大肠癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌和胃癌。在第九方面，本专利技术还提供一种分离的核酸分子，其编码本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述核酸分子与表达调控序列可操作地连接。在第十方面，本专利技术还提供一种表达载体，其包含本专利技术的核酸分子。在第十一方面，本专利技术还提供一种宿主细胞，其由本专利技术的核酸分子或本专利技术的表达载体转化。在第十二方面，本专利技术还提供一种生产针对人肿瘤干细胞的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，包括：(i)在适合本专利技术的核酸分子或表达载体表达的情况下培养本专利技术的宿主细胞，和(ii)分离并纯化由所述核酸分子或表达载体表达的抗体或其抗原结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种针对肿瘤干细胞的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:2具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，VL CDR2，其包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:3具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，和VL CDR3，其包含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:4具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列；所述重链可变区包含：VH CDR1，其包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:6具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，VH CDR2，其包含SEQ ID NO:7所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:7具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，和VH CDR3，其包含SEQ ID NO:8所示氨基酸序列或包含相对于SEQ ID NO:8具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种针对肿瘤干细胞的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含：VLCDR1，其包含SEQIDNO:2所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:2具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，VLCDR2，其包含SEQIDNO:3所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:3具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，和VLCDR3，其包含SEQIDNO:4所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:4具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列；所述重链可变区包含：VHCDR1，其包含SEQIDNO:6所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:6具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，VHCDR2，其包含SEQIDNO:7所示氨基酸序列或相对于SEQIDNO:7具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列，和VHCDR3，其包含SEQIDNO:8所示氨基酸序列或包含相对于SEQIDNO:8具有1或2个氨基酸残基取代、缺失或添加的氨基酸序列。2.权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体是人源化抗体。3.权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQIDNO:1所示氨基酸序列或与SEQIDNO:1具有至少85％、至少90％、至少95％或更高序列相同性的氨基酸序列。4.权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQIDNO:5所示氨基酸序列或与SEQIDNO:5具有至少85％、至少90％、至少95％或更高序列相同性的氨基酸序列。5.权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体包含人重链恒定区，例如，包含SEQIDNO:11所示的氨基酸序列的人重链恒定区。6.权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体包含人轻链恒定区，例如，包含SEQIDNO:12所示的氨基酸序列的人轻链恒定区。7.权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体包含具有SEQIDNO:9所示氨基酸序列的重链和具有SEQIDNO:10所示氨基酸序列的轻链。8.一种药物组合物，其包含权利要求1-7中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。9.权利要求8的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段与选自细胞毒素、放射性同位素或生物活性蛋白质的治疗性部分缀合。10.一种在患者中治疗恶性肿瘤、预防和/或治疗恶性肿瘤转移或复发的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的权利要求1-7中任一项的单克隆抗体或其抗原结合片段或权利要求8或9的药物组合物。11.权利要求10的方法，其中所述恶性肿瘤选自乳腺癌、大肠癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌和胃癌。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈敏，
申请(专利权)人：苏州博聚华生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32