一种富含1‑脱氧野尻霉素的北虫草的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种富含1‑脱氧野尻霉素的北虫草的培养方法。一种富含桑叶有效活性成分的北虫草的培养方法，包括如下步骤：(1)向培养基中加入富含桑叶有效活性成分的原料，灭菌，制得富集培养基；(2)取蛹虫草子实体，经培养，制备北虫草菌液；(3)将北虫草菌液接种于富集培养基中，暗培养3～5天；然后培养2.5～3.5天；出草管理14～26天；收获即得。本发明专利技术通过在传统的北虫草的小麦培养料中加入桑叶或者桑叶的提取物，培养北虫草，获得的富含桑叶活性成分1‑脱氧野尻霉素的北虫草；且经过测定，其所含1‑脱氧野尻霉素的比例符合中医配伍用药，减少用药量，同时显著提高了北虫草的药用价值。

A rich culture method of North Cordyceps 1 deoxynojirimycin.

The invention relates to a method for cultivating a rich North Cordyceps 1 1-deoxynojirimycin. A method of cultivation of Cordyceps militaris enriched mulberry leaf active ingredients, which comprises the following steps: (1) sterilization was added to the culture medium of mulberry leaf active ingredients rich in raw materials, prepared enrichment medium; (2) from Cordyceps militaris, after cultivation, preparation of Cordyceps militaris liquid; (3) the Cordyceps militaris was inoculated in the enrichment medium, cultured in darkness for 3 to 5 days; and then cultured for 2.5 to 3.5 days; the grass management 14 ~ 26 days to harvest. The present invention extracts with mulberry leaf material culture or in the traditional North Cordyceps in wheat, Cordyceps militaris Cordyceps, rich in active ingredients from mulberry leaves North 1 deoxynojirimycin; and through determination, the proportion of 1 1-deoxynojirimycin in line with traditional Chinese medicine combination medication, reduce the use of the dosage, and significantly improve the medicinal value of Cordyceps militaris.

【技术实现步骤摘要】
一种富含1-脱氧野尻霉素的北虫草的培养方法
本专利技术涉及一种富含1-脱氧野尻霉素的北虫草的培养方法，属于食用菌栽培

技术介绍
冬虫夏草，被称为“神草”，具有催眠镇静、益肝肾、补虚损、防癌、抗癌、止血、化痰、平喘等多种功效，与人参、鹿茸并称为中国的三大滋补品。而北冬虫夏草(Cordycepsmilitaris)简称北虫草，是寄生于夜蛾科等蛹体上，不同于冬虫夏草的另一种虫草，它分布于世界各地，是既可食用又可药用的一种真菌，可在一定程度上代替冬虫夏草使用。由于野生虫草资源匮乏，专家学者们致力于人工北虫草的相关研究，以满足人们日益增长的消费需求。研究表明，人工栽培北虫草是可行的，获得的人工北虫草同样具有补益功效,同时在免疫调节、抗肿瘤、抗癌、抗氧化等方面药效较佳。分析其活性成分发现，虫草素和虫草腺苷等含量均不低于野生的虫草。桑科桑属(Morus.L)植物具有药食功能，桑叶早被我国药典收录,并被国家食品与药品监督管理局正是收录为既是食品又是药品目录。在《神农本草经》中就被誉为“神仙草”，其味苦、性寒，具有补血、疏风、散热、益肝通气、降压、利尿消渴等功效；现代医学也证明桑叶在降血糖、降血压、降血脂、抗炎、抗病毒、抗衰老以及减肥方面均有显著效果。因此，以桑叶为主要原料的食品、保健品深受消费者青睐。已有研究证明，桑叶中的1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,1-DNJ)具有对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，是桑叶具有降血糖、治疗糖尿病功效的主要活性成分，此外1-DNJ还具有抗病毒、抗肿瘤转移等药理作用。鉴于此，DNJ已成为近几年天然活性物质的研究热点。中医临床上常将北虫草与各种中药配伍使用以达到协同增效的目的，虫草主要归肺肾两经，所以凡是肺上有病的，比如久咳劳嗽、有肺痨的人来说，服用之后的作用非常明显。虫草和中药沙参、川贝母、麦冬、陈皮、茯苓、阿胶、桑叶等配伍，不但可以止血化痰，还具有抗肿瘤、保肝、降血糖等作用，但患者在配伍使用中药时常常因服用量大、服用不便，导致中断使用药物，为此提高北虫草的利用率、简化中医配伍用药是必须首先解决的问题。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种富含桑叶有效成分1-脱氧野尻霉素及其衍生物的北虫草的培养方法，目的是简化中医配伍用药，减少用药量，同时提高北虫草的药用价值。一种富含桑叶有效活性成分的北虫草的培养方法，包括如下步骤：(1)向培养基中加入富含桑叶有效活性成分的原料，灭菌，制得富集培养基；(2)取蛹虫草子实体，经培养，制备北虫草菌液；(3)将步骤(2)制得的北虫草菌液接种于步骤(1)制得的富集培养基中，在温度20～22℃、相对湿度58～62％条件下暗培养3～5天；然后在白天20～22℃、夜晚8～12℃的条件下培养2.5～3.5天，期间白天采用太阳散射光照射，夜晚用日光灯照射；然后在温度20℃～22℃、相对湿度不低于85％的条件下进行出草管理14～16天；收获即得。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中富含桑叶有效活性成分的原料为：桑叶粉、桑叶水提物和/或鲜桑叶匀浆。进一步优选的，所述的桑叶粉粒度不小于0.2mm2；所述桑叶水提物为新鲜桑叶与水按料液比1:(4～6)的比例混合后，单位g/L，超声波提取0.4～0.6h，离心，取上清，即得；所述的鲜桑叶匀浆为新鲜桑叶与水按料液比1:(3～5)的比例混合，单位g/L，匀浆，即得。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中培养基为小麦培养基，组分如下：小麦25～35g，水35～45mL，匀浆后进行封口、高压灭菌。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中富含桑叶有效活性成分的原料与培养基的质量比为(1～4):(3～10)。根据本专利技术优选的，所述步骤(2)中培养的具体步骤如下：将蛹虫草子实体消毒后，用无菌水洗净，去除表层，取中间部位组织块切成组织片，接种于固体培养基中，于25℃黑暗培养7天；然后感光培养4天，选取转色为橘黄色的菌丝接种于液体菌种培养基中，黑暗条件下，继续于25℃培养3天，每天在恒温摇床上以200r/min振荡1h，制得菌丝干重比为0.2～0.8mg/mL的北虫草菌液。进一步优选的，所述步骤(2)中的消毒为浸入质量浓度为0.1％的氯化汞溶液中3min；进一步优选的，述步骤(2)中的组织片厚度为0.1mm；进一步优选的，所述步骤(2)中的固体培养基，每升组分如下：土豆200g煮水20分钟取滤液，琼脂20g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁3g，加水定容至1000ml，pH自然。进一步优选的，所述步骤(2)中的液体菌种培养基，每升组分如下：葡萄糖20g，蛋白胨30g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁3g，加水定容至1000ml，pH自然。进一步优选的，所述步骤(2)中菌丝干重比为0.5mg/mL。根据本专利技术优选的，所述步骤(3)中接种为无菌接种，接种前，先用紫外线对富集培养基灭菌15min；接种前先对北虫草菌液稀释2～4倍。根据本专利技术优选的，所述步骤(3)中，接种量为富集培养基体积的5～10％。有益效果1、本专利技术通过在传统的北虫草的小麦培养基中加入桑叶或者桑叶的提取物，培养北虫草，获得的富含桑叶活性成分1-脱氧野尻霉素的北虫草；且经过测定，其所含1-脱氧野尻霉素的比例符合中医配伍用药，减少用药量，同时显著提高了北虫草的药用价值。2、本专利技术培育出的富含桑叶活性成分的北虫草，检测出桑叶独有的生物碱成分-1-脱氧野尻霉素，为食品、保健品和药品提供了更有利用价值的虫草原料；附图说明图1是实施例1制得的北虫草中检测得到的虫草素和腺苷的高效液相色谱图；图2是实施例1制得的北虫草中检测得到的1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)的高效液相色谱图；具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的技术方案做进一步阐述，但本专利技术所保护范围不限于此。生物原料来源桑叶购自山东省蚕业研究所烟台绿宝蚕用饲料厂。小麦为普通市售产品，购自山东省蚕业研究所。蛹虫草子实体购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号CGMCC5.700；平菇子实体购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号CGMCC5.370；猴头菇子实体购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号CGMCC5.739；蛹虫草子实体、平菇子实体和猴头菇子实体也可市场购得。实施例中所述固体培养基，每升组分如下：土豆200g煮水20分钟取滤液，琼脂20g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁3g，加水定容至1000ml，pH自然。实施例中所述液体菌种培养基，每升组分如下：葡萄糖20g，蛋白胨30g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁3g，加水定容至1000ml，pH自然。实施例1一种富含桑叶有效活性成分的北虫草的培养方法，步骤如下：(1)将干桑叶粗粉碎至约0.5cm2，按照桑叶粉与小麦质量比3:10的比例加入到小麦培养基中，121℃灭菌1.5h后，取出，冷却，制得富集培养基；所述小麦培养基，组分为：小麦30g，水40ml。(2)将蛹虫草子实体置入0.1％(质量百分比)氯化汞溶液中消毒3min后，用无菌水洗净，刮掉表层取中间部位组织块切成0.1mm组织片，接种于固体培养基中于25℃黑暗培养7天；然后感光培养4天，选取转色为橘黄色的菌丝接种于液体菌种培养基中，黑暗条件下，继续于25℃培养3天，每天在恒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种富含桑叶有效活性成分的北虫草的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)向培养基中加入富含桑叶有效活性成分的原料，灭菌，制得富集培养基；(2)取蛹虫草子实体，经培养，制备北虫草菌液；(3)将步骤(2)制得的北虫草菌液接种于步骤(1)制得的富集培养基中，在温度20～22℃、相对湿度58～62％条件下暗培养3～5天；然后在白天20～22℃、夜晚8～12℃的条件下培养2.5～3.5天，期间白天采用太阳散射光照射，夜晚用日光灯照射；然后在温度20℃～22℃、相对湿度不低于85％的条件下进行出草管理14～26天；收获即得。

【技术特征摘要】
1.一种富含桑叶有效活性成分的北虫草的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)向培养基中加入富含桑叶有效活性成分的原料，灭菌，制得富集培养基；(2)取蛹虫草子实体，经培养，制备北虫草菌液；(3)将步骤(2)制得的北虫草菌液接种于步骤(1)制得的富集培养基中，在温度20～22℃、相对湿度58～62％条件下暗培养3～5天；然后在白天20～22℃、夜晚8～12℃的条件下培养2.5～3.5天，期间白天采用太阳散射光照射，夜晚用日光灯照射；然后在温度20℃～22℃、相对湿度不低于85％的条件下进行出草管理14～26天；收获即得。2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中富含桑叶有效活性成分的原料为：桑叶粉、桑叶水提物和/或鲜桑叶匀浆。3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述的桑叶粉粒度不小于0.2mm2；所述桑叶水提物为新鲜桑叶与水按料液比1:(4～6)的比例混合后，单位g/L，超声波提取0.4～0.6h，离心，取上清，即得；所述的鲜桑叶匀浆为新鲜桑叶与水按料液比1:(3～5)的比例混合，单位g/L，匀浆，即得。4.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中培养基为小麦培养基，组分如下：小麦25～35g，水35～45mL，匀浆后封口、高压灭菌。5.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中富含桑叶有效活性成分的原料与培养基的质量比为(1～4):(3～10)。6.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：施新琴，郭光，李化秀，乔鹏，顾寅钰，梁明芝，聂玉霞，朱红，肖连明，
申请(专利权)人：山东省蚕业研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37