一种检测隐秘杆菌的实时定量LAMP引物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测隐秘杆菌的实时定量LAMP引物、试剂盒及方法，所述引物如SEQ ID NO：1~4所示；所述试剂盒包括以上所述LAMP引物、2×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、超纯水和隐秘杆菌DNA。所述方法括材料的准备、LAMP引物的设计与合成、反应模板的提取、LAMP 反应体系建立以及采用LAMP检测方法进行特异性检测、敏感性检测和实时定量检测。特异性检测和敏感性检测证实，本发明专利技术提供的LAMP检测方法可实时监测反应并且可对隐秘杆菌拷贝数进行定量检测，快速准确的获得检测结果，为简便、快速地检测隐秘杆菌带来便利。

【技术实现步骤摘要】
一种检测隐秘杆菌的实时定量LAMP引物、试剂盒及方法
本专利技术涉及微生物检测
，具体说是涉及一种快速并且可实时定量检测隐秘杆菌的环介导等温扩增试剂盒及其应用。
技术介绍
隐秘杆菌(Arcanobacteriumpyogenes，A.pyogenes)，又名化脓放线杆菌，是一种多形态、无运动性的革兰氏阳性杆菌。隐秘杆菌普遍存在于牛、羊、猪和其他重要经济动物的黏膜上，是一种条件性致病菌。隐秘杆菌可在家畜间广泛传播，导致广泛多样的皮肤、内脏器官和关节的非特异性化脓性感染，如急性化脓性乳房炎、慢性脓肿性乳房炎、关节炎、心内膜炎、肝脓肿、子宫炎以及流产和不孕等，给养殖业带来较大的经济损失。目前，隐秘杆菌的检测技术主要有常规方法和分子生物学方法。常规方法是通过对细菌的表型特征和生化指标进行鉴定。从样品中分离病原菌需要耗费大量的时间和相对苛刻的操作环境条件，且分离率低。鉴定隐秘杆菌的生化指标主要包括：革兰氏染色、氧化酶实验、过氧化氧酶实验、V-P反应(福格斯-普利斯考尔)产物实验，隐秘杆菌在血平板上需要36h以上才长出明显菌落，生化试验通常耗时24-72小时，做出正确的鉴定将花费4-5天时本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测隐秘杆菌的实时定量LAMP引物，其特征在于，所述引物如SEQ ID NO：1~4所示。

【技术特征摘要】
1.一种检测隐秘杆菌的实时定量LAMP引物，其特征在于，所述引物如SEQIDNO：1~4所示。2.根据权利要求1所述检测隐秘杆菌的实时定量LAMP引物，其特征在于，所述的引物SEQIDNO：1和SEQIDNO：2还可用于PCR检测，用于PCR检测其扩增片段大小为220bp。3.一种检测隐秘杆菌的实时定量LAMP试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的检测隐秘杆菌的实时定量LAMP引物。4.根据权利要求3所述检测隐秘杆菌的实时定量LAMP试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括2×反应缓冲液、BstDNA聚合酶、超纯水和隐秘杆菌DNA。5.根据权利要求3或4所述检测隐秘杆菌的实时定量LAMP试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应温度为63℃，反应在25-30分钟出现扩增。6.一种检测隐秘杆菌的实时定量LAMP试剂盒的方法，其特征在于，所述方法包括材料的准备、...

【专利技术属性】
技术研发人员：李军，吴翠兰，彭昊，冯世文，潘艳，陶立，马春霞，谢永平，钟舒红，胡帅，杨威，陈泽祥，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45