柠檬酸溶液借助磷酸胆碱及其衍生物用于亲和色谱纯化CRP的用途制造技术

本发明专利技术涉及使用柠檬酸溶液以进行从生物液体亲和色谱式移除C‑反应性蛋白质(CRP)，其中CRP的亲和色谱式移除通过将CRP与用ω‑膦酰基氧基烷基铵基和/或用ω‑铵烷氧基‑羟基‑磷酰基氧基官能化的柱材料(Ca

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】柠檬酸溶液借助磷酸胆碱及其衍生物用于亲和色谱纯化CRP的用途本专利技术涉及柠檬酸溶液用于从生物液体亲和色谱式移除C-反应性蛋白质(CRP)的用途，其中亲和色谱式移除CRP通过将CRP与用ω-膦酰基氧基烷基铵基和/或用ω-铵烷氧基-羟基-磷酰基氧基官能化的柱材料(Ca2+-依赖性)结合而进行。专利技术背景按照世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WHO)的信息在2008年有约17,000,000人死于心血管疾病。由此，心血管疾病是非传染性疾病中最常见的死因并且导致全世界每年发生的死亡的大约三分之一。按照估计，该数字到2030年将增加到大约23,000,000例死亡/年。因此心血管疾病不仅是全世界的主要死亡原因，而且也导致国家卫生系统和疾病保险公司的巨额医疗成本。心血管疾病的两种最常见且最有害的现象是出现动脉硬化和血栓形成，其反过来又尤其导致心肌梗死和卒中。近年来，心血管疾病的治疗实现了长足的进展。这些进展不仅通过关于疾病引发机制的增加的知识成为可能，而且还通过风险患者的早期识别成为可能。事实上，疾病风险的鉴定及其早期治疗是现代医学实践的重要特征。在近25年中，鉴定出多个因素和临床参数，它们与疾病的当前状况或与心血管疾病的未来可能性相关联。这样的风险因素能够是可测量的生化或生理学参数例如血清-胆固醇-，HDL-，LDL-，和纤维蛋白原-水平，但也包括行为模式例如超重和吸烟。在风险因素不仅指示疾病或其发生而且事实上参与引起疾病发生的情况下，对风险因素的治疗影响能够影响疾病进程或减少其发生风险。C-反应性蛋白质(CRP)是先天免疫系统的急性-阶段-蛋白质部分并且在肝中与炎症反应相关联地形成并释放到血液中。在这方面，CRP的形成首先通过细胞因子诱导，其在急性或慢性炎症反应的范围中表达。在这方面，形成CRP的最强刺激物是白细胞介素-6(IL-6)。因此，血液中的CRP水平和IL-6水平都是局部或全身炎症反应的指标。慢性炎症据推测是心血管疾病的基本的和支持性的病理学现象之一。由此出发越来越清楚的是，CRP不仅断言了心血管疾病，而且也因果性地参与其发生或者能够影响其进程。Yeh(ClinCardiol.,2005,28:408-412)显示，能够用CRP-水平来预测心血管疾病风险，CRP额外是炎症反应的指征，而炎症则促进动脉粥样硬化的全部阶段。Zoccali等人，(Semin.Nephrol.,2005,25:358-362)显示，CRP-水平断言了肾脏疾病终末期患者的心血管死亡风险。按照Nurmohamed等人，(Neth.J.Med.,2005,63:376-381)CRP-水平断言了血液透析患者的心血管死亡风险。Sola等人，(J.Card.Fail.,2005,11:607-612)能够显示为此能够利用他汀类药物治疗，其降低CRP的量并因此借此降低心血管疾病造成的死亡率和发病率。但是，这些治疗形式并不足以显著减少在心肌梗死后出现的高CRP-量(直至正常值的1000倍)或透析患者血液中的高CRP-量。人血液中的CRP正常值变化因人而异但平均为大约0.8mgCRP/升血液，但在急性或慢性炎症反应(例如细菌感染，动脉粥样硬化，心肌梗死后)的情况下能够升高至明显高于100mgCRP/升血液。因为CRP在血液中的半衰期(约19小时)恒定并且因此独立于患者的健康状况，CRP的合成速率单独负责调节血液CRP-水平(Pepys&Hirschfield,J.Clin.Invest.,2003,111:1805-1812)。在急性病理条件下剧烈升高的CRP合成因此对患者(高危患者或急性患者)CRP-移除的治疗手段提出特别的要求，原因在于必须清除显著量的CRP以将血液CRP-水平降低至正常值。因此存在对治疗方法的增加的兴趣，其减少患者的血液CRP-水平。此外，基于CRP的临床意义存在对纯化CRP的有效方法的兴趣，以随后将经纯化CRP用于其他实验中，例如研究其分子功能。WO2004/076486公开抑制免疫学、炎性和/或病理生理学应答的方法，其通过向具有增加CRP-水平的患者给药CRP-结合性分子进行。然而其中并未公开的是，体外处理生物液体以从所述生物液体移除CRP。WO90/12632公开体外处理生物液体的方法和设备，其目标是从这些生物液体移除CRP以及抗-磷酸胆碱-抗体，以治疗癌症。为此使用的含磷酸胆碱基质能够例如由硅土，琼脂糖，乙酰基珠(Acrylbeads)或琼脂糖组成，其中通过所含的磷酸胆碱不仅结合CRP而且结合抗-磷酸胆碱-抗体。US2007/225226A1公开特定的肽，其结合CRP并因此能够在CRP-单采血液成分术中用作功能柱材料。所述结合独立于钙地发生。还描述了一些体外血液净化装置，其在使用这些柱材料的情况下适于CRP-单采血液成分术，包括移除内毒素的系统，柠檬酸盐在其中用作抗凝血剂。CRP是五聚体，其亚单位各自结合两个Ca2+-离子，在它们的帮助下发生与本专利技术中使用的配体的结合。因为柠檬酸盐与高亲和力的Ca2+-离子结合，至今的推论是，在使用Ca2+-依赖性配体的情况下，柠檬酸盐对结合CRP的柱容量具有负面效果。当然本申请的专利技术人能够显示，在使用配体的情况下容量更高。CRP是调理素并且能够以结合形式在C1q上激活补体系统。然而能够出人意料地显示的是，柠檬酸盐防止补体激活，这又进一步提高容量，从而柠檬酸盐在使用配体的情况下导致进一步增容。在Ca2+-依赖性配体的情况下发生的这些效果在US2007/225226A1的背景下是完全出人意料的。WO2007/076844公开方法，其通过从血浆通过单采血液成分术进行体外CRP-移除降低患者(通过增加的血液CRP-水平造成的)风险。根据该专利技术，为此使用包含基质的柱，其上结合磷酸胆碱-衍生物用于结合CRP并从血浆清除，并且因此治疗和/或预防自身免疫疾病，心血管疾病，糖尿病以及肾功能不全。Slagman等人(BloodPurif.,2011,31:9)展示猪模型，其在心肌梗死后通过体外单采血液成分术成功降低血液CRP-水平。在体外使用血液和血浆发生的问题是，无论是分析或制备应用的情况下还是在透析或单采血液成分术的情况下，发生的凝血不仅阻碍使用本身或使其变得不可能，而且同样能够阻塞或污染所用的设备。出于该原因，在从人或动物体移除后向血液或血浆直接添加凝血抑制剂(所谓的抗凝剂)。抑制凝血的一种可能是给予Ca2+-螯合剂例如EDTA(乙二胺四乙酸)，草酸盐和柠檬酸盐。在凝血期间作为一些凝血因子的辅因子需要钙。借助Ca2+-螯合剂从血液或血浆抽取钙，并因此抑制凝结。然而，此处对于通过磷酸胆碱或磷酸乙醇胺或磷酸胆碱-衍生物或磷酸乙醇胺-衍生物移除CRP的亲和色谱方法存在一个重要问题。因为CRP与磷酸胆碱或与其衍生物的结合需要Ca2+(Blacketal.,JournalofBiologicalChemistry,2004,279:48487；Thompsonetal.,Structure,1999,7(2):169-177)，现有技术中的一致意见是，在CRP与磷酸胆碱结合期间绝对避免提供Ca2+-螯合剂(参见例如WO90/12632)。因此，在CRP本文档来自技高网...

【技术保护点】
柠檬酸溶液用于从生物液体亲和色谱式移除CRP的用途，所述亲和色谱式移除通过用ω‑膦酰基氧基烷基铵基和/或用ω‑铵烷氧基‑羟基‑磷酰基氧基官能化的柱材料进行，其中所述柠檬酸溶液在从生物液体亲和色谱式移除CRP的情况下充当结合缓冲液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.12 EP 14192831.71.柠檬酸溶液用于从生物液体亲和色谱式移除CRP的用途，所述亲和色谱式移除通过用ω-膦酰基氧基烷基铵基和/或用ω-铵烷氧基-羟基-磷酰基氧基官能化的柱材料进行，其中所述柠檬酸溶液在从生物液体亲和色谱式移除CRP的情况下充当结合缓冲液。2.根据权利要求1的柠檬酸溶液的用途，其特征在于，所述ω-膦酰基氧基烷基铵基具有下述通式(I)其中n选自2和3；R1和R2彼此独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-C3H7，-C4H9，-C5H11，-C6H13，或R1和R2能够与它们与之结合的氮原子一起形成杂环，所述杂环选自：其中一个或多个氢原子能够被氟原子替换。3.根据权利要求1或2的柠檬酸溶液的用途，其特征在于，所述ω-铵烷氧基-羟基-磷酰基氧基具有下述通式(II)其中n选自2和3；R1，R2和R3彼此独立地选自：-H，-CH3，-C2H5，-C3H7，-C4H9，-C5H11，-C6H13,或R1和R2能够与它们与之结合的氮原子一起形成杂环，所述杂环选自：和R3选自：-H，-CH3，-C2H5，-C3H7，-C4H9，-C5H11，-C6H13，和优选地-H；其中一个或多个氢原子能够被氟原子替换。4.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·谢里夫，B·沃格特，S·马特科卡，
申请(专利权)人：彭特科尔有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE