一种定量确定微生物中表达的目的蛋白的表达情况的方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种定量确定微生物中表达的目的蛋白的表达情况的方法
本方法专利技术属于蛋白表达领域，涉及一种定量确定微生物中表达的目的蛋白的表达情况的方法。
技术介绍
在生物蛋白研发及生产过程中，都会涉及到蛋白表达情况的检测，包括可溶性目的蛋白的表达量，以及可溶性蛋白与包涵体的比例等等。而现如今大部分生物科研院所和生物公司，对蛋白表达情况的检测，主要是定性的检测，而且定性检测效果也不尽如意，比如，蛋白电泳结果不是很糊分不清，就是很淡看不见。严重影响对蛋白表达情况的本质把握，不能正确指导后续蛋白表达优化，蛋白放大生产和后续的蛋白分离纯化工作，从而造成时间,人力及资源的浪费。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术目的是提供一种操作简单方便，所用到的仪器设备都是生物实验室常用仪器。从定量的角度上来分析蛋白表达情况，解决现有问题，为后续蛋白表达优化，蛋白放大生产及分离纯化提供可靠依据的定量确定微生物中表达的目的蛋白的表达情况的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：一种定量确定微生物中表达的目的蛋白的表达情况的方法，对于一表达了目的蛋白的微生物菌液，总体积为V总ml,其在波长为60...
【技术保护点】
一种定性和定量确定目的蛋白在微生物中表达情况的方法，其特征在于，对于一表达了目的蛋白的微生物菌液，总体积为V总ml,其在波长为600nm的光照下的光吸收值OD600为A，从V总中取出的用于检测目的蛋白表达情况的菌液体积为V检ml。那么，取出的菌液经离心去上清液后，得到菌体沉淀，往菌体沉淀中加入的裂解缓冲液体积为40V检A ul。
【技术特征摘要】
1.一种定性和定量确定目的蛋白在微生物中表达情况的方法，其特征在于，对于一表达了目的蛋白的微生物菌液，总体积为V总ml,其在波长为600nm的光照下的光吸收值OD600为A，从V总中取出的用于检测目的蛋白表达情况的菌液体积为V检ml。那么，取出的菌液经离心去上清液后，得到菌体沉淀，往菌体沉淀中加入的裂解缓冲液体积为40V检Aul。2.如权利要求1所述的定性和定量确定目的蛋白在微生物中表达情况的方法，其特征在于，将所述体积为40V检Aul的含菌体沉淀的裂解缓冲液混匀，并用超声破碎仪将菌体破碎后，各取30ul的破菌液于两个1.5mlEP管中。其中一个EP1管中加入10ul的4*蛋白样品处理液，用于跑变性蛋白电泳的全菌液样品S全菌；另一个EP2管于高速离心机中离心，将离心后的上清液小心转入另一个新的EP3管中，并向EP3管中加入10ul的4*蛋白样品处理液，用于跑变性蛋白电泳的上清液样品S上清；已移除上清液的EP2管中所剩下的沉淀即为包涵体，往已移除上清液的EP2管中包涵体加入与上清液体积相同的裂解缓冲液30ul，并向EP2管中加入10ul的4*蛋白样品处理液，用于跑变性蛋白电泳的包涵体样品S包涵体。3.如权利要求2所述的定性和定量确定目的蛋白在微生物中表达情况的方法，其特征在于，所述S全菌，S上清，S包涵体，按同样方法制得的不含目的蛋白的全菌液样品S阴性和已知蛋白浓度的纯蛋白S定量连同蛋白Maker一起跑变性蛋白电泳，上样量都为V上样ul。根据蛋白电泳胶图结果，可看出目的蛋白在上清液和包涵体中的大致分布，目的蛋白是在上清液中多，还是在包涵体中更多，此即为定性。通过凝胶成像系统分析蛋白电泳胶图，可得出S全菌，S上清，S包涵体中各自目的蛋白的量与S定量中已知蛋白量的比例，从而得到上样...
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