一种利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用表面羧基修饰磁球固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法。该方法采用表面羧基修饰的磁球为载体，利用EDC/NHS法共价固定化芳香化酶。固定化酶在37℃下的热稳定性以及在4℃下的保存稳定性较游离酶有很大提高，解决了芳香化酶在使用以及保存过程中易失活的弱点，且磁球的引入使得酶在参加反应后通过借助磁场可以快速方便的回收再利用。随后，利用固定化酶对雷公藤植物中各化合物单体进行了潜在抑制剂筛选，在所建筛选体系条件下测试发现雷公藤红素与芳香化酶具有亲和结合能力，其IC50达到23.625μg/mL。该固定化酶在医药研究领域具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法
本专利技术涉及一种利用表面羧基修饰磁球固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法，具体利用的技术为利用固定化芳香化酶，筛选潜在的芳香化酶抑制剂，属于酶学及酶工程领域。
技术介绍
芳香化酶(aromatase，又名CYP19)是体内雌激素合成的关键酶，属于细胞色素P450酶系中的一种，它在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的帮助下，可以将雄烯二酮与睾酮的A环芳香化，分别转化为雌酮与雌二醇；在体内，雌激素能够促进乳腺癌细胞的增殖，芳香化酶是雌激素依赖型乳腺癌治疗的一个重要靶点，尤其是对于绝经后妇女，其体内的雌激素主要由周围组织的雄激素转化而来，使用芳香化酶抑制剂已经成为治疗的重要手段，一些药物已逐渐上升为一线药物，如：依西美坦，来曲唑等；但是其在带来治疗作用的同时，会对骨骼系统产生如骨丢失等副作用；因此，寻找高效、低毒的潜在芳香化酶抑制剂已经成为近年来的研究热点。对已有芳香化酶抑制剂进行结构改造或者从天然产物中寻找潜在的活性化合物是芳香化酶抑制剂筛选的一种重要手段；最早的体外筛选体系中主要采用胎盘微粒体作为酶源，以雄烯二酮或者睾酮作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一：合成载体的母体四氧化三铁微球，进行表面功能化修饰得表面羧基修饰磁球。步骤二：利用步骤一中的表面羧基修饰磁球作为载体，固定化芳香化酶。步骤三：利用高效液相色谱法检测温孵反应体系中的固定化芳香化酶酶活力。步骤四：建立以液质联用法为检测手段的固定化芳香化酶抑制剂筛选模型。步骤五：利用步骤四中的筛选模型，筛选芳香化酶抑制剂。步骤六：抑制剂抑制效果的评价。

【技术特征摘要】
1.一种利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一：合成载体的母体四氧化三铁微球，进行表面功能化修饰得表面羧基修饰磁球。步骤二：利用步骤一中的表面羧基修饰磁球作为载体，固定化芳香化酶。步骤三：利用高效液相色谱法检测温孵反应体系中的固定化芳香化酶酶活力。步骤四：建立以液质联用法为检测手段的固定化芳香化酶抑制剂筛选模型。步骤五：利用步骤四中的筛选模型，筛选芳香化酶抑制剂。步骤六：抑制剂抑制效果的评价。2.根据权利要求1所述，利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法，其特征在于，步骤一中利用溶剂热法合成四氧化三铁微球母体。母体表面包覆二氧化硅层的方法为Stober法。硅烷偶联剂为3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)或3-氨丙基三甲氧基硅烷(APTMS)。羧基修饰剂为丁二酸酐或戊二酸酐。3.根据权利要求1所述，利用表面羧基修饰磁球制备固定化酶筛选芳香化酶抑制剂的方法，其特征在于，步骤二中，固定化方法为碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)共价固定法。羧基活化剂为EDC·HCl和NHS或者EDC·HCl和sulfo-NHS。EDC与NHS的摩尔浓度比值为1∶2-3∶8。所用芳香化...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏梦翔，张倩，柏印，狄斌，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32