具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽及制备方法和应用。所述牦牛骨蛋白肽为牦牛骨蛋白经过复合蛋白酶分步酶解的酶解物制得；所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶。本发明专利技术所述的牦牛骨蛋白肽具有优异的ACE抑制功能，ACE抑制活性(IC50值)小于0.32mg/mL，可以作为ACE抑制剂应用于特需食品和营养食品中。本发明专利技术的牦牛骨蛋白肽制备方法简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。

Yak bone protein peptide with ACE inhibiting function, preparation method and Application

The invention provides a yak bone protein peptide with ACE inhibiting function, a preparation method and an application thereof. The yak bone protein peptide is made up of the enzymolysis protein of yak bone protein through complex protease and step-by-step enzymolysis, and the composite protease is alkaline protease, papain, trypsin and flavor protease. Yak bone peptide of the invention has excellent ACE inhibitory function, ACE inhibitory activity (IC50 value) is less than 0.32mg/mL, can be used as ACE inhibitors used in special food and nutrition food. The preparation method of the yak bone protein peptide of the invention is simple, and no acid or alkali is added to adjust the pH during the whole processing process, and the product has better functional characteristics and is easy to realize industrial production.

【技术实现步骤摘要】
具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽及制备方法和应用
本专利技术涉及动物食品加工领域，更具体地，涉及一种具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽及制备方法和应用。
技术介绍
高血压是对人类健康危害极大的一种疾病，潜伏期长。高血压的早期阶段，一般没有明显不适症，直至发生临床迹象心脏病发作、脑血管破裂而导致死亡。血管紧张素转化酶(AngiotensinIconvertingenzyme，ACE)为肾素-血管紧张素系统的关键酶。血管紧张素原在肾素的作用下转化为血管紧张素I，血管紧张素I在ACE的作用下转化为血管紧张素II，刺激血管收缩，造成血压上升。抑制ACE的活性对降低血压有着积极的作用，因而开发有效的ACE抑制剂引起人们的极大关注。虽然来源于食物的ACE抑制肽比人工合成的ACE抑制剂作用弱，但是它有其独特的优点，不会产生降压过度的问题，安全性高，无副作用，除降压功能外，往往同时具有免疫促进、易消化吸收等功能。由于药物疗法存在副作用，天然食物中的降血压功能因子的开发利用将成为今后高血压非药物治疗的重要部分。现有技术中有利用鱼类资源或蛤类制备ACE抑制肽的方法，如中国专利CN106399435A公开了一种利用鱼鳞制备ACE抑制肽的方法，该方法包括将鱼鳞水洗去杂质后，用NaCl溶液浸泡1-2天，脱除杂蛋白和鱼银粉，将鱼鳞捞出后再用HCl溶液、料液比1:10-1:20，浸泡1-2h，以脱除钙盐等无机盐；将鱼鳞用蒸馏水浸泡溶胀，接着用碱性蛋白酶酶解，然后离心，上清液为酶解液，将酶解液冷冻干燥得到ACE抑制肽；所得到的产品ACE抑制率较高，与化学合成的ACE抑制肽相比，制备的ACE抑制肽安全无毒、易于消化；如中国专利CN104593466A公开了一种利用内源酶制备蓝蛤蛋白源ACE抑制肽的方法，该方法利用蓝蛤体内的内源性蛋白酶进行酶解，通过自溶获得天然ACE抑制肽，制备过程中不加入任何外源蛋白酶，整个制备过程包括新鲜蓝蛤预处理、匀浆、内源酶激活、酶争、灭酶、脱腥、离心、冷冻干燥；也有报道采用罗非鱼鱼皮及植物蛋白为原料生产ACE抑制肽，如中国专利CN101240312A公开了一种源于鱼皮的ACE抑制肽的制备方法，该方法实现罗非鱼废弃物的综合利用，具体以罗非鱼鱼皮为原料，水提罗非鱼鱼皮中的鱼皮蛋白，采用蛋白酶进行水解，经灭酶、脱苦、脱色、脱味、过滤、离子交换和浓缩等工序得到鱼皮蛋白酶解液(TSP-1)，将TSP-1超滤处理后，再经凝胶层收集高活性组分，冷冻干燥制得高活性的ACE抑制肽产品；中国专利CN104131055A公开了一种藻红蛋白ACE抑制肽的制备方法，该方法包括藻红蛋白的提取步骤，加入胃蛋白酶酶解再加入胰蛋白酶酶解；将酶解后的冻干粉溶于纯水，上样于SephadexG-15凝胶柱，收集活性最高峰为藻红蛋白ACE抑制组分。将所述组分继续上样于高效液相色谱ZORBAX300SB-C18柱进行分离，以检测该组分中藻红蛋白ACE抑制肽制备，该专利技术的方法可以避免活性肽经人体摄入后被胃肠道消化液降解而失活，同时缩减了成本。但这些制备方法中通常采用通过添加酸、碱调节pH,影响产品的品质，同时对蛋白肽的主要组成不明确。我国牦牛骨资源丰富，目前国内外专利中未见利用牦牛骨蛋白资源制备血管紧张素转化酶抑制肽的专利文献报道。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽及其制备方法和应用。为了实现本专利技术的目的，本专利技术一方面提供了一种具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽，该牦牛骨蛋白肽为牦牛骨蛋白经过复合蛋白酶分步酶解的酶解物制得；其中，复合蛋白酶为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶。使用本专利技术特定的复合蛋白酶对牦牛骨蛋白分布酶解，得到的肽具有ACE抑制活性，合理地且有效地利用了牦牛骨蛋白。为了得到较纯的牦牛骨蛋白肽，使用上述复合蛋白酶的分布酶解优选包括以下步骤：调节牦牛骨蛋白液中蛋白含量为8-10wt％，按照牦牛骨蛋白液中蛋白重量0.4～1.0wt％的重量百分比加入复合蛋白酶进行分步酶解。为了提高得到的牦牛蛋白肽的抑制活性，在本专利技术一个优选实施方式中，使用上述复合蛋白酶分布酶解具体包括以下步骤：第一步酶解反应：向蛋白重量8-10wt％的牦牛骨蛋白液中加入0.2～0.5wt％第一复合蛋白酶，在50～60℃条件下进行酶解反应0.5～1.5h，其中，第一复合蛋白酶为碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶；第二步酶解反应：向第一步酶解反应产物中加入0.2～0.5wt％第二复合蛋白酶，在45～55℃条件下进行酶解反应1.0～2.0h，其中，第二复合蛋白酶为胰蛋白酶和风味蛋白酶。在本专利技术一个优选实施方式中，第一复合蛋白酶中碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比为1～2:1。在本专利技术一个优选实施方式中，第二复合蛋白酶中胰蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为1:1～2。为了进一步提高得到的牦牛蛋白肽的抑制活性，在本专利技术一个优选实施方式中，牦牛骨蛋白肽的制备方法包括如下步骤：1)牦牛骨蛋白液的制备；2)将步骤1)制得的牦牛骨蛋白液经过复合蛋白酶分步酶解；3)将步骤2)酶解后的产物除杂、膜分离、凝胶分离以及反相HPLC分离，浓缩，冷冻干燥后即得。该制备方法中不添加任何酸和碱。在本专利技术一个优选实施方式中，步骤1)中还包括将制得的牦牛骨蛋白液在75-85℃下，经频率为80-100kH的超声波超声处理15-25分钟。在该条件下，可以有效地改变牦牛骨胶原蛋白的组织结构，利用在该温度下特定的频率超声波技术处理的牦牛骨蛋白液，可以明显改善牦牛骨蛋白对酶的敏感性，有效地降低酶的使用量。在步骤3)中，可以使用本领域中通用的除杂方法，为了得到抑制活性更好的多肽，在本专利技术一个优选实施方式中，步骤3)中的除杂具体为：在90～95℃下保温10～20分钟，冷却至室温，加入酶解液重量0.2-0.6wt％的活性炭于酶解液中，通过硅藻土进行分离，收集分离液。在该优选实施方式中，通过使用活性炭除杂，使得蛋白肽具有良好的风味和色泽，能广泛应用于特需食品、药物以及营养食品中。为了使得到的牦牛骨蛋白液的抑制效果更好，步骤3)中膜分离可以具体为：步骤3)中膜分离具体可以为：将除杂后的产物通过两步超滤方法进行处理，先后利用孔径为5000道尔顿的膜和孔径为3000道尔顿的膜进行超滤。进一步优选地，膜分离的步骤为：将得到的分离液通过二步超滤方法进行处理，利用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于5000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来。在本专利技术一个优选实施方式中，步骤3)中凝胶分离和反相HPLC可以为：将膜分离后的产物经过SephadexG-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到牦牛骨蛋白肽粗品；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中16-18分中的肽洗脱液。将所得到的肽洗脱液浓缩，冷冻干燥，即可得到本专利技术最优选的牦牛骨蛋白肽。本专利技术的牦牛骨蛋白肽的ACE抑制活性(IC50值)小于0.32g/mL，当蛋白肽的浓度为1.0mg/mL时，ACE抑制率可达80％以上，优选90％以上。本专利技术从牦牛本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽，其特征在于，所述牦牛骨蛋白肽为牦牛骨蛋白经过复合蛋白酶分步酶解的酶解物制得；所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶。

【技术特征摘要】
1.一种具有ACE抑制功能的牦牛骨蛋白肽，其特征在于，所述牦牛骨蛋白肽为牦牛骨蛋白经过复合蛋白酶分步酶解的酶解物制得；所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶。2.根据权利要求1所述的牦牛骨蛋白肽，其特征在于，所述牦牛骨蛋白肽的制备方法包括如下步骤：1)牦牛骨蛋白液的制备；2)将步骤1)制得的牦牛骨蛋白液经过复合蛋白酶分步酶解；3)将步骤2)酶解后的产物除杂、膜分离、凝胶分离以及反相HPLC分离，浓缩，冷冻干燥后即得。3.根据权利要求1或2所述的牦牛骨蛋白肽，其特征在于，所述复合蛋白酶分步酶解包括以下步骤：第一步酶解反应：向蛋白重量8-10wt％的牦牛骨蛋白液中加入0.2～0.5wt％第一复合蛋白酶，在50～60℃条件下进行酶解反应0.5～1.5h，其中，第一复合蛋白酶为碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶；第二步酶解反应：向第一步酶解反应产物中加入0.2～0.5wt％第二复合蛋白酶，在45～55℃条件下进行酶解反应1.0～2.0h，其中，第二复合蛋白酶为胰蛋白酶和风味蛋白酶。4.根据权利要求2所述的牦牛骨蛋白肽，其特征在于，所述步骤1)中还包括将制得的牦牛骨蛋白液在75-85℃下，经频率为80-100kH的超声波超声处理15-25分钟。5.根据权利要求2所述的牦牛骨蛋白肽，其特征在于，所述步骤3)中除杂具体为：在90～95℃下保温10～20分钟，冷却至室温，加入酶解液重量0.2-0.6wt％的活性炭于酶解液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，罗永康，
申请(专利权)人：安徽国肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34