用于两向RPLC-SFC色谱的系统和方法技术方案

提供了用于分离和/或分析有机化合物的复杂混合物的两向色谱系统和方法。具体地，描述了两向反相液相色谱(RPLC)‑超临界流体色谱(SFC)系统，其包括在界面上采集从第一方向色谱中洗脱的分析物、同时使得RPLC流动相通过的捕集柱。来自RPLC维度柱(dimension column)的感兴趣的峰被有效地聚焦为捕集柱上的尖锐浓度脉冲，随后将被注入到第二维度SFC柱上。该系统可用于药物化合物的同时非手性和手性分析。第一维度RPLC分离提供非手性纯度结果，且第二维度SFC分离提供手性纯度结果(对映体过量)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于两向RPLC-SFC色谱的系统和方法相关申请的交叉参考本申请要求2014年10月27日提交的美国临时专利申请号62/069,219的优先权，将该文献的公开内容以其完整的形式并入本文作为参考。专利
本专利技术涉及用于正交分离和分析化合物的混合物的多维色谱系统和方法。公开了示例性的两向反相液相色谱-超临界流体色谱系统及其使用方法。专利技术背景色谱法广泛应用于分离和分析化合物的混合物。由于单向色谱法的峰容量限制，所以已经专利技术了具有增加的峰容量的多维色谱系统用于分析复杂的样品。两向(2D)色谱技术尤其是在分析复杂的混合物中已经成为极为普遍的。与单向(1D)色谱法相比，2D色谱技术具有更高的选择性和分辨能力，推定保留机制是互补的。当各个分离的选择性独立时(正交)，实现了在两向分离系统中的最大峰容量，使得在单向中难以分辨的成分可以在第二维度上得到完全分辨。如果正交分离机制用于两向，则该系统的理论峰容量为各个峰容量的乘积。参见Giddings，J.C.Ana1.Chem.1984，56：1258A；Giddings，J.C.：Cortes，H.J.(Ed.)，MultidimensionalChromatogra-phy：Techniques和Applications，MarcelDekker，NewYork1990，p.1；Jandera，P.等人，Chromatographia2004，60：S27。然而，对于2D色谱在灵敏度和溶剂兼容性方面存在一些限制。例如，从第一维度上携带的流动相通常产生对第二维度的干扰，由此限制了第二维度的分离能力。用于第一维度和第二维度的溶剂的不兼容性可以导致严重的带分散或增宽和峰衰退，由此对界面设计提出了巨大的挑战。Tian，H.，等人，J.Chromatogr.A2006，1137：42。为了缓解溶剂的不混溶性担忧，研究人员已经研发了几种在两个维度上使用兼容性流动相的2D系统。一些实例包括如下：2D反相液相色谱(RPLCxRPLC)(Venkatramani，C.J.等人，J.Sep.Sci.2012，35：1748；Zhang，J.等人，J.Sep.Sci.2009，32：2084；Song，C.X.等人，Ana1.Chem.2010，82：53；Liu，Y.M.等人，J.Chromatogr.A2008，1206：153)、2D亲水性相互作用液相色谱(HILICxRPLC)(Liu，Y.M.等人，J.Chromatogr.A2008，1208：133；Wang，Y.等人，Ana1.Chem.2008，80：4680；Louw，S.等人，J.Chromatogr.A2008，1208：90)、2D正相液相色谱x超临界流体色谱(NPLCxSFC)(Gao，L.等人，J.Sep.Sci.2010，33：3817)和2DSFCxSFC(Zeng，L.等人，J.Chromatogr.A2011，1218：3080；Lavison，G.等人，J.Chromatogr.A2007，1161：300；Hirata，Y.等人，J.Sep.Sci.2003，26：531；Okamoto，D.等人，Ana1.Sci.2006，22：1437；Guibal，P.等人，J.Chromatogr.A2012，1255：252)。Anderer等人的US2013/0134095公开了2DLC系统和方法，它们尝试通过控制与第二LC状态相关的将第一LC的输出量注入第二LC的注射结果来进一步减少第一LC对第二LC的干扰。偶联不兼容性“正相”和“反相”维度的一种技术是2DSFCxRPLC(Francois，I.等人，J.Sep.Sci.2008，31：3473-3478；Francois，I.和Sandra，P.J.Chromatogr.A2009，1216：4005)。在这种情况中，SFC级分中的非极性超临界二氧化碳被蒸发掉(此时暴露于大气压下)，得到与第二RPLC维度具有兼容性流动相的级分(通常是醇调节剂)。Francois，I.等人的SFCxRPLC系统采用用于第一维度SFC单元与第二维度RPLC单元之间的界面的2-位/10-孔口切换阀。该系统在界面上采用填充环路以防止从SFC柱上洗脱下的分析物被CO2蒸气压迫入废物管线和水被导入所述环路以减少第二维度中残留CO2气体的干扰。Cortes和合作者(J.Microcol.Sep.1992，4：239-244；和美国专利US5,139,681)描述了2DLCxSFC系统，其包括样品进入毛细管，其中来自第一维度LC的挥发性溶剂被通道的氮气消除，遗留洗脱的分析物的沉积物，然后其被CO2流动相吸附用于第二维度SFC。然而，用通道的氮气消除溶剂对于采用水性流动相的RPLC而言不切实际。仍然需要用于分离和分析复杂样品的有效的色谱系统和方法，其中有利地进行第一维度RPLC和第二维度SFC分离。专利技术概述公开了用于分离和/或分析复杂有机化合物的混合物的多维色谱系统和方法，例如，两向反相液相色谱(RPLC)-超临界流体色谱(SFC)系统，特别是RPLC×SFC系统，其包括能够保留从RPLC柱上洗脱下的分析物、同时使RPLC流动相通过的界面，由此减少了SFC柱上携带的RPLC溶剂的量。在一个方面，提供了用于分离样品的色谱系统，包含：(i)第一分离单元，包含：a)第一泵组件，用于驱动第一流动相通过第一分离单元，b)用于将样品导入第一分离单元的加样注射器，和c)反相液体色谱(RPLC)柱；(ii)第二分离单元，包含：a)用于驱动第二流动相通过第二分离单元的第二泵组件，和b)超临界流体色谱(SFC)柱；和(iii)包含多个试样环管的第一流体传送路线单元，所述第一流体传送路线单元连接至第一分离单元和第二分离单元，其中多个试样环管中的至少一个包含捕集柱，所述捕集柱包含固定相；并且其中所述色谱系统被配置用于首先分离所述第一分离单元中的样品，并随后将从RPLC柱洗脱的样品的至少一部分导入第二分离单元。在一些实施方案中，该系统还包含用于第一分离单元和/或第二分离单元的检测器。该系统还可以包含可操作地连接至系统组件中的一个或多个的一个或多个控制装置。在一些实施方案中，2DRPLCxSFC系统包含第一流体传送路线单元，其包含两个试样环管；其中两个试样环管中的一个与第一分离单元流体连通，并且两个试样环管中的另一个与第二分离单元流体连通。在一些实施方案中，第一流体传送路线单元包含三个或更多个试样环管，并且其中试样环管的一个或多个与第一分离单元和第二分离单元流体隔离。在一个变型中，与第一分离单元和第二分离单元流体隔离的至少一个试样环管包含装载有固定相材料的捕集柱。在一些实施方案中，第一流体传送路线单元被配置为允许逆流洗脱保留在捕集柱中的分析物。在一些实施方案中，第一流体传送路线单元被配置为允许保留在捕集柱中的分析物的并流洗脱。在一些实施方案中，2DRPLCxSFC系统包含第二分离单元，其包含一个SFC柱，以及任选地位于SFC柱上游的聚焦柱(focuscolumn)。在一些实施方案中，第二分离单元包含SFC柱的平行阵列，它们各自任选地包含位于SFC柱上游的聚焦柱。还提供了使用本文所述的色谱系统的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于分离样品的色谱系统，其包含：第一分离单元，其包含：a)用于驱动第一流动相通过第一分离单元的第一泵组件；b)用于将样品导入到第一分离单元的加样注射器；和c)反相液相色谱(RPLC)柱；第二分离单元，其包含：a)用于驱动第二流动相通过第二分离单元的第二泵组件；和b)超临界流体色谱(SFC)柱；和包含多个试样环管的第一流体传送路线单元，所述第一流体传送路线单元连接至第一分离单元和第二分离单元，其中所述多个试样环管中的至少一个包含捕集柱，所述捕集柱包含固定相；且其中该色谱系统被配置用于首先分离第一分离单元中的样品，然后将从第一分离单元的RPLC柱洗脱的样品的至少一部分导入第二分离单元。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.27 US 62/069,2191.用于分离样品的色谱系统，其包含：第一分离单元，其包含：a)用于驱动第一流动相通过第一分离单元的第一泵组件；b)用于将样品导入到第一分离单元的加样注射器；和c)反相液相色谱(RPLC)柱；第二分离单元，其包含：a)用于驱动第二流动相通过第二分离单元的第二泵组件；和b)超临界流体色谱(SFC)柱；和包含多个试样环管的第一流体传送路线单元，所述第一流体传送路线单元连接至第一分离单元和第二分离单元，其中所述多个试样环管中的至少一个包含捕集柱，所述捕集柱包含固定相；且其中该色谱系统被配置用于首先分离第一分离单元中的样品，然后将从第一分离单元的RPLC柱洗脱的样品的至少一部分导入第二分离单元。2.权利要求1的色谱系统，其中第一流体传送路线单元包含两个试样环管；其中两个试样环管中的一个与第一分离单元流体连通，并且两个试样环管中的另一个与第二分离单元流体连通。3.权利要求1的色谱系统，其中第一流体传送路线单元包含至少三个试样环管，并且其中试样环管的至少一个与第一分离单元和第二分离单元流体隔离。4.权利要求3的色谱系统，其中至少一个包含固定相材料的试样环管与第一分离单元和第二分离单元流体隔离。5.权利要求1的色谱系统，其中第一流体传送路线单元包含多个捕集柱，每个捕集柱均位于试样环管中。6.权利要求1-5任一项的色谱系统，其中第一流体传送路线单元被配置为当所述试样环管位于与第一分离单元流体连体连通时允许流体沿第一方向流过试样环管，并且当所述试样环管位于与第二分离单元流体连通时，允许流体沿着与第一方向相反的方向流过所述试样环管。7.权利要求1-5任一项的色谱系统，其中第一流体传送路线单元被配置为当所述试样环管位于与第一分离单元流体连通时，允许流体沿第一方向流过试样环管，并且当所述试样环管位于与第二分离单元流体连通时，允许流体沿与第一方向相同的方向流过所述试样环管。8.权利要求1-7任一项的色谱系统，其中RPLC柱包含反相固定相。9.权利要求8的色谱系统，其中反相固定相包含C-18相。10.权利要求8或9的色谱系统，其中捕集柱中的固定相包含反相材料。11.权利要求9的色谱系统，其中反相材料包含C-18相。12.权利要求1-11任一项的色谱系统，其中第二分离单元包含一个SFC柱。13.权利要求的色谱系统12，其中SFC柱包含正相固定相。14.权利要求13的色谱系统，其中正相固定相包含硅胶。15.权利要求1-14任一项的色谱系统，其中第二分离单元还包含位于SFC柱上游的聚焦柱。16.权利要求15的色谱系统，其中聚焦柱包含反相材料。17.权利要求1-11任一项的色谱系统，其中第二分离单元包含：a)一列SFC柱，其中该阵列中的SFC柱以平行结构排列；和b)第二流体传送路线单元，用于将第二流动相的流体引导至所述阵列中的预先鉴定的SFC柱。18.权利要求17的色谱系统，其中第二分离单元还包含位于SFC柱阵列中每个SFC柱上游的聚焦柱。19.权利要求1-18任一项的色谱系统，还包含位于RPLC柱下游的第一检测器。20.权利要求1-19任一项的色谱系统，还包含位于SFC柱下游的第二检测器。21.权利要求1-20任一项的色谱系统，还包含至少一个控制装置，其可操作地连接至以下的一个或多个：a)第一泵组件；b)加样注射器；c)第一检测器；d)第一流体传送路线单元；e)第二泵组件；和f)第二检测器。22.用于分离样品的方法，其包含以下步骤：(i)在捕集柱上俘获至少一部分样品，所述部分通过反相液相色谱(RPLC)分离样品获得，所述捕集柱包含固定相；和(ii)通过超临界流体色谱(SFC)将俘获在捕集柱上的样品的部分进行进一步分离。23.权利要求22的方法，还包含用反相液相色谱分离样品，包含：(i)将样品导入第一流动相中；(ii)驱动包含样品的第一流动相通过RPLC柱；和(iii)在RPLC柱上分离样品。24.权利要求23的方法，还包含在通过RPLC柱之后检测在第一流动相中样品的成分的存在。25.权利要求22-24任一项的方法，还包含将捕集柱上俘获的样品的部分从捕集柱洗脱掉。26.权利要求22-25任一项的方法，还包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·阿尔萨耶，C·文卡塔拉曼尼，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH