一种血液透析器上吸附蛋白的分析方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种血液透析器上吸附蛋白的分析方法
本专利技术临床蛋白质分析方法，具体的说是一种血液透析器上吸附蛋白的分析方法及其应用。
技术介绍
血液透析(hemodialysis,HD)，是ESRD患者最主要的治疗方式之一，因此关于HD所涉及的问题，如HD并发症的预防和处理，透析充分性评估，维持性血液透析(maintanancehemodialysis,MHD)患者的预后及生存质量等方面都被人们广泛关注。透析器作为HD的核心装置，从许多方面影响着HD的效果，进而对MHD患者产生重要影响。虽然现在使用的大部分透析膜是生物相容性较好的人工合成膜，但作为生物膜材料，当其与血液接触后，由于蛋白吸附，必定会引发机体多种生物、生化反应的发生，进而引起一系列透析综合症，因此对不同透析膜表面吸附蛋白进行定性及相对定量分析，不仅能够揭示膜材料与血液接触的蛋白吸附机理、辅助膜材料的改进，甚至还可以辅助医生进行治疗。蛋白质的分离及鉴定技术作为蛋白质组学的重要研究方法，一直在不断的更新与发展。在蛋白质分离技术方面，既往应用广泛的二维凝胶电泳法因其操作繁琐、受组间差异影响大、鉴定疏水性蛋白质和低丰度蛋...
【技术保护点】
一种血液透析器上吸附蛋白的分析方法，其特征在于：使用离子液体清洗透析后血液透析器，并将样品转移至蛋白浓缩膜上，并通过基于离子液体的膜辅助样品制备技术对血液透析器上吸附蛋白质组进行样品前处理，并进一步进行定性分析；利用准等重二甲基化定量对透析前后的血浆进行血浆蛋白质组定量分析；血液透析器的使用者和透析前后的血浆提供者为同一患者或个体。
【技术特征摘要】
1.一种血液透析器上吸附蛋白的分析方法，其特征在于：使用离子液体清洗透析后血液透析器，并将样品转移至蛋白浓缩膜上，并通过基于离子液体的膜辅助样品制备技术对血液透析器上吸附蛋白质组进行样品前处理，并进一步进行定性分析；利用准等重二甲基化定量对透析前后的血浆进行血浆蛋白质组定量分析；血液透析器的使用者和透析前后的血浆提供者为同一患者或个体。2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述的离子液体为含长烷基链的离子液体；阳离子部分为：含4-20个碳烷基链的咪唑类阳离子、含4-20个碳烷基链的吡啶类阳离子、含4-20个碳烷基链的季铵类阳离子或者含4-20个碳烷基链的季鏻类阳离子中一种或二种以上；阴离子部分为：Cl-、Br-、I-、NO3-、ClO4-、AlCl4-、BF4-、PF4-、CF3COO-、CF3SO3-、(CF3SO2)2N-或SbF6-中一种或二种以上；所述使用离子液体清洗透析后血液透析器的过程为：用离子液体注入血液透析器，对透析膜上蛋白进行洗脱，注满离子液体至透析膜所在腔体，室温下保存4-16个小时，使离子液体与透析膜充分接触。3.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述基于离子液体的膜辅助样品制备是指：在具有蛋白质截留功能的蛋白浓缩膜上进行，蛋白浓缩膜下方设有收集管，可以收集洗脱溶液和蛋白酶解后的肽段；具体过程为:用PBS溶液润洗截留分子量为3000-20000的用于蛋白质截留的蛋白浓缩膜，然后2000-40000r/min离心，通过蛋白质浓缩膜下收集管收集洗脱液；将用离子液体洗脱的吸附蛋白转移至浓缩膜上，然后用2000-40000r/min离心，然后加入新的PBS溶液，然后用2000-40000r/min离心，重复“加新的PBS溶液-离心”的步骤3次以上，以达到冲洗净离子液体的目的；充分洗净离子液体后，于每个样品中加入1M二硫苏糖醇(以下简写为DTT)溶液，并于70-100℃水浴锅中保存3-30分钟，然后在每个样品加入新的PBS溶液，然后用2000-40000r/min离心，重复“加新鲜PBS溶液-离心”的步骤3次以上，以达到冲洗净DTT的目的；每个样品加入20Mm碘代乙酰胺(以下简写为IAA)室温避光保存30-60分钟以对蛋白烷基化；然后在每个样品加入新鲜PBS溶液，然后用2000-40000r/min离心，重复“加新鲜PBS溶液-离心”的步骤2次以上，更换浓缩膜下收集管，并在每个样品中加入蛋白酶以酶解膜上蛋白，于30-60℃水浴锅中孵育4-20个小时；将充分酶解后的样品，加入1×PBS冲洗浓缩膜，用2000-40000r/min离心收集；应用C18反相预柱对样本进行除盐，并进行后续蛋白质组定性分析。4.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述的利用准等重二...
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，杨开广，刘健慧，赵群，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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