用于生物分子的基于质谱的表征的方法技术

本发明专利技术揭示离子‑离子反应化学方法的应用，其中使用质子转移反应PTR与较高碰撞能量解离HCD组合以：(1)简化引入到质谱仪中的样本的复杂混合物分析，以及(2)通过移除电荷、减小碰撞横截面并且在若干情况中增强所获得的序列覆盖度来改进用于超过50kDa的大蛋白质的分析的分辨率和敏感度。

【技术实现步骤摘要】
用于生物分子的基于质谱的表征的方法
本专利技术涉及质谱法，并且更确切地说涉及用于通过从蛋白质、多肽和其它生物相关多电荷物质产生的质子转移反应产物离子的质谱法来纯化和分析蛋白质或多肽的复杂混合物的方法以及将这些方法应用于获得用于生物物质的识别和定量所必需的基于序列的信息。
技术介绍
在最近二十年，质谱法已经在分析从多种不同样本类型导出的蛋白质样本方面取得了极大进展。结合电喷射电离和各种分离技术，可识别和定量单一样本中的数千蛋白质。当今实验室中使用的最常见的方法涉及某一形式的蛋白质提取，继之以所关注的蛋白质样本的蛋白水解分解。类似于胰蛋白酶的蛋白水解酶的使用产生可容易地由多种不同仪器配置分析的肽。被称为“从下到上”蛋白质组研究的此方法可用于研究活细胞依据其环境的状态。“从下到上”方法的主要优点之一是所产生的肽具有极其类似的生理化学性质，这有助于复杂样本中数千肽的直截了当的分离。结合串连质谱法的任何分离方法可随后用于产生用以识别给定样本中的蛋白质的氨基酸序列信息。尽管此技术是许多实验室中的例程，但当将完整蛋白质还原到其组成肽时存在关于可获得的信息的量的限制。与“从下到上”蛋白质组研究相比，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于识别液体样本内的蛋白质或多肽分析物化合物的存在或不存在的方法，所述液体样本包括化合物的混合物，所述混合物包含多种蛋白质化合物或多种多肽化合物或多种蛋白质和多肽化合物，所述方法包括：(a)从用户或数据文件接收包括具有zp加合质子的所述蛋白质或多肽分析物化合物的分子的离子的质荷比(m/z)p和电荷态zp的值；(b)在质谱仪的离子源中通过电喷射电离形成所述液体样本的所述部分的化合物的所述混合物的带正电离子，所述带正电离子包括多个离子物质；(c)隔离包括包含所述所接收的m/z值的m/z范围的所述离子物质的子集；(d)通过在离子阱中致使离子物质的所述隔离的第一子集与反应剂化合物的阴离子反应而从离...

【技术特征摘要】
2016.01.14 US 62/278,9421.一种用于识别液体样本内的蛋白质或多肽分析物化合物的存在或不存在的方法，所述液体样本包括化合物的混合物，所述混合物包含多种蛋白质化合物或多种多肽化合物或多种蛋白质和多肽化合物，所述方法包括：(a)从用户或数据文件接收包括具有zp加合质子的所述蛋白质或多肽分析物化合物的分子的离子的质荷比(m/z)p和电荷态zp的值；(b)在质谱仪的离子源中通过电喷射电离形成所述液体样本的所述部分的化合物的所述混合物的带正电离子，所述带正电离子包括多个离子物质；(c)隔离包括包含所述所接收的m/z值的m/z范围的所述离子物质的子集；(d)通过在离子阱中致使离子物质的所述隔离的第一子集与反应剂化合物的阴离子反应而从离子物质的所述隔离的第一子集产生多个第一代产物离子物质，所述反应剂化合物的阴离子在反应后从包括蛋白质或多肽化合物的质子化分子物质的一或多个离子物质中的每一者提取质子，所述反应执行持续预定持续时间，在此期间，在与具有第二m/z的离子的运动频率匹配的频率下将补充振荡电压波形施加到离子阱的电极，所述第二m/z对应于具有(zp–n)加合质子的所述分析物化合物的分子，其中1≤n<zp；(e)隔离包括包含所述第二m/z的另一m/z范围的所述第一代产物离子物质的子集；(f)通过致使所述第一代产物离子物质的所述隔离的子集与所述反应剂化合物的额外阴离子反应持续第二预定持续时间而从离子物质的所述隔离的第一子集产生多个第二代产物离子物质；(g)通过将所述第二代产物离子物质中的两者或两者以上分段来产生多个片段离子物质；(i)使用所述质谱仪的质量分析器产生所述片段离子物质的质谱；以及(g)基于所述质谱中一或多个预定片段m/z值的所确定的存在或不存在识别所述样本内的所述分析物化合物的存在。2.一种用于识别液体样本内的蛋白质或多肽化合物的方法，所述液体样本包括化合物的混合物，所述混合物包含多种蛋白质化合物或多种多肽化合物或多种蛋白质和多肽化合物，所述方法包括：(a)在质谱仪的离子源中通过电喷射电离形成所述液体样本的所述部分的化合物的所述混合物的带正电离子，所述带正电离子包括多个离子物质；(b)使用所述质谱仪的质量分析器产生所述离子的质谱；(c)基于所述质谱中的可观测的特征挑选多个质荷比(m/z)范围；以及(d)针对所述所挑选的m/z范围中的每一者：(i)确定对应于所述相应所挑选的m/z范围中的质荷比(m/z)p处观察到的质谱线的电荷态zp，以及将质量值mp计算为mp＝(m/z)pxzp以及分子量MW＝[zpx(m/z)p]-zpxMproton，其中Mproton为AU中的质子的质量；(ii)隔离具有所述相应所挑选的m/z范围内的m/z值的所述离子物质的子集；(iii)通过在离子阱中致使离子物质的所述相应隔离的第一子集与反应剂化合物的阴离子反应而从离子物质的所述相应隔离的第一子集产生多个第一代产物离子物质，所述反应剂化合物的阴离子在反应后从包括蛋白质或多肽化合物的质子化分子物质的一或多个离子物质中的每一者提取质子，所述反应执行持续预定持续时间，在此期间，在与具有产物离子质荷比(m/z)2的的离子的运动频率匹配的频率下将补充振荡电压波形施加到所述离子阱的电极，所述产物离子质荷比(m/z)2由(m/z)2＝(mp–nMproton)/(zp–n)给定，其中n是整数使得1≤n<zp且Mproton为AU中的质子的质量；(iv)隔离包括包含所述产品离子质荷比(m/z)2的另一m/z范...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·M·麦吉，H·L·卡代西斯，
申请(专利权)人：萨默费尼根有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US