测定芦丁与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法技术
【技术实现步骤摘要】
测定芦丁与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法
本专利技术涉及分析化学中表面等离子体共振技术的应用方法，具体涉及一种用于测定芦丁与蛋白质相互作用结合水平的表面等离子体共振分析方法。
技术介绍
表面等离子体共振(surfaceplasmonresonance,SPR)技术是一种在分子间相互作用的分析领域中广泛使用的方法。其基本原理为利用入射光照射SPR传感芯片，使得入射光产生的倏逝波与传感芯片表面金属的表面等离子波发生共振，影响出射光的性质；此后在传感芯片表面发生相互作用反应，引起共振条件的变化，导致出射光性质发生变化，对其进行监测即可实现对相互作用反应的检测。在一般的SPR分析过程中，相互作用反应的一个参与物往往通过共价键、静电作用、疏水作用等等方式被固定于SPR检测芯片表面，然后将另一个(或几个)反应的参与物溶解后流动通过该检测芯片表面。当发生相互作用反应时，反应物的结合或解离将导致检测芯片的表面性质发生改变，反映为仪器信号的改变。SPR技术可以进行快速、灵敏、无标记的分析，经常被用于测定相互作用反应的速率常数、平衡常数等物理化学数据。芦丁(rutin)是一种...
【技术保护点】
一种测定芦丁与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法，包括以下步骤：1)对洁净的传感芯片进行表面羧基化修饰；2)筛选用于溶解目标蛋白的缓冲液的pH值；3)对传感芯片表面修饰的羧基进行活化；4)将目标蛋白溶解于步骤2)选定pH的缓冲液中，使之流经步骤3)活化的芯片表面，将目标蛋白共价结合到芯片上；5)配制芦丁浓度为c1、c2、…、ci的系列溶液，其中i为自然数；6)按浓度由稀至浓的顺序将步骤5)配制的芦丁溶液送入表面等离子体共振仪中，通过步骤4)处理后的传感芯片，记录每一个浓度为ci的芦丁溶液进样且信号稳定后的信号值Ri，同时，记录不含有芦丁但其他成分相同的对照溶液进样且信号...
【技术特征摘要】
1.一种测定芦丁与蛋白结合水平的表面等离子体共振分析方法，包括以下步骤：1)对洁净的传感芯片进行表面羧基化修饰；2)筛选用于溶解目标蛋白的缓冲液的pH值；3)对传感芯片表面修饰的羧基进行活化；4)将目标蛋白溶解于步骤2)选定pH的缓冲液中，使之流经步骤3)活化的芯片表面，将目标蛋白共价结合到芯片上；5)配制芦丁浓度为c1、c2、…、ci的系列溶液，其中i为自然数；6)按浓度由稀至浓的顺序将步骤5)配制的芦丁溶液送入表面等离子体共振仪中，通过步骤4)处理后的传感芯片，记录每一个浓度为ci的芦丁溶液进样且信号稳定后的信号值Ri，同时，记录不含有芦丁但其他成分相同的对照溶液进样且信号稳定后的信号值ri；7)数据分析：计算各个1/ci和1/(Ri-ri)，并以1/(Ri-ri)对1/ci作图，1/ci为横坐标，1/(Ri-ri)为纵坐标；对图中数据点进行线性拟合，所得方程的截距记为b，斜率记为a，则结合反应的平衡常数为b/a，单位为实验中所用浓度单位的倒数。2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，在步骤1)中，所述传感芯片为镀金玻璃片，使用由浓氨水、30％过氧化氢、水按体积比1:1:5混合而成的溶液进行清洁，然后以水洗净并干燥。3.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，在步骤1)对芯片进行表面羧基化修饰的方法是将芯片安装入表面等离子体共振仪，然后使用满足以下条件的溶液流通经过芯片表面：溶质为一种巯基取代的直链羧酸，其中巯基位于碳链远离羧基的另一个末端，碳链长度为含有三至二十碳原子，溶质浓度为2mmol/L至50mmol/L，溶剂为水和/或乙醇；流通过程中实时监测SPR信号，流通时间从进样后直到SPR信号不再变化为止，但至少为1分钟，溶液流速为0.1微升/分钟至1毫升/分钟。4.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，在步骤2)比较不同pH的蛋白溶液流经羧基修饰的芯片时SPR信号的变化：若在所尝试的几个pH值中，所使用的流通时间下，各溶液均使SPR信号达到稳定，则选择稳定后信号与基线相差最大的溶液的pH；若在使用的流通时间下各溶液均未使信号达到稳定，则选择信号变化最快的溶液的pH；若部分达到稳定部分未达稳定，则选择流通完成时刻信号与基线相差最大的溶液的pH。5.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，步骤3)采用下述方法I或II对芯片表面修饰的羧...
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