孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法技术

本发明专利技术提供了一种孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法。其步骤为：取孕鼠胎盘，预处理后注入含有琼脂糖、四氧化三铁、无血清的DMEM F12培养基和青霉素链霉素的混合液，待凝结后将胎盘剪碎，在磁力作用下吸附含铁的胎盘组织，用胶原酶II溶液重悬，酶消化后加入DMEM F12完全培养基钝化胶原酶II，洗涤后再加入DMEM F12完全培养基重悬，得到的组织块在贴壁生长后长出血管平滑肌细胞，进行传代培养。本发明专利技术提供的孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法与传统方法相比，能够简便高效的提取胎盘血管平滑肌细胞，整个过程不需要把血管游离出来，操作更加简单，减少了组织暴露于空气中的时间，降低了细胞污染的风险。

【技术实现步骤摘要】
孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法
本专利技术属于生物
，涉及一种孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法。
技术介绍
孕鼠胎盘血管平滑肌细胞是从孕晚期孕鼠胎盘动脉血管中分离得来并可体外培养的细胞，由于人胎盘不易获取且个体差异大，而鼠作为常用的动物模型其标本易获得并且其对药物等刺激的反应与人体相似度高，可以很好的模拟人体，故孕鼠胎盘血管平滑肌细胞是研究胎盘血管病变医学基础的重要工具。然而目前尚没有成熟的方法可以从孕鼠胎盘上分离培养血管平滑肌细胞。我们在分离的过程中发现，虽然传统分离血管平滑肌细胞的方法有组织贴块法和酶消化法，但这两种方法的前提是要分离出血管，而孕鼠胎盘血供丰富，绒毛组织与血管紧密相连，只要在胎盘上出现开口就会涌出血液而使得视野内看不清血管，故胎盘血管分离难度很高而且耗费时间，使得分离的血管数量少、活性差、污染风险高，其分离培养的细胞数目少且成功率低。
技术实现思路
为了解决孕鼠胎盘血管分离难度大等问题，本专利技术的目的在于提供一种孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离及传代方法，更为简便高效的来提取胎盘血管平滑肌细胞的方法。本专利技术的目的通过以下技术方案得以实现：本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离方法，其包括以下步骤：将孕鼠胎盘置于预冷的PBS液中，从脐带血管打入PBS液以冲洗胎盘血管残存的血液；按照琼脂糖、四氧化三铁、无血清的DMEM F12培养基和青霉素链霉素以(0.05g‑2g)：(0.05g‑2g)：(9.9mL‑100mL)：(0.1mL‑5mL)的比例称取并混合煮沸得到琼脂糖混合液，将琼脂糖混合液打入脐动脉，然后将胎盘置入冰冷的PBS液中，从而使琼脂糖混合液凝固；去除胎盘脐带及胎盘外包绕的结缔组织，并将胎盘剪成碎块；将胎盘碎块置入含有冰冷的PBS液的培养管中，并将培养管固定于磁力架上，使含铁的胎盘组织吸附至管内侧壁；在磁力作用下，用冰冷的PB...

【技术特征摘要】
1.一种孕鼠胎盘血管平滑肌细胞的分离方法，其包括以下步骤：将孕鼠胎盘置于预冷的PBS液中，从脐带血管打入PBS液以冲洗胎盘血管残存的血液；按照琼脂糖、四氧化三铁、无血清的DMEMF12培养基和青霉素链霉素以(0.05g-2g)：(0.05g-2g)：(9.9mL-100mL)：(0.1mL-5mL)的比例称取并混合煮沸得到琼脂糖混合液，将琼脂糖混合液打入脐动脉，然后将胎盘置入冰冷的PBS液中，从而使琼脂糖混合液凝固；去除胎盘脐带及胎盘外包绕的结缔组织，并将胎盘剪成碎块；将胎盘碎块置入含有冰冷的PBS液的培养管中，并将培养管固定于磁力架上，使含铁的胎盘组织吸附至管内侧壁；在磁力作用下，用冰冷的PBS液洗涤被吸附的含铁的胎盘组织，然后用胶原酶II溶液重悬含铁的胎盘组织；培养用胶原酶II溶液重悬的含铁的胎盘组织以消化血管外连带组织，然后于磁力作用下吸附含铁组织至培养管内侧壁，然后加入DMEMF12完全培养基钝化所吸附组织中的胶原酶II，并用PBS液洗涤，接着加入DMEMF12完全培养基重悬，重悬后的组织块经贴壁生长后得到孕鼠胎盘血管平滑肌细胞。2.根据权利要求1所述的分离方法，其中，消化血管外连带组织的步骤为：培养用胶原酶II溶液重悬的含铁的胎盘组织，培养过程中每隔10-30min，用滴管吹吸组织，使其外层细胞脱落，培养时间为60-120min。3.根据权利要求1或2所述的分离方法，其中，所述胶原酶II溶液为用无血清的DMEMF12培养基配制的浓度为80U/mL经过滤后的胶原酶II溶液。4.根据权利要求1或2所述的分离方法，其中，所述培养条件为37℃，5％CO2的环境。5.根据权利要求1所述的分离方法，其中，所述DMEMF12完全培养基为含有15％血清和1％青霉素链霉菌素的DMEM...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘慧荣，贺春雨，张苏丽，王美丽，白丽娜，王鹏丽，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京,11