The invention discloses a method for bone tissue cell culture megalobramaamblycephala, comprising the following steps: 1) were selected as experimental materials in March age megalobramaamblycephala; 2) from Megalobrama amblycephala caudal and ribs and the surrounding connective tissue; 3) PBS washing, tissue wetting in fetal calf serum, with the tweezers in the bottom of the culture bottle; 4) the flask inverted into the incubator culture; 5) daily observation of the cell growth, changing the culture medium; 6) to confluence degree reached 80% after trypsin, obtain primary bream bone tissue cells; 7) to megalobramaamblycephala primary bone cells confluence to 70~80% using trypsin digestion and passage cells, cells after centrifugation, resuspended and seeded in two new culture flask and cultured to obtain cell. The method is easy, simple operation, solves the sample size limit and trypsin digestion method using constraints, to provide material basis for fish bone growth research development day.
【技术实现步骤摘要】
一种团头鲂骨组织细胞培养的方法
本专利技术属于细胞
,更具体涉及一种团头鲂骨组织细胞的培养方法,适用于日后有关骨组织细胞分化过程、骨骼发育、骨组织矿化过程、基因筛选与功能分析等方面的研究。技术背景鱼类相较于哺乳动物而言具有很多技术性的优点,因此越来越多的研究学者选择用鱼类作为研究模型(请见:RafaelMS,MarquesCL,ParameswaranV,etal.Fishbone-derivedcelllines:analternativeinvitrocellsystemtostudybonebiology[J].JournalofAppliedIchthyology,2010,26(26):230-234),截止目前一些鱼类已作为研究模型成功用以骨骼发育及相关疾病的研究。现今国外已有利用组织块培养法进行鱼类骨组织细胞培养的报道,如Vijayakumar等利用颌部、椎骨及鳃弓组织块成功培养了斑马鱼骨组织细胞(请见:VijayakumarP,LaizéV,CardeiraJ,etal.Developmentofaninvitrocellsystemfromzebrafishsuitabletostudybonecelldifferentiationandextracellularmatrixmineralization[J].Zebrafish,2013,10(4):500-509.);Marques等以鳃弓及椎骨组织块为材料培养了金头鲷钙化组织细胞(请见:MarquesCL,RafaelMS,CancelaML,etal.Establishm ...
【技术保护点】
一种团头鲂骨组织细胞培养的方法,其步骤是:1)选取3月龄团头鲂为材料,实验前用体积比为0.01%的高锰酸钾溶液浸泡20分钟,放入无菌操作台内,用75%酒精对鱼体进行消毒;2)用消毒过的手术刀剪去尾鳍,自泄殖孔后方切下整个尾部,剥离尾部鱼体表皮肤后,在解剖显微镜下剥离尾椎及肋骨周围的肌肉,仅留靠近团头鲂尾椎和肋骨及周围的结缔组织;3)PBS:pH=7.4冲洗3次后,用眼科剪将组织块剪碎至2 mm
【技术特征摘要】
1.一种团头鲂骨组织细胞培养的方法,其步骤是:1)选取3月龄团头鲂为材料,实验前用体积比为0.01%的高锰酸钾溶液浸泡20分钟,放入无菌操作台内,用75%酒精对鱼体进行消毒;2)用消毒过的手术刀剪去尾鳍,自泄殖孔后方切下整个尾部,剥离尾部鱼体表皮肤后,在解剖显微镜下剥离尾椎及肋骨周围的肌肉,仅留靠近团头鲂尾椎和肋骨及周围的结缔组织;3)PBS:pH=7.4冲洗3次后,用眼科剪将组织块剪碎至2mm3,将组织块在胎牛血清中润湿后,用镊子将其放入培养瓶底部,25cm2培养瓶约接种20个组织块;4)将培养瓶放入28℃恒温培养箱倒置培...
【专利技术属性】
技术研发人员:高泽霞,关柠楠,兰天,陈宇龙,
申请(专利权)人:华中农业大学,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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