一种兔正常角膜上皮细胞及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种兔正常角膜上皮细胞及其用途。该细胞命名为兔正常角膜上皮细胞RNCEC/HL‑032，保藏编号为CCTCC NO：C201677。其原代分离培养的方法为：新西兰兔正常角膜缘组织样品，经过消化后加入分散酶和DNase I作用，通过过滤、离心收集细胞，再用HL培养基重悬细胞，接种培养。其传代培养的方法为：细胞增殖至70～90%丰度时，用胰酶‑EDTA消化，再用DMEM中和；离心收集细胞，用HL培养基重悬细胞，接种培养。本发明专利技术的细胞建立的2D和3D培养系统，可用于角膜药物的动物替代实验，对药物的药理、毒理进行检测,建立一种新的角膜药物研究的实验动物替代模型。

【技术实现步骤摘要】
一种兔正常角膜上皮细胞及其用途
本专利技术属于细胞生物学领域，涉及一种兔正常角膜上皮细胞及其原代分离培养和传代培养方法与用途。
技术介绍
现代医学是建立在动物实验的基础上发展而来。无论是疫苗研发，器官移植、生理学、药理学、毒理学的研究，还是化妆品的开发，都是伴随实验动物的牺牲而来。如果取消动物实验，现代医学的发展将停滞不前，人类将不可能战胜疾病。目前，国际上对于动物实验公认的一个原则就是“替代、减少、优化”。首先，研究人员要尽量寻求动物活体实验的替代方案，例如，利用计算机动态仿真及细胞组织培养等离体技术。其中，细胞组织培养是目前应用最广泛的替代方法，特异性分化的上皮细胞与不同器官的特异性功能直接相关，如肺的气体交换功能、肾的过滤功能、肝的解毒及中和功能、胰腺细胞产生胰岛素、皮肤具有保护机体免受外界环境的伤害。目前，分离来自哺乳动物的原代上皮细胞的体外培养仍然是很困难的。应用目前的无血清培养基，有的只能进行短期的原代培养（存活数天，如肺和胰腺等上皮细胞），有的只能进行有限的传代培养，有的甚至根本不能体外培养（如肝、结肠、前列腺等上皮细胞），只有来自于人体皮肤的角化上皮细胞可以传代培养1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种兔正常角膜上皮细胞，其特征在于，分类命名为兔正常角膜上皮细胞RNCEC/HL‑032，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201677。

【技术特征摘要】
1.一种兔正常角膜上皮细胞，其特征在于，分类命名为兔正常角膜上皮细胞RNCEC/HL-032，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C201677。2.一种基于兔正常角膜上皮细胞RNCEC/HL-032的气-液3D培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、将插入式细胞培养皿内置物放入培养皿；步骤S2、用HL培养基重悬2x105上述正常角膜上皮细胞，然后接种到插入式细胞培养皿内置物中；步骤S3、培养皿中加入HL培养基；步骤S4、将放有内置物的培养皿放入湿热培养箱中培养，37℃，5％CO2，培养时长为48小时；步骤S5、将内置物内部及外围培养皿中的培养基更换为分化培养基(CEL...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶琳，李晖，王玲，魏高斌，叶立娜，王媛，殷国干，
申请(专利权)人：深圳市眼科医院，
类型：发明
国别省市：广东,44