一种全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种全面检测肉制品中N‑亚硝胺含量的方法，包括以下步骤：称取粉碎好的肉制品，加入乙腈、正己烷及无水硫酸镁，涡旋，超声提取，离心，倾出上清液，保留乙腈层弃去正己烷层，再用乙腈重复提取肉制品1‑3次，合并提取液，减压旋蒸至近干，再用乙腈定容；然后用C18/PSA粉末净化定容溶液，收集的上清液即为待测液样品；用气相色谱串联质谱仪检测待测样品，配制标准溶液及绘制曲线，结果计算即可完成。本方法具有耗时少、干扰性小、特异性强、灵敏度高、操作简便、设备成本较低、准确度及精确度高等优点。

Methods the content of N nitrosamines a comprehensive detection in meat products

The invention discloses a method for the content of N nitrosamines a comprehensive inspection of meat products, which comprises the following steps: weighing meat crushed, adding anhydrous acetonitrile, n-hexane and Magnesium Sulfate, vortex, ultrasonic extraction, centrifugation, pour out supernatant, keep the acetonitrile layer discard the n-hexane layer, and acetonitrile repeat the extraction of meat products 1 3 times, merging the extracted liquid, vacuum evaporation to nearly dry, constant volume with acetonitrile; then C18/PSA powder purification solution of constant volume, collect the supernatant for liquid samples; tandem mass spectrometry samples by gas chromatography, the preparation of standard solution and curve drawing, results the calculation can be completed. The method has the advantages of less time consumption, less interference, high specificity, high sensitivity, simple operation, low equipment cost, high accuracy and high accuracy, etc..

【技术实现步骤摘要】
一种全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法
本专利技术涉及食品安全领域，具体是一种全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法。
技术介绍
酒类、肉及鱼类腌制品、豆制品等食品中含有N-亚硝胺类化合物，该化合物为剧毒有机化合物，具有强烈的致癌、致畸和致突变性，是四大食品污染物之一。新鲜的食品中，亚硝胺类化合物的含量很低，但在运输、加工、储存等过程中很容易因缺氧、积热、微生物、霉变等因素产生各种各样的N-亚硝胺化合物；食品的来源不同、微生物种类不同、存放的时间不同，产生的N-亚硝胺化合物种类也会不同。近年来，我国虽然制定了N-亚硝胺检测方法，即GB／T5009.26-2003《食品中N-亚硝胺类的测定》。但该测定方法主要存在以下不足：（1）该方法只针对有限的4种亚硝胺化合物，而在食品中最为常见的N-亚硝胺有9种之多，因此现有的国家标准不能有效满足食品安全监测的需要。（2）该标准中样品的提取采用水蒸气蒸馏法，该方法作为传统的前处理技术，能较好的完成目标成分的分离，但通常要多次萃取、长时间蒸馏才能保证回收率，并且需要进一步的转移、浓缩，操作较为繁琐。（3）该测定方法采用的是热能分析仪法和高分辨质谱法，对仪器的特异性要求高，且价格较为昂贵，不便于该方法的推广及应用。随着对食品安全关注度的日益提高，建立一种高效快捷、覆盖全面、高灵敏度和高选择性的N-亚硝胺检测方法显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术针对现有亚硝胺检测方法存在的问题，提供一种耗时少、抗干扰性强、特异性强、灵敏度高、操作简便、成本较低、准确度高可同时检测肉类制品中9种N-亚硝胺含量的方法。为了实现以上目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法，包括以下步骤：（1）样品提取：称取Mg粉碎好的肉制品，加入乙腈、正己烷及无水硫酸镁，涡旋1-3min，超声提取10-30min，离心5-10min，倾出上清液，保留乙腈层弃去正己烷层，再用乙腈重复提取肉制品1-3次，合并提取液，减压旋蒸至近干，再用乙腈定容至VmL；（2）净化：量取定容后的溶液至装有C18/PSA粉末的具塞离心管中，涡旋1-3min，离心3-5min，收集的上清液即为待测液样品；（3）定性定量分析测定：取待测液样品进样，用气相色谱串联质谱仪分析检测，扫描N-亚硝胺的特征离子，得到待测样品的离子流色谱图，以N-亚硝胺的特征离子的保留时间和响应丰度比作为定性分析依据，以N-亚硝胺的特征离子响应强度作为定量分析依据；（4）配制标准溶液：配制浓度为1.0ng/mL~1000ng/mL的N-亚硝胺系列标准溶液，取标准溶液进样到气相色谱串联质谱仪，根据检测结果绘制标准曲线，以外标曲线法计算样品中的N-亚硝胺的浓度C；(5)结果计算：按以下公式计算肉制品中N-亚硝胺的含量X，X的单位为µg/kg；。进一步地，以上所述肉制品包括畜肉、禽肉、鱼肉的腌制品或熏制品。进一步地，以上所述乙腈与正己烷的体积比0.5-2:1。进一步地，以上所述肉制品与无水硫酸镁的质量比为2-4:1。进一步地，以上所述C18/PSA粉末中C18粉末与PSA粉末的的质量比为0.5-2:1。进一步地，以上步骤（1）所述减压旋蒸的温度为50-60℃。进一步地，以上步骤（1）所述超声提取的温度为35-40℃，超声频率为50-70kHZ。进一步地，以上步骤（1）所述离心的转速为3000-5000rpm；步骤（2）所述离心的转速为8000-12000rpm。进一步地，以上所述气相色谱串联质谱仪为气相色谱三重四级杆质谱联用仪。进一步地，以上采用气相色谱串联质谱仪检测时质谱单元的离子源采用EI源模式，离子源的温度为230-300℃，扫描模式采用SRM模式；气相色谱单元的进样口温度为200-300℃，初始温度设定为35-40℃，保温3min，以10℃/min升温至100℃，保温5min,再以20℃/min升温至220℃，保温7min，10℃/min升温至240-250℃，以氦气作为载气，恒流模式进行色谱分离，不分流进样，进样量为1-2µL。进一步地，本专利技术方法可同时检测肉制品中多种N-亚硝胺含量，所述N-亚硝胺包括N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基甲乙胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基二丙胺、N-亚硝基二丁胺、N-亚硝基二苯胺、N-亚硝基吡咯烷、N-亚硝基哌啶和N-亚硝基吗啉。进一步地，以上9种N-亚硝胺的气相色谱串联质谱特征离子及碰撞电压参数如下：注：标注*的离子为定量离子。与现有技术相比，本专利技术的优点及效益效果为：1、本专利技术方法通过将肉类制品经用乙腈提取样品中的目标亚硝胺，用正己烷除去样品中的油脂，浓缩，浓缩液经C18/PSA分散固相萃取净化后，采用气相色谱串联质谱仪测定。本方法具有耗时少、干扰性小、特异性强、灵敏度高、操作简便、设备成本较低、准确度高可全面检测肉类制品中N-亚硝胺含量，方便推广应用。2、本方法采用C18/PSA粉末分散固相萃取净化，有效的去除干扰物质，比常见的蒸馏净化时间短，且除去干扰物质能力强，回收率高。3、本专利技术利用超声波的空化作用来提取肉制品的N-亚硝胺，不仅可提高提取效率，还可提高N-亚硝胺的提取率，进而提高测定结果的准确度。4、本专利技术采用气相色谱低分辨串联质谱法测定，串联质谱独特的SRM扫描方式，可以避免相同质量数离子的干扰，增强了对N-亚硝胺检测的特异性和准确性，且对仪器的要求低，成本低。5、本专利技术方法中N-亚硝胺的定量限为0.06~0.5µg/kg，检出限为0.02~0.2µg/kg，完全可以满足国家标准对肉类制品中N-亚硝胺的限量要求。附图说明图1为实施例1中N-亚硝胺标准品的总离子流色谱图；图2a、2b、2c和为实施例1中N-亚硝胺标准品的定量定性离子提取色谱图；图3a-3i为实施例1中N-亚硝胺标准品的标准曲线图；图4为实施例2中空白肉制品加9种N-亚硝胺标准品的总离子流色谱图；图5a、5b、5c为实施例2中空白肉制品加9种N-亚硝胺标准品的定量定性离子提取色谱图；图6为实施例2中空白肉类制品的总离子流色谱图；图7a、7b、7c为实施例2中空白肉类制品的定量定性离子提取色谱图。具体实施方式下面将结合具体实施方式对本专利技术进一步说明，但不限于本专利技术的保护范围。实施例1一种全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法，包括以下步骤：（1）样品提取：称取10g粉碎好的市售腊肠，加入20mL乙腈、10mL正己烷及2g无水硫酸镁，在转速为1000rpm涡旋1min，在温度为35℃、超声频率为60kHZ下超声提取15min，5000rpm下离心5min，倾出上清液，保留乙腈层弃去正己烷层，再用乙腈重复提取肉制品2次，合并提取液，50℃下减压旋蒸至近干，再用乙腈定容至5mL，摇匀；（2）净化：量取定容后的溶液1.5mL至装有C18/PSA粉末的2mL具塞离心管中，其中C18粉末为100mg、PSA粉末为50mg，涡旋1min，12000离心3min，收集的上清液即为待测液样品；（3）定性定量分析测定：取1.0µL待测液样品进样，用气相色谱串联质谱仪分析检测，扫描N-亚硝胺的特征离子，得到待测样品的离子流色谱图，以N-亚硝胺的特征离子的的保留时间和响应丰度比作为定性分析依据，以N-亚硝胺的特征离子响应强度作为定量分析依据。检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种全面检测肉制品中N‑亚硝胺含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）样品提取：称取M g粉碎好的肉制品，加入乙腈、正己烷及无水硫酸镁，涡旋1‑3min，超声提取10‑30min，离心5‑10min，倾出上清液，保留乙腈层弃去正己烷层，再用乙腈重复提取肉制品1‑3次，合并提取液，减压旋蒸至近干，再用乙腈定容至V mL；（2）净化：量取定容后的溶液至装有C18/PSA粉末的具塞离心管中，涡旋1‑3min，离心3‑5min，收集的上清液即为待测液样品；（3）定性定量分析测定：取待测液样品进样，用气相色谱串联质谱仪分析检测，扫描N‑亚硝胺的特征离子，得到待测样品的离子流色谱图，以N‑亚硝胺的特征离子的保留时间和响应丰度比作为质谱的定性分析依据，以N‑亚硝胺的特征离子响应强度作为定量分析依据；（4）配制标准溶液：配制浓度为1.0 ~1000 ng/mL的N‑亚硝胺系列标准溶液，取标准溶液进样到气相色谱串联质谱仪，根据检测结果绘制标准曲线，再以外标曲线法计算样品中的N‑亚硝胺的浓度C ；(5)结果计算：按以下公式计算肉制品中N‑亚硝胺的含量X，X的单位为µg/kg；

【技术特征摘要】
1.一种全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）样品提取：称取Mg粉碎好的肉制品，加入乙腈、正己烷及无水硫酸镁，涡旋1-3min，超声提取10-30min，离心5-10min，倾出上清液，保留乙腈层弃去正己烷层，再用乙腈重复提取肉制品1-3次，合并提取液，减压旋蒸至近干，再用乙腈定容至VmL；（2）净化：量取定容后的溶液至装有C18/PSA粉末的具塞离心管中，涡旋1-3min，离心3-5min，收集的上清液即为待测液样品；（3）定性定量分析测定：取待测液样品进样，用气相色谱串联质谱仪分析检测，扫描N-亚硝胺的特征离子，得到待测样品的离子流色谱图，以N-亚硝胺的特征离子的保留时间和响应丰度比作为质谱的定性分析依据，以N-亚硝胺的特征离子响应强度作为定量分析依据；（4）配制标准溶液：配制浓度为1.0~1000ng/mL的N-亚硝胺系列标准溶液，取标准溶液进样到气相色谱串联质谱仪，根据检测结果绘制标准曲线，再以外标曲线法计算样品中的N-亚硝胺的浓度C；(5)结果计算：按以下公式计算肉制品中N-亚硝胺的含量X，X的单位为µg/kg；。2.根据权利要求1所述全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法，其特征在于：所述肉制品包括畜肉、禽肉、鱼肉的腌制品或熏制品。3.根据权利要求1或2所述全面检测肉制品中N-亚硝胺含量的方法，其特征在于：所述乙腈与正己烷的体积比0.5-2:1。4.根据权利要求1或2所述全面检测肉制品中N-亚硝胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵庄，鲁毅翔，施晓光，许杨彪，刘向红，郭雯雯，张科明，赖青鸟，
申请(专利权)人：广西壮族自治区食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45