The invention provides a method for rapid detection of Mycoplasma in dairy cattle frozen semen, which relates to the technical field of detection method of mycoplasma infection in cattle, is thawed dairy cattle frozen semen centrifuged and the supernatant were added to DNA lysate and chloroform extraction, extracted by DNA, then PCR amplification, finally by agarose gel electrophoresis method to detect and observe the results; the detection method by using the PCR method, the establishment of rapid detection of nucleic acid based on the technology of cow mycoplasma, can obtain the results within 3 hours, greatly improve the detection efficiency for mycoplasma infection and treatment of disease and prevent the further spread of Mycoplasma to win time.
【技术实现步骤摘要】
一种快速检测奶牛冻精中支原体的方法
本专利技术涉及牲畜体内支原体感染检测方法
,具体涉及一种快速检测奶牛冻精中支原体的方法。
技术介绍
在冷冻精液的半永久性保存(-196℃)条件下,往往也能延长细菌、病毒、支原体、虫卵等生物体的存活时间。许多病原微生物可以通过精液传播,而且精液传播传染病的能量是很大的,l头带病公牛的冷冻精液可能在数年之内把某些传染病散播到全球几个大陆。现有资料表明:通过冷冻精液传播的一些牛病主要有:口蹄疫、牛结核病副结核病、牛布氏杆菌病、牛毛滴虫病、牛生殖器官弧菌病,各型钩端螺旋体病,支原体病、牛传染性鼻气管炎、传染性脓疤龟头包皮炎、牛病毒性腹泻和副流感、纤维乳头状瘤病、蓝舌病、牛白血病等。支原体是一类能在无活细胞培养基中繁殖的最小微生物,无细胞壁、繁殖形式多样、具有高度多形性。大部分支原体都是宿主特异性的黏膜常在菌,主要寄生在鼻腔,其次在乳腺。1976年首次报道牛支原体与牛呼吸系统疾病有关,1983年我国黎济申首次报道从患乳腺炎牛乳中牛分离到牛支原体。目前,牛支原体的分离培养鉴定虽然能够确诊,但操作复杂,所需条件高,主要通过支原体培养和生理生化特性鉴定,这些方法耗费时间长,一般需要3天左右,不利于支原体感染疾病的快速诊断。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足,本专利技术提供了一种快速检测奶牛冻精中支原体的方法,使得检测时间大大缩短,极大的提高了检测效率。(二)技术方案为实现以上目的,本专利技术通过以下技术方案予以实现:一种快速检测奶牛冻精中支原体的方法,步骤如下:(1)将奶牛冻精在常温下解冻2-3min,解冻后取50 ...
【技术保护点】
一种快速检测奶牛冻精中支原体的方法,其特征在于,步骤如下:(1)将奶牛冻精在常温下解冻2‑3min,解冻后取50uL置于1.5mL离心管中,在12000r/min转速下离心5min;(2)将离心后的上清液丢弃,加入0.5mL DNA提取裂解液,静置5min;(3)静置后继续加入100uL氯仿,混合均匀,12000r/min转速下离心3min,将上清液移到硅胶柱中,12000r/min转速下离心1min;(4)离心后,加入50uL蒸馏水洗脱DNA;(5)取2uL洗脱后的DNA加入到18uL PCR混合液中,进行PCR反应;(6)选用琼脂糖凝胶电泳检测方法,电泳20min,观察结果。
【技术特征摘要】
1.一种快速检测奶牛冻精中支原体的方法,其特征在于,步骤如下:(1)将奶牛冻精在常温下解冻2-3min,解冻后取50uL置于1.5mL离心管中,在12000r/min转速下离心5min;(2)将离心后的上清液丢弃,加入0.5mLDNA提取裂解液,静置5min;(3)静置后继续加入100uL氯仿,混合均匀,12000r/min转速下离心3min,将上清液移到硅胶柱中,12000r/min转速下离心1min;(4)离心后,加入50uL蒸馏水洗脱DNA;(5)取2uL洗脱后的DNA加入到18uLPCR混合液中,进行PCR反应;(6)选用琼脂糖凝胶电泳检测方法,电泳20min,观察结果。2.如权利要求1所述的快速检测奶牛冻精中支原体的方法,其特征在于,步骤(2)所述DNA提取裂...
【专利技术属性】
技术研发人员:巴桑旺堆,朱彦宾,李纯锦,罗布,平措占堆,德吉央宗,梁春芳,尼玛,旺久,贡嘎桑布,付丹丹,王闯,次仁卓玛,
申请(专利权)人:西藏自治区农牧科学院农业资源与环境研究所,
类型:发明
国别省市:西藏,54
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