一株在可溶性和非可溶性碳源诱导下高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌及构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及基因工程及微生物发酵领域，公开了一株在可溶性和不可溶性碳源诱导下高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌SEU‑7，其分类命名为Trichoderma reesei，菌株号SEU‑7，已保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2016492，保藏日期为2016年9月18日。本发明专利技术还公开了该基因工程菌的构建方法及其在不同碳源诱导下生产纤维素酶的应用。与现有技术相比，本发明专利技术利用同源重组技术构建了高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌，其在可溶性碳源和非可溶性碳源的诱导下，均表现出极高的产纤维素酶的能力。同时，本发明专利技术所产纤维素酶液表现出了比Rut‑C30的纤维素酶液更好的糖化能力。

Trichoderma viride gene engineering bacterium induced by high yield cellulase under soluble and non soluble carbon source and construction method and application thereof

The present invention relates to the field of gene engineering and microbial fermentation, discloses a strain of Trichoderma reesei gene engineering bacteria SEU induced cellulase in soluble and insoluble carbon source 7, the classification of named Trichoderma reesei, SEU strain No. 7, has been preserved in China typical micro biological preservation center, the preservation number is CCTCC M 2016492, the collection date is September 18, 2016. The invention also discloses the construction method of the gene engineering bacterium and the production of cellulase under the induction of different carbon sources. Compared with the prior art, Trichoderma reesei gene engineering bacteria of the invention by homologous recombination technique to construct high yield of cellulase, the induced soluble carbon source and non soluble carbon source, showed a high ability to produce cellulase. At the same time, the invention of cellulase liquid showed better ability than Rut cellulase saccharification liquid C30.

【技术实现步骤摘要】
一株在可溶性和非可溶性碳源诱导下高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌及构建方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一株在可溶性和非可溶性碳源诱导下高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
纤维素是自然界中广泛存在的大分子多糖聚合物。利用纤维素酶可以将纤维素降解成细菌可发酵利用的糖类用以生产生物燃料、生物基精细化工产品和药品。纤维素酶是一类复杂的酶混合物，主要包含内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。纤维素的彻底降解需要这三种酶的协同作用。内切葡聚糖酶作用于纤维素的非结晶区，将纤维素降解成不同长度的纤维寡糖，然后纤维寡糖在纤维二糖水解酶即外切葡聚糖酶的作用下降解成纤维二糖，最后纤维二糖在β-葡萄糖苷酶的作用下水解成可发酵性的葡萄糖。里氏木霉因能够产生大量(高达100g/L)胞外纤维素酶，且是人工安全的微生物菌种，成为了重要的纤维素酶工业生产菌株(Journalofbiotechnology,1994,37(3):193-200)。然而，只有少量的β-葡萄糖苷酶(BGL1)分泌到细胞外，而工业上收集纤维素酶只是收集上清液中的纤维素酶，无法同时收集胞内的β-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在可溶性和非可溶性碳源诱导下高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌，其分类命名Trichoderma reesei，菌株号SEU‑7，已保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2016492，保藏日期为2016年9月18日。

【技术特征摘要】
1.一种在可溶性和非可溶性碳源诱导下高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌，其分类命名Trichodermareesei，菌株号SEU-7，已保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏编号为CCTCCM2016492，保藏日期为2016年9月18日。2.根据权利要求1所述的里氏木霉基因工程菌，其特征在于，它是在里氏木霉Rut-C30中过表达bgl1-his基因得到，所述的bgl1-his基因序列如SEQIDNo.：1所示。3.权利要求2所述的里氏木霉基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取里氏木霉Rut-C30的RNA并进行反转录；(2)以里氏木霉Rut-C30的cDNA为模版设计bgl1-linker-his基因扩增引物，进行PCR扩增；(3)将步骤(2)中PCR扩增后所得产物采用同源重组的方法插入质粒中，得到重组质粒pBGL-his；(4)将步骤(3)中得到的重组质粒pBGL-his导入里氏木霉Rut-C30，筛选得到稳定遗传的转化子，即乳糖诱导下高产纤维素酶的里氏木霉基因工程菌，命名为SEU-7。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的linker的序列为catcatcatcatccgggcggcagcgtgaaaaaacgc；所述的bgl1-linker-his基因扩增引物中，上游引物的核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：林凤鸣，李程程，周乐，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32